發(fā)布時間：2017-10-20 15:19

  本文關(guān)鍵詞：PAS-Na對錳致大鼠基底核神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)影響的體外研究

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【摘要】：目的探討對氨基水楊酸鈉(PAS-Na)對體外染錳致大鼠基底核原代神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷、DNA損傷及谷氨酸（Glu）、谷氨酰胺（Gln）和甘氨酸（Gly）、γ-氨基丁酸（GABA）等氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)水平影響的體外研究。 方法（1）神經(jīng)元：培養(yǎng)至第八天的基底核神經(jīng)元，分別①經(jīng)0、25、50、100、200μmol/L氯化錳（MnCl2）單獨作用24h。②單獨給予0、5、50、500、5000μmol/L PAS-Na作用24h，在倒置相差顯微鏡下觀察神經(jīng)元形態(tài)，用MTT法測定細(xì)胞存活率。③基底核神經(jīng)元隨機分為正常對照組（對照組）、染錳組、低、中、高劑量PAS-Na（L-、M-、H-PAS）對照組和干預(yù)組。對照組、L-、M-、H-PAS對照組神經(jīng)元給予培養(yǎng)液培養(yǎng)24h；染錳組、L-、M-、H-PAS干預(yù)組神經(jīng)元暴露于含MnCl250μmol/L培養(yǎng)液培養(yǎng)24h。接著，棄掉原培養(yǎng)液。L-、M-、H-PAS對照組、干預(yù)組分別給予含PAS-Na50、150、450μmol/L的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h。其余組培養(yǎng)液培養(yǎng)24h。然后，用噻唑藍(lán)(MTT)法測定存活率，用試劑盒測定乳酸脫氫酶（LDH）漏出率、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)測定DNA損傷，高效液相色譜(HPLC)熒光檢測法測定細(xì)胞內(nèi)外Glu、Gln、Gly及GABA含量。（2）星形膠質(zhì)細(xì)胞：純化鑒定后的基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞，分別①經(jīng)0、125、250、500、1000μmol/L MnCl2單獨作用24h。②單獨給予0、5、50、500、5000μmol/L PAS-Na作用24h，在倒置相差顯微鏡下觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)，用MTT法測定其存活率。③基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞被隨機分為正常對照組（對照組）、染錳組、低、中、高劑量PAS-Na（L-、M-、H-PAS）對照組和干預(yù)組。對照組、L-、M-、H-PAS對照組星形膠質(zhì)細(xì)胞給予培養(yǎng)液培養(yǎng)24h；染錳組、L-、M-、H-PAS干預(yù)組星形膠質(zhì)細(xì)胞暴露于MnCl2500μmol/L培養(yǎng)液培養(yǎng)24h。接著，棄掉原培養(yǎng)液。L-、M-、H-PAS對照組、干預(yù)組分別給予含PAS-Na50、150、450μmol/L的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h。其余組培養(yǎng)液培養(yǎng)24h。用MTT法測定細(xì)胞存活率，SCGE測定DNA損傷，用HPLC熒光檢測法測定大鼠基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)外Glu、Gln及Gly含量。 結(jié)果（1）神經(jīng)元：①錳可引起基底核神經(jīng)元形態(tài)損傷及存活率降低，呈一定的劑量反應(yīng)關(guān)系；②高濃度（5000μmol/L）PAS-Na可損傷基底核神經(jīng)元形態(tài)，使其存活率降低；③染錳組基底核神經(jīng)元胞體腫脹、皺縮、突起減少。與染錳組比較，L-、 M-、H-PAS干預(yù)組神經(jīng)元上述變化有所減輕，H-PAS干預(yù)組作用效果較好。與對照組比較，染錳組神經(jīng)元存活率降低，L-、M-、H-PAS干預(yù)組神經(jīng)元存活率比染錳組高（P＜0.05）；染錳組LDH漏出率比對照組高；L-、M-PAS干預(yù)組LDH漏出率比染錳組低（P＜0.05）。染錳組GSH-Px和CAT活性都比對照組低；M-PAS干預(yù)組GSH-Px活性和M-、H-PAS干預(yù)組CAT活性比染錳組高（P＜0.05）。染錳組尾部DNA百分率、Olive尾距均大于對照組；L-、M-、H-PAS干預(yù)組神經(jīng)元彗星尾部DNA百分率、Olive尾距比染錳組低（P＜0.05）。染錳組神經(jīng)元內(nèi)Glu、Gln含量比對照組低，GABA、Gly含量比對照組高；L-、M-、H-PAS干預(yù)組Glu、Gly和H-PAS干預(yù)組GABA含量比染錳組低，L-、H-PAS干預(yù)組Gln含量比染錳組高（P＜0.05）。染錳組神經(jīng)元外Glu、Gln含量比對照組低，Gly含量比對照組高；L-、M-、H-PAS干預(yù)組Gly含量比染錳組低，M-PAS干預(yù)組Glu含量比染錳組高（P＜0.05）。（2）星形膠質(zhì)細(xì)胞：①錳濃度為250μmol/L以上可引起基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)損傷及存活率下降，有一定的劑量反應(yīng)趨勢；②單純PAS-Na對基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及存活率無明顯影響；③染錳組基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體腫脹、皺縮。與染錳組比較，L-、 M-、H-PAS干預(yù)組星形膠質(zhì)細(xì)胞上述變化有所減輕。染錳組細(xì)胞存活率比對照組低，， M-、H-PAS干預(yù)組細(xì)胞存活率比染錳組高（P0.05）。染錳組星形膠質(zhì)細(xì)胞的彗星尾部DNA百分率、Olive尾距均大于對照組；L-、M-、H-PAS干預(yù)組神經(jīng)元彗星尾部DNA百分率和H-PAS干預(yù)組神經(jīng)元彗星Olive尾距比染錳組低（P0.05）。染錳組星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Glu、Gly含量比對照組高，Gln含量比對照組低。L-、M-、H-PAS干預(yù)組Glu和M-、H-PAS干預(yù)組Gly含量比染錳組低， H-PAS干預(yù)組Gln含量比染錳組高（P0.05）。染錳組細(xì)胞外Glu、Gly含量比對照組高，Gln含量低于對照組。L-、M-、H-PAS干預(yù)組Glu、Gly含量比染錳組低，L-、M-、H-PAS干預(yù)組Gln含量高于染錳組（P0.05）。 結(jié)論體外染錳對大鼠原代基底核神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷明顯，并引起DNA損傷及氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)水平改變異常，PAS-Na對錳致神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷、DNA損傷及氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的毒性影響有干預(yù)作用。
【關(guān)鍵詞】：對氨基水楊酸鈉 錳 大鼠 基底核 神經(jīng)元 星形膠質(zhì)細(xì)胞 氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì) 體外研究
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-16
• 第一部分 PAS-Na 對染錳大鼠原代基底核神經(jīng)元損傷的影響16-36
• 1 材料與方法16-21
• 1.1 主要儀器和試劑16-18
• 1.2 新生大鼠原代基底核神經(jīng)元體外培養(yǎng)及處理18-19
• 1.3 基底核神經(jīng)元鑒定19
• 1.4 MTT 法測定細(xì)胞存活率19-20
• 1.5 單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)（SCGE）測定 DNA 的損傷20
• 1.6 細(xì)胞培養(yǎng)液及細(xì)胞內(nèi) LDH 和細(xì)胞內(nèi) GSH-Px、CAT 活性20-21
• 1.7 HPLC 參考文獻[31]，并做改良21
• 2 統(tǒng)計學(xué)分析21-22
• 3 結(jié)果22-33
• 3.1 體外染錳致大鼠原代基底核神經(jīng)元損傷22-24
• 3.2 PAS-Na 對大鼠原代基底核神經(jīng)元的影響24-26
• 3.3 PAS-Na 對染錳大鼠原代基底核神經(jīng)元損傷的影響26-33
• 4 討論33-36
• 第二部分 PAS-Na 對染錳大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的影響36-50
• 1 材料與方法36-38
• 1.1 主要儀器和試劑36
• 1.2 新生大鼠基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)及處理36-37
• 1.3 基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞鑒定37
• 1.4 MTT 法測定細(xì)胞存活率37-38
• 1.5 SCGE 測定 DNA 的損傷38
• 1.6 HPLC 參考文獻，并做改良38
• 2.統(tǒng)計學(xué)分析38
• 3 結(jié)果38-47
• 3.1 體外染錳致大鼠基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷38-40
• 3.2 PAS-Na 對大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響40-42
• 3.3 PAS-Na 對染錳大鼠基底核星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的影響42-47
• 4 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-59
• 綜述59-85
• 參考文獻70-85
• 致謝85-86
• 研究生期間發(fā)表的文章86

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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2 歐超燕;羅海蘭;黃明立;姜岳明;王芳;王禪;;高效液相色譜熒光法同時測定大鼠基底核4種氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2012年01期

3 歐超燕;羅海蘭;姜岳明;王禪;蒙浩洋;姜力;區(qū)仕燕;鄧祥發(fā);;對氨基水楊酸鈉對染錳大鼠基底核GABA_AR及GAT-1表達(dá)的影響[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2012年05期

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9 黃艷妮;李少軍;蒙浩洋;唐方萍;區(qū)仕燕;姜岳明;;對氨基水楊酸鈉對錳致大鼠基底核神經(jīng)元損傷影響的體外研究[J];毒理學(xué)雜志;2013年02期

本文編號：1067894