本文關鍵詞：基于汞介導的適體信標和金納米復合物檢測汞和MTs的新原理新方法

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【摘要】：汞(Mercury)是一種劇毒的重金屬,它對人類健康及生態(tài)環(huán)境的危害已經引起了人們的廣泛關注。金屬硫蛋白(metallothioneins,MTs)是一類低分子量、能結合大量重金屬離子的熱穩(wěn)定性蛋白質,具有許多重要生物學功能。此外,金屬硫蛋白作為環(huán)境中重金屬污染的生物標志物也已被廣泛應用。因此,建立一種簡便、靈敏、快速、實用的檢測汞和金屬硫蛋白的新方法對環(huán)境監(jiān)測、健康風險評價,以及生物學功能的研究都具有重要意義。本文第二章基于汞介導的適體分子信標,建立了雙通道測定汞和金屬硫蛋白的新方法。實驗設計了一條只在5′端標有熒光基團(6-FAM)、富含T堿基的寡核苷酸(TRO),將其置于p H=8.5的Tris HCl緩沖溶液中,當存在汞離子時,通過T Hg2+ T結構的形成,6-羧基熒光素(6-FAM)標記的富T寡核苷酸能夠折疊形成適體分子信標,首次發(fā)現,末端形成的T Hg2+ T結構能夠通過熒光共振能量轉移猝滅6-FAM的熒光;金屬硫蛋白與汞離子有著很強的結合力,實驗發(fā)現加入MTs之后,體系的熒光恢復,表明MTs能夠與Hg2+結合,破壞T Hg2+ T結構�；赥 Hg2+ T結構的形成和破壞,建立了雙通道測定汞離子和金屬硫蛋白的新方法。Hg2+的濃度為1.42×10-8~3.0×10-7 mol·L-1時,體系的?F與Hg2+濃度有良好的線性關系�；貧w方程為?F= 18.79+301.2c(×10-7 mol·L-1),r=0.9991,檢出限為4.28×10-9 mol·L-1。MTs的濃度在5.63×10-9~2.75×10-7mol·L-1范圍內,與體系熒光峰值強度變化呈良好線性關系,線性回歸方程為ΔF= 42.27+365.3c(×10-7 mol·L-1),r=0.9987,檢出限為1.69×10-9 mol·L-1。本文設計的適體分子信標只需對核酸探針進行單熒光基團標記,節(jié)約了實驗成本;富T寡核苷酸鏈末端形成的T Hg2+ T結構能夠猝滅熒光基團的熒光這一發(fā)現,為新型分子信標的構建提供了新思路和實驗依據。提出的方法已用于實際樣品的檢測,進一步證明本方法的可行性。本文第三章建立了基于金納米粒子-吖啶橙表面能量轉移檢測金屬硫蛋白的新方法。實驗發(fā)現,加入金納米粒子之后,熒光染料吖啶橙被金納米粒子表面吸附,通過表面能量轉移導致體系熒光強度減弱。加入MTs之后,MTs能與金納米作用形成復合物,吖啶橙脫離金納米表面,熒光恢復。據此建立了一種測定MTs的熒光傳感分析法。在最優(yōu)實驗條件下,體系最大熒光峰位于524 nm。MTs濃度在9.3×10-9~1.5×10-7 mol·L-1范圍內,與體系熒光強度變化值呈良好線性關系,線性回歸方程為ΔF=3.798+337.3c(×10-7 mol·L-1),r=0.9965,檢出限為2.79×10-9 mol·L-1。該方法靈敏度高,便于操作�？梢詰糜趯嶋H樣品中MTs的測定。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R114

【參考文獻】

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本文編號：1227056