本文關(guān)鍵詞：三種天然食品功能因子抗氧化活性的多元評價

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【摘要】：目的：活性氧引發(fā)的機(jī)體氧化應(yīng)激已被證實(shí)與人體多種慢性疾病密切相關(guān)。具有抗氧化活性的天然食品功能因子能在一定程度上減少機(jī)體氧化損傷，其抗氧化活性評價方法對其研究開發(fā)至關(guān)重要。雖然目前已有抗氧化活性細(xì)胞篩選（CAA）等方法用于快速評價功能因子的抗氧化活性，但不能全面反映功能因子的時-量-效關(guān)系。本研究利用與常見慢性疾病密切相關(guān)的H2O2、高濃度葡萄糖、油酸作為誘導(dǎo)劑，造成不同程度細(xì)胞氧化損傷，分別添加食品功能因子硫辛酸、槲皮素、白藜蘆醇進(jìn)行干預(yù)，通過多種生理生化指標(biāo)評價其抗氧化活性及其時-量-效關(guān)系，并比較它們在不同損傷環(huán)境下的作用差異，探究三種植物營養(yǎng)素干預(yù)氧化損傷的作用特點(diǎn)，為功能因子活性評價及開發(fā)利用提供理論依據(jù)。 方法：選用人肝癌細(xì)胞株（HepG2）作為實(shí)驗細(xì)胞，以過氧化氫、高糖、油酸作為誘導(dǎo)劑，通過對細(xì)胞狀態(tài)的不同影響程度，選擇適宜濃度確定為造模濃度。分別添加硫辛酸、槲皮素、白藜蘆醇，在不同損傷時間、保護(hù)時間、作用濃度等影響因素下對損傷細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，采用噻唑藍(lán)（MTT）法檢測損傷細(xì)胞存活率、熒光探針（DCFH-DA）法檢測細(xì)胞自由基水平，測定細(xì)胞氧化還原狀態(tài)相關(guān)指標(biāo)。主成分分析法處理實(shí)驗數(shù)據(jù)，，在相同模型下比較三種功能因子的作用效果。采用熒光定量PCR測定相關(guān)基因表達(dá)水平，探討發(fā)生保護(hù)作用、量效關(guān)系的可能機(jī)制。 結(jié)果：三種誘導(dǎo)劑通過降低細(xì)胞存活率、升高自由基水平，代償性地刺激模型氧化還原系統(tǒng)，造成不同程度細(xì)胞氧化損傷。100μM H2O2作用細(xì)胞4h造成急性細(xì)胞損傷，33mM高糖和0.5mM油酸損傷相對緩和，作用細(xì)胞48h以上時造成顯著損傷。在不同損傷水平下，功能因子能不同程度緩解氧化損傷。短期內(nèi)，三種抗氧化劑低濃度均不足以改善損傷，高濃度改善效果顯著。長期作用時，各濃度硫辛酸均能保持良好保護(hù)作用；適宜濃度白藜蘆醇和槲皮素有良好抗氧化作用，但高濃度白藜蘆醇出現(xiàn)活性轉(zhuǎn)化。100μM硫辛酸在24h之內(nèi)的H2O2損傷模型中抗氧化作用最強(qiáng)，10μM白藜蘆醇在48h高糖損傷中起最佳抗氧化作用，50μM白藜蘆醇作用72h時，在高糖和油酸模型中均發(fā)生促氧化作用。10μM槲皮素在48h油酸損傷模型中起最佳抗氧化作用。抗氧化劑在最佳抗氧化濃度下干預(yù)損傷，能上調(diào)Nrf2相關(guān)基因表達(dá)、下調(diào)促氧化基因表達(dá)，緩解模型氧化應(yīng)激程度，改善細(xì)胞氧化還原狀態(tài)。 結(jié)論：在不同程度細(xì)胞損傷模型中評價硫辛酸、白藜蘆醇、槲皮素的作用，初步得到三種功能因子針對不同誘導(dǎo)劑造成氧化損傷的時-量-效關(guān)系，體現(xiàn)不同能量水平的損傷狀況下，研究抗氧化劑的種類、需要量、活性可能會發(fā)生的變化，并能直觀評價其抗氧化作用的時-量-效關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R151.3

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 孫曉東;田澎;焦s

本文編號：1205044