本文關(guān)鍵詞：GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及免疫功能的影響

  更多相關(guān)文章： γ-氨基丁酸 Treg 氧化還原調(diào)節(jié) 高脂膳食 基因表達(dá)

【摘要】：膳食結(jié)構(gòu)向高脂肪和高熱量的方向轉(zhuǎn)變，是造成肥胖的重要誘因。肥胖是一種低水平的慢性炎性反應(yīng)，與代謝綜合征（Metabolic syndrome，MS）的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cell，Treg）能夠有效的控制炎癥，但在肥胖的小鼠和人群模型里，其數(shù)量均出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，下降的原因尚未闡明。有研究觀察到γ-氨基丁酸（Gamma-aminobutyric acid，GABA）可以顯著提高高脂膳食小鼠脾臟中Treg的數(shù)量，可能對(duì)預(yù)防炎性和胰島素抵抗有關(guān)鍵作用。所以本研究旨在探討高脂膳食和GABA干預(yù)對(duì)小鼠免疫功能的影響及其對(duì)Treg的調(diào)節(jié)作用。 (1)40只C57BL/6小鼠（18.5±0.54g，6周齡，雄性）被隨機(jī)分為四組：對(duì)照組（正常日糧，3.85Kcal/g）、高脂組（高脂日糧，4.73Kcal/g)和兩個(gè)劑量的GABA組（高脂日糧，4.73Kcal/g)；GABA組小鼠飲用水中分別加入0.06%和0.2%的GABA，正常組和高脂組小鼠均飲用純凈水。每周稱量小鼠體重，20周末結(jié)束實(shí)驗(yàn)，分離胸腺、脾臟稱重。脾臟分為三份，一份用來(lái)提取組織RNA，一份勻漿測(cè)定氧化還原相關(guān)指標(biāo)，一份用來(lái)進(jìn)行CD4+、CD8+、CD4+CD25+CD127-/lowTreg亞群的流式細(xì)胞分選。用流式細(xì)胞儀測(cè)定Treg細(xì)胞內(nèi)的自由基（Reactive oxygen species，ROS）和線粒體膜電位（Mitochondrialmembrane potential，△Ψm）水平。采用RT-PCR的方法測(cè)定Treg功能相關(guān)基因、凋亡相關(guān)基因、代謝相關(guān)基因和脾臟氧化還原關(guān)鍵基因的表達(dá)。(2)為了證明GABA對(duì)淋巴細(xì)胞的直接保護(hù)作用和對(duì)分泌功能的影響，進(jìn)行了體外GABA干預(yù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)選用高脂誘導(dǎo)6周的C57/BL6小鼠和正常小鼠的脾臟。分為5組：正常組（Control）；高脂組（HFD）；高脂加不同濃度GABA干預(yù)組：HFD+0.1μM GABA、HFD+1μM GABA和HFD+10μMGABA。測(cè)定小鼠脾臟混合培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞內(nèi)的ROS水平、△Ψm和IL-2、IL-10、IL-35和IL-6的分泌水平。 (1)高脂組小鼠體重顯著（P0.05）高于對(duì)照組，口服GABA可使體重顯著（P0.05）降低。高脂組小鼠胸腺、脾臟臟器指數(shù)顯著低于對(duì)照組（P0.05），口服GABA可以顯著緩解脾臟胸腺、脾臟萎縮。高脂組小鼠脾臟中ROS、丙二醛（MDA）水平顯著（P0.05）高于對(duì)照組，還原型和氧化型谷胱甘肽比值（GSH/GSSG）、總抗氧化能力（T-AOC）顯著（P0.05）低于對(duì)照組，說(shuō)明脾臟出現(xiàn)顯著的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過(guò)氧化，口服0.06%的GABA可顯著（P0.05）升高GSH/GSSG和T-AOC的水平，但是在清除MDA的效果不甚顯著；口服0.2%的GABA能夠顯著緩解氧化應(yīng)激和清除MDA。高脂組小鼠脾臟中氧化還原狀態(tài)失衡，可能與PI3K、Akt1、Nrf2及其下游的抗氧化酶GCLC和GST mRNA表達(dá)顯著下調(diào)（P0.05）有關(guān)，GABA干預(yù)可以上調(diào)這條抗氧化信號(hào)通路的表達(dá)。脾臟中的CD4+/CD8+比值、Treg數(shù)量的顯著下降（P0.05）表明其免疫功能受到抑制。相關(guān)性分析表明CD4+/CD8+比值、Treg數(shù)量與脾臟中的氧化還原狀態(tài)具有顯著相關(guān)性。高脂組小鼠脾臟Treg功能和發(fā)育有關(guān)的Foxp3和其分泌的抗炎性細(xì)胞因子IL-35、IL-10和TGF-β基因表達(dá)顯著（P0.05）下調(diào)，口服GABA能夠顯著（P0.05）上調(diào)Treg功能相關(guān)基因的表達(dá)。高脂組小鼠脾臟Treg內(nèi)AMPK mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)（P0.05），mTORC1、S6K1和4E-BP1顯著下調(diào)（P0.05），說(shuō)明AMPK抑制了mTORC1介導(dǎo)的合成代謝，口服GABA可以顯著上調(diào)mTORC1介導(dǎo)的合成代謝。高脂組Treg中的ROS水平顯著（P0.05）上升，△Ψm顯著（P0.05）下降。GABA對(duì)Treg的保護(hù)作用可能與Nrf2/Bcl-2信號(hào)通絡(luò)有關(guān)，GABA可以顯著上調(diào)（P0.05）Nrf2、Bcl-2的基因表達(dá)水平，顯著下調(diào)促凋亡蛋白（P0.05）Bax的基因表達(dá)水平。（2）GABA可以顯著提高（P0.05）高脂膳食小鼠脾臟混合培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞△Ψm水平，并可以顯著降低（P0.05）其ROS生成，具有劑量效應(yīng)關(guān)系。高脂膳食可以顯著（P0.05）下調(diào)IL-2、IL-10、IL-35的水平，顯著上調(diào)（P0.05）IL-6的水平，說(shuō)明在高脂誘導(dǎo)的條件下，脾臟出現(xiàn)了慢性炎性反應(yīng)。加入GABA干預(yù)之后，細(xì)胞因子趨于正常水平，無(wú)顯著劑量效應(yīng)關(guān)系。淋巴細(xì)胞的ROS和△Ψm水平與細(xì)胞因子的分泌量顯著相關(guān)。 主要結(jié)論:在長(zhǎng)期高脂膳食的條件下，脾臟的抗氧化系統(tǒng)失衡，細(xì)胞內(nèi)的自由基水平提高導(dǎo)致Treg長(zhǎng)期暴露于氧化應(yīng)激的環(huán)境，Treg的數(shù)量下降�？诜礼ABA改善了Treg的氧化還原微環(huán)境，并且激活了Treg內(nèi)部的抗凋亡機(jī)制，，從而減少其凋亡。在高脂膳食的情況下，不僅Treg的數(shù)量的減少，并且其功能受到抑制，代謝紊亂，分泌功能減弱。不同劑量的GABA均可以顯著改善混合培養(yǎng)淋巴細(xì)胞的分泌功能，但無(wú)顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：γ-氨基丁酸 Treg 氧化還原調(diào)節(jié) 高脂膳食 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R151
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 中英文縮略語(yǔ)對(duì)照表7-10
• 1 緒論10-17
• 1.1 氧化應(yīng)激對(duì)免疫功能的影響10-12
• 1.2 GABA系統(tǒng)在免疫的分布和功能12
• 1.3 GABA對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用12-14
• 1.4 營(yíng)養(yǎng)失衡對(duì)免疫功能的影響14-15
• 1.5 待解決問(wèn)題及主要研究?jī)?nèi)容15-16
• 1.6 研究的目的及意義16-17
• 2 材料與方法17-23
• 2.1 試劑與儀器17
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)原料及試劑17
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-23
• 2.2.1 動(dòng)物飼喂及分組17-18
• 2.2.2 樣品采集18
• 2.2.3 氧化還原狀態(tài)指標(biāo)檢測(cè)及方法18-19
• 2.2.4 免疫功能檢測(cè)指標(biāo)及方法19-21
• 2.2.5 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)及方法21-22
• 2.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析22-23
• 3 結(jié)果與討論23-46
• 3.1 GABA對(duì)高脂膳食小鼠體重和臟器指數(shù)的影響23-24
• 3.1.1 GABA對(duì)高脂膳食小鼠體重的影響23
• 3.1.2 GABA對(duì)高脂膳食小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響23-24
• 3.2 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟氧化還原狀態(tài)的影響24-28
• 3.2.1 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟ROS的影響24
• 3.2.2 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟氧化還原指標(biāo)的影響24-26
• 3.2.3 GABA氧化還原調(diào)節(jié)對(duì)高脂膳食小鼠脾臟的保護(hù)作用26-28
• 3.3 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的影響28-32
• 3.3.1 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的影響1928-29
• 3.3.2 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞基因表達(dá)的影響2029-31
• 3.3.3 T淋巴細(xì)胞亞群與氧化還原狀態(tài)相關(guān)性分析的結(jié)果31-32
• 3.4 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟Treg影響32-41
• 3.4.1 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟Treg數(shù)量影響32-33
• 3.4.2 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟Treg功能相關(guān)基因表達(dá)水平的影響33-34
• 3.4.3 GABA對(duì)高脂膳食膳食小鼠脾臟Treg細(xì)胞ROS水平的影響34-35
• 3.4.4 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟Treg代謝相關(guān)基因的影響35-37
• 3.4.5 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟Treg線粒體膜電位的影響37
• 3.4.6 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟Treg線粒體相關(guān)基因的影響37-39
• 3.4.7 GABA對(duì)高脂膳食脾臟Treg Nrf2/Bcl-2抗凋亡信號(hào)通路的影響39-41
• 3.4.8 相關(guān)性分析41
• 3.5 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟混合培養(yǎng)淋巴細(xì)胞的影響41-46
• 3.5.1 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟混合培養(yǎng)淋巴細(xì)胞ROS生成的影響42
• 3.5.2 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟混合培養(yǎng)淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子分泌的影響42-44
• 3.5.3 GABA對(duì)高脂膳食小鼠脾臟混合培養(yǎng)淋巴細(xì)胞△Ψm的影響44-45
• 3.5.4 相關(guān)性分析45-46
• 主要結(jié)論與展望46-47
• 主要結(jié)論46
• 展望46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 附錄54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 施宏華;孫雅文;李稻;;UCP2與細(xì)胞凋亡[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2008年12期

本文編號(hào)：1116770