本文關鍵詞：三種天然食品功能因子抗氧化活性的多元評價

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【摘要】：目的：活性氧引發(fā)的機體氧化應激已被證實與人體多種慢性疾病密切相關。具有抗氧化活性的天然食品功能因子能在一定程度上減少機體氧化損傷，其抗氧化活性評價方法對其研究開發(fā)至關重要。雖然目前已有抗氧化活性細胞篩選（CAA）等方法用于快速評價功能因子的抗氧化活性，但不能全面反映功能因子的時-量-效關系。本研究利用與常見慢性疾病密切相關的H2O2、高濃度葡萄糖、油酸作為誘導劑，造成不同程度細胞氧化損傷，分別添加食品功能因子硫辛酸、槲皮素、白藜蘆醇進行干預，通過多種生理生化指標評價其抗氧化活性及其時-量-效關系，并比較它們在不同損傷環(huán)境下的作用差異，探究三種植物營養(yǎng)素干預氧化損傷的作用特點，為功能因子活性評價及開發(fā)利用提供理論依據(jù)。 方法：選用人肝癌細胞株（HepG2）作為實驗細胞，以過氧化氫、高糖、油酸作為誘導劑，通過對細胞狀態(tài)的不同影響程度，選擇適宜濃度確定為造模濃度。分別添加硫辛酸、槲皮素、白藜蘆醇，在不同損傷時間、保護時間、作用濃度等影響因素下對損傷細胞進行干預，采用噻唑藍（MTT）法檢測損傷細胞存活率、熒光探針（DCFH-DA）法檢測細胞自由基水平，測定細胞氧化還原狀態(tài)相關指標。主成分分析法處理實驗數(shù)據(jù)，，在相同模型下比較三種功能因子的作用效果。采用熒光定量PCR測定相關基因表達水平，探討發(fā)生保護作用、量效關系的可能機制。 結果：三種誘導劑通過降低細胞存活率、升高自由基水平，代償性地刺激模型氧化還原系統(tǒng)，造成不同程度細胞氧化損傷。100μM H2O2作用細胞4h造成急性細胞損傷，33mM高糖和0.5mM油酸損傷相對緩和，作用細胞48h以上時造成顯著損傷。在不同損傷水平下，功能因子能不同程度緩解氧化損傷。短期內，三種抗氧化劑低濃度均不足以改善損傷，高濃度改善效果顯著。長期作用時，各濃度硫辛酸均能保持良好保護作用；適宜濃度白藜蘆醇和槲皮素有良好抗氧化作用，但高濃度白藜蘆醇出現(xiàn)活性轉化。100μM硫辛酸在24h之內的H2O2損傷模型中抗氧化作用最強，10μM白藜蘆醇在48h高糖損傷中起最佳抗氧化作用，50μM白藜蘆醇作用72h時，在高糖和油酸模型中均發(fā)生促氧化作用。10μM槲皮素在48h油酸損傷模型中起最佳抗氧化作用。抗氧化劑在最佳抗氧化濃度下干預損傷，能上調Nrf2相關基因表達、下調促氧化基因表達，緩解模型氧化應激程度，改善細胞氧化還原狀態(tài)。 結論：在不同程度細胞損傷模型中評價硫辛酸、白藜蘆醇、槲皮素的作用，初步得到三種功能因子針對不同誘導劑造成氧化損傷的時-量-效關系，體現(xiàn)不同能量水平的損傷狀況下，研究抗氧化劑的種類、需要量、活性可能會發(fā)生的變化，并能直觀評價其抗氧化作用的時-量-效關系。
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R151.3

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：1205044