發(fā)布時(shí)間：2017-10-20 16:20

  本文關(guān)鍵詞：丙烯酰胺誘導(dǎo)的神經(jīng)絲改變的干預(yù)機(jī)制

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【摘要】：目的丙烯酰胺(acrylamide, ACR)作為一種乙烯基單體,是生產(chǎn)聚丙烯酰胺的原料；聚丙烯酰胺在工業(yè)上應(yīng)用十分廣泛。目前已知ACR具有多種毒性,如致癌性、遺傳毒性、神經(jīng)毒性、生殖毒性等。近年來,ACR的神經(jīng)毒性備受關(guān)注。職業(yè)暴露于ACR的神經(jīng)毒作用的主要臨床表現(xiàn)為共濟(jì)失調(diào)、骨骼肌肉無力、認(rèn)知障礙、四肢麻木；在電鏡下ACR中毒的主要病理表現(xiàn)為腫脹的軸突末端神經(jīng)絲(neurofilaments, NFs)堆積。鈣蛋白酶(calpain)作為一類依賴鈣離子(Ca2+)激活的中性半胱氨酸水解酶,具有降解NFs的作用,在ACR誘導(dǎo)的神經(jīng)病變中發(fā)揮重要作用。因此,本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠ACR亞慢性中毒及鈣蛋白酶抑制劑calpeptin(CP)干預(yù)模型,觀察大鼠行為學(xué)指標(biāo)變化,檢測神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度及calpain活性、NFs含量在中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的變化,探討ACR誘導(dǎo)的NFs改變的干預(yù)機(jī)制。方法1.將36只無特定病原體級的成年健康Wistar雌性大鼠隨機(jī)分為4組,每組各9只。A組為空白對照組,給予生理鹽水腹腔注射(intraperitoneal injection, i.p.); B組為CP對照組,給予200μg/kg CP (i.p.); C組為ACR中毒模型組,給予30mg/kg ACR (i.p.); D組為CP干預(yù)模型組,在給予大鼠30mg/kg ACR 1h后,給予200μg/kg CP(i.p.)干預(yù)。每周隔天給予ACR染毒,3次／周,連續(xù)4周；每周隔天給予CP干預(yù),早晚各一次,6次／周,連續(xù)四周。2.染毒期間,每周進(jìn)行一次體重的測量及步態(tài)評分、后肢撐力指標(biāo)的測定。(1)步態(tài)評分：觀察大鼠的自由活動(dòng)情況,并根據(jù)其步態(tài)受損程度進(jìn)行賦分,分別為1-4分。1分為正常步態(tài)、2分為輕度異常步態(tài)、3分為中度異常步態(tài)、4分為重度異常步態(tài)。每只大鼠觀測3次,取平均值。(2)后肢撐力：將大鼠從距離著陸的水平地面30cm高處自由水平落下,測量雙后肢爪尖滑開的最遠(yuǎn)距離,記為后肢撐力指數(shù),單位為cm。每只大鼠測量3次,取平均值。3.染毒結(jié)束后第二日處死大鼠,提取大腦及坐骨神經(jīng)組織。制備大腦細(xì)胞懸液,使用臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)檢查細(xì)胞的成活率。使用鈣離子熒光探針(Flua-2/AM)負(fù)載,測定細(xì)胞懸液熒光強(qiáng)度,計(jì)算Ca2+濃度。4.將大腦、坐骨神經(jīng)組織進(jìn)行勻漿、離心提取上清液并進(jìn)行蛋白定量,使用具有熒光特性的calpain substrate Ⅱ結(jié)合calpain,以7-氨基-4-甲基香豆素為標(biāo)準(zhǔn)熒光物質(zhì),測定熒光強(qiáng)度,計(jì)算calpain活性。5.應(yīng)用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白免疫印跡方法,對大腦、坐骨神經(jīng)組織中NFs含量進(jìn)行半定量分析。結(jié)果1.大鼠體重的改變?nèi)径窘K點(diǎn),與空白對照組相比,CP對照組無顯著變化(P0.05), ACR中毒模型組大鼠體重降低了11.3%(P0.01),而CP干預(yù)模型組無顯著變化(P0.05)；與ACR中毒模型組相比,CP干預(yù)模型組大鼠體重升高了8.3%(P0.01)。2.大鼠步態(tài)評分、后肢撐力的改變(1)步態(tài)評分：染毒終點(diǎn),與空白對照組相比,CP對照組無顯著差異(P0.05), ACR中毒模型組及CP干預(yù)模型組大鼠步態(tài)評分分別升高了167%(P0.01)、100%(P0.01)；與ACR中毒模型組相比,CP干預(yù)模型組大鼠步態(tài)評分降低了25.1%(P0.01)。(2)后肢撐力：染毒終點(diǎn),與空白對照組相比,CP對照組無顯著差異(P0.05), ACR中毒模型組及CP干預(yù)模型組大鼠后肢撐力指數(shù)分別升高了76.7%(P0.01)、49.5%(P0.01)；與ACR中毒模型組相比,CP干預(yù)模型組大鼠后肢撐力指數(shù)降低了15.4%(P0.01)。3.大腦組織細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的改變與空白對照組相比,CP對照組Ca2+濃度無顯著變化(P0.05); ACR中毒模型組Ca2+濃度顯著升高了44.6%(P0.01)；CP干預(yù)模型組Ca2+濃度有所升高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與ACR中毒模型組相比,CP干預(yù)模型組Ca2+濃度顯著降低了22.6%(P0.01)。4.大腦、坐骨神經(jīng)組織內(nèi)calpain活性的改變(1)大腦calpain活性的改變與空白對照組相比,CP對照組calpain活性顯著降低了14.3%(P0.01)；ACR中毒模型組及CP干預(yù)模型組大鼠calpain活性分別升高了21.9%(P0.01)、11.5%(P0.01)。與ACR中毒模型組相比,CP干預(yù)模型組calpain活性顯著降低了8.5%(P0.01)。(2)坐骨神經(jīng)calpain活性的改變與空白對照組相比,CP對照組無顯著差異(P0.05), ACR中毒模型組及CP干預(yù)模型組大鼠calpain活性分別升高了27.6%(P0.01)、11.7%(P0.01)；與ACR中毒模型組相比,CP干預(yù)模型組大鼠calpain活性降低了12.4%(P0.01)。5.大腦、坐骨神經(jīng)組織內(nèi)NFs含量的改變(1)大腦組織內(nèi)NFs含量的變化與空白對照組相比,CP對照組NFs三個(gè)亞基低分子量神經(jīng)絲(light neurofilament, NF-L)、中分子量神經(jīng)絲(medium neurofilament, NF-M)、高分子量神經(jīng)絲(heavy neurofilament, NF-H)含量分別升高了2.3%、降低了0.8%、升高了0.3%,變化均無顯著性差異(P0.05); ACR中毒模型組三個(gè)亞基分別升高了85.3%(P0.01)、74.3％(P0.01)、82.9％(P0.01); CP干預(yù)模型組三個(gè)亞基分別升高了32.4%(P0.01)、30.6%(P0.01)、32.3%(P0.01)；與ACR中毒模型組相比,CP干預(yù)模型組三個(gè)亞基分別降低了28.5%(P0.01)、25.1%(P0.01)、27.7%(P0.01)。(2)坐骨神經(jīng)組織內(nèi)NFs含量的變化與空白對照組相比,CP對照組NF-L、NF-M、NF-H含量分別升高了14.3%(P0.05)、28.6％(P0.01)、10.1％(P0.05), ACR中毒模型組三個(gè)亞基分別降低了56.0%(P0.01)、55.5％(P0.01)、39.3％(P0.01), CP干預(yù)模型組三個(gè)亞基分別降低了25.6%(P0.01)、33.6%(P0.01)、16.9%(P0.05)；與ACR中毒模型組相比,CP干預(yù)模型組三個(gè)亞基分別升高了69.1%(P0.01)、49.2%(P0.01)、36.9%(P0.01)。結(jié)論1.成功建立了大鼠ACR亞慢性中毒及CP干預(yù)模型。2.CP能夠逆轉(zhuǎn)ACR所引起的Ca2+濃度升高、calpain活性升高的趨勢；CP在大腦、坐骨神經(jīng)組織內(nèi)均可逆轉(zhuǎn)ACR所致NFs的變化趨勢。3.ACR可能是通過激活Ca2+-calpain-NFs通路導(dǎo)致其神經(jīng)病。
【關(guān)鍵詞】：丙烯酰胺 鈣蛋白酶抑制劑 鈣蛋白酶 神經(jīng)絲 神經(jīng)病
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 符號說明14-16
• 前言16-22
• 材料和方法22-31
• 結(jié)果31-44
• 討論44-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文66-67
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表67

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5 王艷春,呂莉;彌散性血管內(nèi)凝血模型的改進(jìn)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)吉林軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年02期

6 陳小囡;;蜂膠對慢性酒精性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[J];健康研究;2009年02期

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8 王紫;陳瑜;羅軍;周建華;;槐杞黃干預(yù)小鼠IgA腎病模型的療效觀察以及機(jī)制探討[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2011年11期

9 孫旖;夏振娜;袁伯俊;張曉芳;陸國才;;LT-Y008的骨髓保護(hù)作用及機(jī)制[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2013年03期

10 周厚廣,鮑遠(yuǎn)程,陸建明;提高帕金森病動(dòng)物模型制作成功率的方法學(xué)探討及模型綜合評價(jià)[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2005年04期

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1 閻明;張喜紅;劉莉;孟繁立;張莉;朱萍;;美能對酒精性肝纖維化大鼠的干預(yù)及治療研究[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

2 王勇炫;吳偉康;吳以嶺;張選紅;;蜈蚣有效部位抗心肌缺血的NO機(jī)制研究[A];2009年全國中藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

3 周友龍;李建生;高劍峰;;老齡大鼠腦缺血再灌注微血管再生的變化意義[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第五屆基礎(chǔ)理論研究專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

4 趙萬軍;周輝;韓勇;何永江;;丹參對激素性股骨頭壞死血管內(nèi)凝血的影響[A];2007年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)骨科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省抗癌協(xié)會(huì)骨軟腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

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本文編號：1068157