本文關鍵詞：我國中部及南部部分地區(qū)中華按蚊對溴氰菊酯殺蟲劑抗性機制的初步研究

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【摘要】：目的了解目前云南省、江蘇省和河南省中華按蚊對溴氰菊酯抗藥性的基本情況,調查鈉離子通道基因(Kdr基因)突變頻率。探討藥膜接觸時間和受試樣本量對WHO抗性生測結果的影響。初步分析表皮蛋白基因(insect cuticle proteins genes, ICPG)與中華按蚊抗藥性之間的關系,探討其表達量在蚊不同生長發(fā)育階段的變化規(guī)律。方法(1)選擇云南省盈江縣、江蘇省睢寧縣及河南省開封縣為調查點,進行中華按蚊的現(xiàn)場采集及飼養(yǎng)工作,通過抗藥性生物測定收集得到足夠的現(xiàn)場抗性蚊和敏感蚊,以及1-2齡幼蟲、3-4齡幼蟲、蛹、0d成蚊、5d成蚊、10d成蚊、15d成蚊等不同發(fā)育階段的蚊樣。(2)現(xiàn)場進行抗藥性生物測定。包括按世界衛(wèi)生組織(WHO)標準進行的中華按蚊群體抗藥性水平測定,受試樣本量一定時不同藥膜接觸時間下的抗藥性測定和藥膜接觸時間一定時不同受試樣本量下的抗藥性測定。用SPSS19.0對三個調查點的受試蚊蟲生測校正死亡率進行卡方檢驗。(3)應用PCR對Kdr基因ⅡS6段進行擴增并測序,分別檢測存活蚊和死亡蚊的Kdr等位基因突變頻率,用卡方檢驗或Fisher確切概率法比較。同時用卡方檢驗比較三個調查點存活蚊Kdr等位基因突變頻率。(4)通過生物信息學分析篩選出與抗性有關的中華按蚊ICPG,用熒光定量PCR(RT-qPCR)測定其在各樣本中的表達量。采取相對定量的2-△△Ct計算法處理熒光定量PCR實驗數(shù)據(jù)。現(xiàn)場抗性蚊、敏感蚊和實驗室對照敏感蚊的ICPG表達量比較用Kruskal-wallis檢驗。對不同發(fā)育階段蚊的ICPG表達量用方差分析比較,用GraphPad prism 5制作統(tǒng)計趨勢圖。結果(1)云南盈江縣、江蘇睢寧縣和河南開封縣中華按蚊均為抗性水平(R),24 h校正死亡率分別為67.42%、54.33%和47.40%(χ2=12.240,P0.05)。三地區(qū)抗性蚊Kdr突變頻率分別為4.0%、96.0%和100%(χ2=31.26,P0.05)。在盈江縣和睢寧縣,存活蚊和死亡蚊之間Kdr突變頻率差異無統(tǒng)計學意義(P=0.190,0.628,P均0.05)；但在開封縣有統(tǒng)計學意義差異(χ2=75.81,P0.05)。(2)對WHO抗性生測方法的研究中發(fā)現(xiàn),受試樣本量一定時,rKD隨著藥膜接觸時間增加而增大,于80 min時達到峰值,開封縣為66.78%,盈江縣為71.30%,而后進入平穩(wěn)期。藥膜接觸時間一定時,受試樣本量越少,擊倒越遲。(3)熒光定量PCR結果表明,CPF3和CPLCG3在現(xiàn)場抗性蚊體內的表達量顯著高于敏感蚊及實驗室對照敏感蚊,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01), CPR30僅在抗性蚊體內特異性表達。(4) ICPG在中華按蚊不同生長發(fā)育階段(1-2齡、3-4齡、蛹、0 d、5d、10d、 15d)表達具有差異性。CPLCG3隨蚊齡的增加而增加,CPF3和CPF4在成蚊中特異性表達,CPR78在蛹期特異性表達。結論(1)各地區(qū)調查點的中華按蚊仍為溴氰菊酯高抗性群體。不同地區(qū)中華按蚊抗性機制不同,Kdr突變在抗性產生中發(fā)揮的作用也不同。(2)藥膜接觸時間和受試樣本量對中華按蚊抗藥性測定結果有影響。對抗性水平較高的蚊蟲,應延長藥膜接觸時間至80 min;如何減少接觸筒中受試蚊蟲的數(shù)量而又能獲得其抗性水平,需要進一步的實驗驗證及相應數(shù)理統(tǒng)計模型的建立。(3)中華按蚊ICPG在現(xiàn)場抗性蚊和敏感蚊之間表達具有差異性,且隨著蚊齡的變化而變化。
【關鍵詞】：中華按蚊 溴氰菊酯抗性 抗藥性生測 Kdr突變 表皮蛋白基因
【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R184.31
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 引言9-14
• 參考文獻12-14
• 技術路線14-15
• 第一部分 中華按蚊對溴氰菊酯抗性水平檢測及Kdr突變頻率調查15-28
• 1 引言15-16
• 2 材料與方法16-21
• 3 結果21-24
• 4 討論24-26
• 參考文獻26-28
• 第二部分 藥膜接觸時間和受試樣本量對中華按蚊抗性測定結果的影響28-37
• 1 引言28
• 2 材料與方法28-30
• 3 結果30-33
• 4 討論33-35
• 參考文獻35-37
• 第三部分 抗性和敏感中華按蚊表皮蛋白相關分子表達量差異比較37-52
• 1 引言37-38
• 2 材料與方法38-45
• 3 結果45-48
• 4 討論48-50
• 參考文獻50-52
• 第四部分 不同發(fā)育階段中華按蚊表皮蛋白相關分子表達量差異比較52-67
• 1 引言52-53
• 2 材料與方法53-59
• 3 結果59-64
• 4 討論64-66
• 參考文獻66-67
• 結語67-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69-70
• 附件70-78

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 譚偉龍;朱長強;艾樂樂;韓招久;姜志寬;趙彤言;;中華按蚊對菊酯類殺蟲劑的抗性及kdr突變[J];中華衛(wèi)生殺蟲藥械;2015年04期

2 方福瑾;王衛(wèi)杰;沈波;朱昌亮;;幾丁質合成酶1與蚊抗藥性相關研究[J];中華衛(wèi)生殺蟲藥械;2014年03期

3 裴速建;張華勛;李凱杰;胡樂群;夏菁;尚曉鵬;;湖北省中華按蚊對溴氰菊酯的抗藥性監(jiān)測[J];中國媒介生物學及控制雜志;2014年01期

4 常雪蓮;薛玉芹;張安冬;朱國鼎;方強;;安徽省沿淮地區(qū)中華按蚊溴氰菊酯抗性及代謝解毒酶活性kdr突變頻率調查[J];中國血吸蟲病防治雜志;2013年03期

5 徐鐵龍;鐘代斌;方強;湯林華;周水森;鄭彬;;安徽淮南中華按蚊溴氰菊酯抗藥性和P450單加氧酶活性隨蚊齡變化的研究[J];中國血吸蟲病防治雜志;2013年02期

6 付鳳洋;陳斌;鐘代斌;孟鳳霞;閆振天;何正波;閆桂云;;重慶市中華按蚊溴氰菊酯抗性與kdr基因突變的關系[J];寄生蟲與醫(yī)學昆蟲學報;2013年01期

7 祁欣;張紅衛(wèi);徐鐵龍;湯林華;周水森;鄭彬;;河南省部分地區(qū)溴氰菊酯抗性中華按蚊代謝酶活性的調查研究[J];中國媒介生物學及控制雜志;2012年06期

8 馬素媛;王英;趙清;徐鐵龍;吳紅渠;艾國平;;Bti對三帶喙庫蚊的殺傷效果及溫度的影響[J];中國熱帶醫(yī)學;2012年12期

9 武松;馬爾健;陸群;仰鳳桃;陳道俊;王波;翟金霞;余俊峰;常娜;季飛虎;洪結鳳;葉苗青;;合肥市3縣中華按蚊對溴氰菊酯抗性現(xiàn)狀的研究[J];中國媒介生物學及控制雜志;2012年03期

10 祁欣;崔晶;;云南及河南省部分地區(qū)中華按蚊對溴氰菊酯抗性及kdr突變頻率調查[J];中國媒介生物學及控制雜志;2012年02期

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本文編號：1067247