本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)期雙酚A暴露對(duì)成年小鼠焦慮和抑郁行為的影響及其神經(jīng)機(jī)制

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【摘要】：雙酚A(Bisphenol-A, BPA)是一種具有弱雌激素活性的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,與雌激素受體有一定的親和力,可通過多種途徑進(jìn)入人體(食品、飲料、皮膚接觸等)危害健康。BPA對(duì)腦和行為發(fā)育的影響引起廣泛關(guān)注,已有研究發(fā)現(xiàn)發(fā)育期BPA暴露可影響仔鼠成年后的焦慮和抑郁行為。由于性激素參與調(diào)控成年動(dòng)物的腦結(jié)構(gòu)和功能,且成年動(dòng)物暴露于BPA環(huán)境的時(shí)間更長(zhǎng),因此推測(cè)長(zhǎng)期BPA暴露可能會(huì)影響成年動(dòng)物行為。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)期BPA暴露不僅改變成年動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶行為,還影響海馬神經(jīng)元的突觸可塑性,突觸蛋白和NMDA受體表達(dá)。推測(cè)長(zhǎng)期BPA暴露可能會(huì)影響成年小鼠的焦慮和抑郁行為。 雌激素調(diào)節(jié)焦慮和抑郁情緒與下丘腦-垂體-腎上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal, HPA)軸密切相關(guān),海馬被認(rèn)為是參與調(diào)節(jié)HPA軸功能的主要組成部分,也是雌激素影響焦慮和抑郁的主要靶位。雌激素主要通過ERβ調(diào)控認(rèn)知和情緒反應(yīng),選擇性ERβ受體激動(dòng)劑可以減弱小鼠焦慮程度,并且ERβ基因敲除的雌性小鼠表現(xiàn)出焦慮程度的增加。抑郁癥和Y-氨基丁酸(GABA)(?)下相關(guān),其中GABAA-2α亞單位主要分布于海馬和杏仁核,與抑郁癥的病理生理學(xué)相關(guān),并可調(diào)節(jié)焦慮行為。雄性GABAA-2α基因敲除小鼠表現(xiàn)出抑郁程度的加重。那么,BPA對(duì)焦慮和抑郁行為的影響是否是與ERβ、GABAA-2αR表達(dá)的變化有關(guān)呢? 本研究通過將成年小鼠長(zhǎng)期暴露于BPA環(huán)境中,應(yīng)用曠場(chǎng)、明暗穿梭箱、鏡子迷宮、高架十字迷宮等模型分別觀察成年小鼠的自發(fā)活動(dòng)、探究、焦慮行為,利用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜋z測(cè)小鼠的抑郁行為,探討長(zhǎng)期BPA暴露對(duì)成年小鼠情緒性行為的影響；檢測(cè)腦和血清里性激素水平；運(yùn)用Western Blot方法檢測(cè)小鼠海馬腦區(qū)ERp和GABAA-2α受體表達(dá),探討長(zhǎng)期BPA暴露對(duì)成年小鼠行為影響的分子機(jī)制。 研究?jī)?nèi)容： 通過對(duì)成年期小鼠雙酚A染毒,觀察長(zhǎng)期雙酚A暴露對(duì)小鼠焦慮及抑郁行為的影響；長(zhǎng)期雙酚A暴露對(duì)小鼠血清和腦里睪酮和雌二醇含量的變化的影響；長(zhǎng)期雙酚A暴露對(duì)小鼠雌激素受體-β(estrogen receptor-β, ER-β)、伽馬氨基丁酸-2α(GABAA-2α)受體相對(duì)含量的影響。 研究方法： 清潔級(jí)9周齡健康ICR小鼠,按體重隨機(jī)分為雌雄各5組。雙酚A(0.04、0.4、4、40mg/kg)從第10周開始進(jìn)行灌胃染毒,對(duì)照組給予同體積的溶媒。染毒12周之后,采用放射免疫法測(cè)定腦和血液里睪酮含量和雌二醇含量的變化；依次運(yùn)用曠場(chǎng)、明暗穿梭箱、鏡子迷宮、高架十字迷宮、強(qiáng)迫游泳模型等行為測(cè)試儀器測(cè)試雌雄小鼠的焦慮和抑郁行為：Western blot檢測(cè)小鼠海馬腦區(qū)ERβ和GABAA-2αR蛋白表達(dá)情況,探討其可能的分子機(jī)制。 研究結(jié)果： 1.10周齡小鼠體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,暴露12周后,雌雄出現(xiàn)極顯著性別差異F(1,118)=3.509,p=0.01,雄鼠體重顯著高于雌鼠(p0.01); BPA暴露組與同性別對(duì)照組相比,體重沒有顯著差異。BPA暴露對(duì)雌、雄小鼠生殖器官/體重沒有顯著影響。 2.BPA暴露對(duì)雌鼠腦和血清雌二醇含量均沒有顯著影響,但BPA暴露明顯降低腦和血清的睪酮水平,特別是0.4mg/kg BPA組的血清睪酮含量顯著低于對(duì)照組(p0.05) 3.行為檢測(cè)結(jié)果：1)曠場(chǎng)行為檢測(cè)發(fā)現(xiàn),BPA暴露12周對(duì)成年小鼠的自發(fā)活動(dòng)和探究行為沒有明顯影響,但可以消除小鼠5mmin跑格數(shù)和中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間的性別差異。2)明暗箱測(cè)試發(fā)現(xiàn),BPA抑制了雄性活動(dòng)性,并消除其性別差異。3)鏡子迷宮行為檢測(cè)發(fā)現(xiàn),BPA暴露可提高雌鼠的活動(dòng)性.性別因素顯著影響小鼠鏡區(qū)停留時(shí)間(F(1,118)=3.965,p=0.049),但不影響鏡區(qū)與非鏡區(qū)的穿梭次數(shù)。 4)高架十字迷宮行為檢測(cè)發(fā)現(xiàn),正常小鼠進(jìn)入開放臂次數(shù)和開放臂停留時(shí)間表現(xiàn)出雄鼠高于雌鼠的性別差異(p0.05),表明正常雄鼠比雌鼠表現(xiàn)出弱的焦慮樣狀態(tài)。然而,BPA暴露減少雄鼠卻增加雌鼠進(jìn)入開放臂的次數(shù)和開放臂停留時(shí)間,特別是0.4～40mg/kg/d BPA暴露后,與同性別的對(duì)照組間出現(xiàn)顯著性差異(p0.01和p0.05)；同時(shí),BPA因微弱增加雄鼠而減少雌鼠封閉臂停留時(shí)間,誘導(dǎo)該參數(shù)的性別差異(p0.05)。這些結(jié)果提示長(zhǎng)期BPA暴露可增強(qiáng)雄鼠卻減弱雌鼠的焦慮樣狀態(tài),并因此消除其性別差異,甚至反向誘導(dǎo)出雄鼠高于雌鼠焦慮狀態(tài)的性別差異。正常小鼠開放臂和封閉臂的總進(jìn)入次數(shù)表現(xiàn)出雄鼠高于雌鼠的性別差異(p0.05),表明正常雄鼠比雌鼠具有更高的活動(dòng)性。但是,BPA暴露顯著減少雄鼠進(jìn)入開放臂和封閉臂的總次數(shù),特別是0.4和40mg/kg/d BPA暴露組與同性別對(duì)照組間出現(xiàn)顯著性差異(P0.05),提示長(zhǎng)期BPA暴露可抑制雄鼠的活動(dòng)性,并因此消除其性別差異。5)強(qiáng)迫游泳行為檢測(cè)發(fā)現(xiàn),BPA暴露×性別交互作用和BPA暴露因素均顯著影響小鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的靜止不動(dòng)時(shí)間(F(4,110)=5.014,p=0.001; F(4,115)=3.028, p=0.021),但性別因素沒有影響。正常小鼠強(qiáng)迫游泳時(shí)的靜止不動(dòng)時(shí)間表現(xiàn)出雌鼠高于雄鼠的性別差異(p0.05),表明正常雌鼠比雄鼠具有更高的抑郁情緒；但是,0.04-40mg/kg/d BPA暴露均顯著延長(zhǎng)雄鼠的靜止不動(dòng)時(shí)間,并因此消除其性別差異。以上結(jié)果提示,BPA暴露顯著增加雄鼠的抑郁程度。 4.進(jìn)一步的Western blot檢測(cè)顯示,長(zhǎng)期BPA暴露顯著下調(diào)成年雄性小鼠海馬腦區(qū)ERβ蛋白表達(dá),促進(jìn)雌性而抑制雄性小鼠海馬內(nèi)GABAA-2aR表達(dá)。 結(jié)論： 長(zhǎng)期BPA暴露可性別特異性的影響成年小鼠的焦慮和抑郁行為,其中BPA對(duì)雄鼠焦慮和抑郁情緒具有加劇作用,這種影響可能與雄鼠腦和血清內(nèi)的睪酮水平的減低,海馬腦區(qū)ERp和GABAA-2aR蛋白表達(dá)水平下調(diào)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A 成年期 焦慮 抑郁 ERβ GABAA-2αR
【學(xué)位授予單位】：浙江師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-13
• 符號(hào)說明13-15
• 第一章 緒論15-22
• 1 BPA概述15-19
• 2 雌激素與焦慮和抑郁19-20
• 3 BPA暴露對(duì)非生殖行為的影響20
• 4 ERβ、GABA受體與焦慮和抑郁行為20-21
• 5 本研究的目的及意義21-22
• 第二章 雙酚A暴露的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生殖、生長(zhǎng)和激素水平22-27
• 1 引言22
• 2 動(dòng)物來源22
• 3 主要試劑和儀器22-23
• 3.1 試劑22
• 3.2 主要儀器22-23
• 4 實(shí)驗(yàn)方法23
• 4.1 動(dòng)物處理23
• 4.2 性激素含量測(cè)定23
• 4.3 數(shù)據(jù)處理23
• 5 結(jié)果23-25
• 5.1 體重、生殖器官/體重比23-24
• 5.2 血清和腦內(nèi)性激素含量24-25
• 6 討論25-27
• 第三章 雙酚A長(zhǎng)期暴露對(duì)成年小鼠焦慮及抑郁行為的影響27-36
• 1 引言27-28
• 2 實(shí)驗(yàn)方法28-30
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物28
• 2.2 行為測(cè)試28-30
• 2.2.1 曠場(chǎng)行為檢測(cè)28-29
• 2.2.2 明暗箱行為檢測(cè)29
• 2.2.3 鏡子迷宮行為檢測(cè)29
• 2.2.4 高架十字迷宮行為檢測(cè)29-30
• 2.2.5 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)30
• 2.3 數(shù)據(jù)處理30
• 3 結(jié)果30-34
• 3.1 曠場(chǎng)行為30-31
• 3.2 明暗箱行為31-32
• 3.3 鏡子迷宮實(shí)驗(yàn)32
• 3.4 高架十字迷宮32-34
• 3.5 強(qiáng)迫游泳34
• 4 討論34-36
• 第四章 雙酣A長(zhǎng)期暴露對(duì)成年小鼠腦內(nèi)ERβ、GABA_A-2α受體蛋白表達(dá)的影響36-44
• 1 前言36-37
• 2 材料和方法37-41
• 2.1 動(dòng)物37
• 2.2 主要儀器和試劑37
• 2.3 蛋白樣品的制備及Western blot分析37-38
• 2.4 方法38-41
• 2.4.1 溶液配制38-39
• 2.4.2 蛋白提取39
• 2.4.3 蛋白總量的測(cè)定39-40
• 2.4.4 Western blot40-41
• 2.5 統(tǒng)計(jì)分析41
• 3 結(jié)果41-42
• 4 討論42-44
• 4.1 BPA特異性影響雄鼠焦慮和抑郁樣行為與雄激素水平和海馬ERβ42-43
• 4.2 海馬腦區(qū)GABA_A-2αR蛋白表達(dá)和BPA誘導(dǎo)的焦慮和抑郁行為43-44
• 第五章 結(jié)論44-46
• 創(chuàng)新點(diǎn)及不足、進(jìn)一步研究的科研設(shè)想44-46
• 參考文獻(xiàn)46-59
• 附錄59-61
• 致謝61-63
• 攻讀學(xué)位論文期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄63-65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號(hào)：1096801