本文關(guān)鍵詞：茶黃素對(duì)膠原引起的血小板功能的影響及其抗血栓作用研究　出處：《浙江大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 茶黃素 血小板活化 動(dòng)脈血栓 膠原 脾酪酸激酶(Syk)

【摘要】：心血管疾病,包括中風(fēng)、血栓性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化等,一直以來(lái)是導(dǎo)致死亡的主要原因之一,血小板在心血管疾病的發(fā)展過(guò)程中扮演著重要的角色,因此抗血小板治療成為預(yù)防和治療心血管疾病的主要手段。然而目前臨床使用的抗血小板藥物,如阿司匹林,存在著出血、引起胃腸道不適等副作用,尋找天然活性來(lái)源的抗血小板物質(zhì)成為預(yù)防和治療心血管疾病研究的熱點(diǎn)之一。紅茶是世界上消費(fèi)量最大的飲料之一,流行病學(xué)研究表明飲用紅茶具有預(yù)防心血管疾病的作用,其臨床研究結(jié)果多集中在降血脂,改善血液循環(huán)等領(lǐng)域,在對(duì)血小板活性的影響方面較少涉及。茶黃素作為紅茶的特征品質(zhì)成分,具有抗氧化、抗炎、抗癌等多種生物活性,在心血管健康方面也表現(xiàn)出保護(hù)作用。然而,顯少有針對(duì)茶黃素單體在血小板活性影響以及抗血栓作用方面的研究,尤其在其作用機(jī)理的深入探討方面研究甚少。本研究探索了紅茶主要活性成分茶黃素對(duì)膠原引起血小板活性的影響以及其抗血栓作用。以茶黃素為研究對(duì)象,將從人體血液中分離出來(lái)洗滌血小板,建立不同的研究體系,利用血小板聚集儀、流式細(xì)胞儀、血栓素A2試劑盒、免疫印跡等技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)性的分析,并結(jié)合體內(nèi)實(shí)驗(yàn),利用C57小鼠研究茶黃素的止血功能和對(duì)體內(nèi)血栓形成的影響。研究結(jié)果表明,茶黃素可以明顯抑制由膠原、ADP、U46619等多種刺激劑引起的人體血小板聚集,且呈現(xiàn)出劑量依賴(lài)效應(yīng)。利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行單個(gè)血小板激活檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn),茶黃素對(duì)蛇毒引起的P-選擇素表達(dá)和纖維蛋白原的結(jié)合有明顯的抑制作用。茶黃素可以抑制血小板在纖維蛋白原上的鋪展,由此證明了茶黃素對(duì)血小板從外到內(nèi)的信號(hào)通路的抑制活性。免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明,茶黃素抑制膠原引起的血小板內(nèi)脾酪酸激酶(Syk)的磷酸化,由此推測(cè),Syk是茶黃素抑制膠原引起的血小板活性的一個(gè)重要的作用靶點(diǎn)。通過(guò)應(yīng)用Syk的抑制劑白杉醇(Piceatannol)進(jìn)行對(duì)比和疊加實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步證明了茶黃素對(duì)血小板的作用靶點(diǎn)是Syk,同時(shí),Syk下游兩個(gè)蛋白PLCγ2和Akt的磷酸化受到相應(yīng)抑制,也在本實(shí)驗(yàn)中得以驗(yàn)證。小鼠體內(nèi)活性研究中,利用斷尾技術(shù)研究茶黃素的止血活性,利用三氯化鐵誘導(dǎo)形成體內(nèi)動(dòng)脈血栓模型,并采用血小板的體內(nèi)熒光標(biāo)記技術(shù),研究茶黃素的抗血栓活性。茶黃素組和對(duì)照組相比,使小鼠腸系膜動(dòng)脈血管形成血栓性堵塞的時(shí)間明顯延長(zhǎng),充分證明了茶黃素對(duì)血小板功能的抑制。本文明確了茶黃素的體內(nèi)外抗血栓活性,首次探明茶黃素抑制血小板活化的作用靶點(diǎn),即茶黃素能夠通過(guò)抑制血小板活化通路中的Syk以及PLCγ2磷酸化進(jìn)而抑制由膠原引起的人體血小板活化和聚集,并能夠顯著抑制小鼠體內(nèi)血栓的形成。作為飲食來(lái)源的天然活性成分,茶黃素表現(xiàn)出良好的抑制血小板活化的作用和抗血栓能力,有力地詮釋了長(zhǎng)期飲用紅茶對(duì)人體心血管健康的保護(hù)作用。
[Abstract]:Cardiovascular disease, including stroke, thrombotic disease, atherosclerosis, has been one of the leading causes of death, platelet plays an important role in the development of cardiovascular disease, so antiplatelet therapy has become the main means of prevention and treatment of cardiovascular disease. However, current clinical use of antiplatelet drugs, such as aspirin, there is bleeding that cause gastrointestinal discomfort and other side effects, looking for sources of natural active antiplatelet substances become one of the hot research of cardiovascular disease prevention and treatment. Black Tea is one of the world's largest consumption of beverages, epidemiological studies have shown that drinking Black Tea has the role of prevention of cardiovascular disease, the clinical research results focused on reducing blood lipid, improve blood in the field of circulation, influence on platelet activity less involved. As the characteristics of Black Tea theaflavins The quality of ingredients with antioxidant, anti-inflammatory, anti-cancer and other biological activity on cardiovascular health also showed protective effects. However, few in theaflavin monomers in platelet activity and antithrombotic effect research, especially in the aspects of its mechanism in-depth study. This study explored the little active ingredients of tea Black Tea caused flavin platelet activity and antithrombotic of collagen. With theaflavins as the research object, will be isolated from human blood platelet washing out, establish different research systems, using platelet aggregation analyzer, flow cytometry, thromboxane A2 kit, immunoblotting analysis system the combined with in vivo, using effect of hemostatic function of tea C57 mice and emodin on thrombosis in vivo. The results showed that theaflavins can significantly inhibit the Collagen, ADP, U46619 and other stimuli induced human platelet aggregation, and showed a dose dependent effect. The use of a single activated platelet flow cytometry showed that P- selection of theaflavin on venom from the expression and binding of fibrinogen has obvious inhibiting effect of theaflavins can inhibit platelet. Spreading on fibrinogen, which showed inhibitory activity of theaflavin on platelet signaling from outside to inside. Immunoblotting experiments showed that theaflavins inhibited collagen induced platelet in spleen tyrosine kinase (Syk) phosphorylation, indicating that Syk is an important target of platelet activity of theaflavins inhibition of collagen induced by Syk. The inhibitor paclitaxel (Piceatannol) were compared and the superposition experiment, further proved that the targets of theaflavins on platelet is Syk, at the same time, the downstream of Syk two Protein PLC gamma 2 and Akt phosphorylation by the corresponding inhibition, can be verified in this experiment. Study on the activity of mice, hemostatic activity of tea by using tail technology, in arterial thrombosis induced by ferric chloride, and the platelet in vivo fluorescence labeling technique, study the antithrombotic activity of theaflavins theaflavins. Group compared with the control group of mice mesenteric arterial thrombotic formation blocking time was prolonged, fully demonstrated the inhibition of theaflavins on platelet function. Antithrombotic activity Lear the theaflavins in vitro and in vivo, the target for the first time proven theaflavins inhibit platelet activation, namely theaflavin can pass inhibition of platelet activation pathway in Syk and PLC gamma 2 phosphorylation and inhibition of human platelet activation and aggregation induced by collagen, and can inhibit thrombosis in mice form As a natural active ingredient of dietary sources, theaflavins show good inhibition of platelet activation and antithrombotic ability, which strongly explain the long-term protection of black tea on human cardiovascular health.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R151

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