本文關鍵詞：基于AFM研究二硫化鉬和農藥對淀粉樣纖維化過程的影響

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【摘要】：引起淀粉樣變性疾病的危險因素是多種多樣的,發(fā)現(xiàn)及干預可控因素對防治這類疾病的發(fā)病率有著重要意義。細胞外淀粉樣纖維化沉積是淀粉樣變性疾病的重要原因之一,目前雖有文獻報道化學物質與淀粉樣纖維化過程之間存在聯(lián)系,但是對于納米材料和農藥與淀粉樣變性關系的研究還不夠系統(tǒng)。已有的報道主要集中在基于流行病學和活體實驗的相關研究,可以分析得出宏觀層面的疾病原因或疾病預防對策。鑒于在分子水平研究分子間相互作用有助于獲取更多化學生物的信息,為解析兩者相互作用提供理論依據,因此有必要在分子水平上研究納米材料和農藥等化學物質對淀粉樣纖維化過程的影響。本論文選取雞蛋清溶菌酶作為淀粉樣纖維化模型,利用原子力顯微鏡(Atomic Force Microscope,AFM)成像技術研究環(huán)境因素對淀粉樣纖維化過程的影響。研究內容如下：1.基于AFM研究二硫化鉬納米片對淀粉樣纖維化過程的影響將不同種類的二硫化鉬納米片與溶菌酶共孵育,然后利用AFM成像技術對比和分析單純溶菌酶與共孵育樣品的淀粉樣纖維化過程的差別,并利用其他技術手段,例如硫磺素T熒光光譜、圓二色譜和內源熒光光譜驗證AFM結果并進行機理解釋。研究結果表明,二硫化鉬納米片能夠促進淀粉樣纖維的形成,并在同種二硫化鉬納米片中,隨著納米片濃度的增大促進作用更加明顯；單層二硫化鉬納米片的促進作用明顯高于少層二硫化鉬納米片的促進作用。這可能是由于溶菌酶和二硫化鉬納米片之間存在疏水作用、靜電作用和范德華力等分子間相互作用使得溶菌酶在二硫化鉬納米片表面濃度富集；同時吸附在表面的溶菌酶發(fā)生的構象變化可形成聚集模版,這兩個因素均可促進淀粉樣纖維的形成。2.基于原子力顯微鏡研究農藥對淀粉樣纖維化過程的影響將不同種類的農藥與溶菌酶共孵育,獲取不同孵育時間的共孵育樣品,然后通過AFM成像技術與數(shù)據統(tǒng)計方法分析單純溶菌酶與共孵育樣品的淀粉樣纖維化過程的差別。研究結果發(fā)現(xiàn),七種農藥對溶菌酶淀粉樣纖維的形貌特征均沒有明顯的影響,然而三氯殺螨醇、甲基硫菌靈和氟氯氰菊酯縮短了淀粉樣纖維生長的指數(shù)生長期,對溶菌酶淀粉樣纖維化過程有促進作用,其他四種農藥(三唑酮、樂果、百菌清和西維因)沒有明顯的影響作用。根據表面等離子體共振技術和色氨酸內源熒光光譜推測這可能是由于三氯殺螨醇、甲基硫菌靈和氟氯氰菊酯能夠與溶菌酶結合后,使得蛋白質構象發(fā)生變化而促進了淀粉樣纖維的形成。
【關鍵詞】：原子力顯微鏡 淀粉樣纖維 二硫化鉬 農藥 溶菌酶
【學位授予單位】：湖南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 本文所用英文縮略詞表10-11
• 第1章 緒論11-26
• 1.1 淀粉樣變性的介紹及分類11-13
• 1.2 引起淀粉樣變性的危險因素13-16
• 1.2.1 遺傳因素13
• 1.2.2 非遺傳因素13-16
• 1.3 淀粉樣纖維的研究方法16-25
• 1.3.1 光譜分析法16-21
• 1.3.2 顯微鏡分析法21-24
• 1.3.3 其他分析方法24-25
• 1.4 本論文擬開展的研究工作25-26
• 第2章 AFM研究二硫化鉬納米片對淀粉樣纖維化過程的影響26-42
• 2.1 前言26-27
• 2.2 實驗部分27-30
• 2.2.1 主要試劑和儀器27-28
• 2.2.2 實驗方法28-30
• 2.3 結果與討論30-41
• 2.3.1 二硫化鉬納米片的表征30-32
• 2.3.2 淀粉樣纖維化過程的AFM表征32-36
• 2.3.3 淀粉樣纖維化過程的ThT動力學表征36-37
• 2.3.4 淀粉樣纖維化過程的蛋白質構象變化監(jiān)測37-39
• 2.3.5 機理的討論39-41
• 2.4 小結41-42
• 第3章 AFM研究農藥對淀粉樣纖維化過程的影響42-55
• 3.1 前言42
• 3.2 實驗部分42-47
• 3.2.1 主要試劑和儀器42-44
• 3.2.2 實驗方法44-47
• 3.3 結果與討論47-54
• 3.3.1 農藥影響淀粉樣纖維化過程的AFM監(jiān)測47-50
• 3.3.2 農藥影響淀粉樣纖維化過程的ThT動力學表征50-51
• 3.3.3 SPR考察農藥與溶菌酶的相互作用51-53
• 3.3.4 內源熒光光譜對農藥與溶菌酶之間相互作用的考察53-54
• 3.4 小結54-55
• 結論55-56
• 參考文獻56-65
• 附錄A 攻讀學位期間所發(fā)表的學術論文目錄65-66
• 致謝66-67

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本文編號：1075302