本文關(guān)鍵詞：硫酸鎳對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體損傷的機(jī)制研究

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【摘要】：目的：建立體外分離、純化和培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞(Ley dig cells, LCs)的方法,從氧化應(yīng)激和線粒體電子呼吸鏈氧化磷酸化酶復(fù)合體相關(guān)基因表達(dá)水平的變化探討硫酸鎳對(duì)小鼠LCs線粒體損傷的可能機(jī)制。 方法：(1)采用Ⅳ型膠原酶消化、Percoll密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)法,提取和純化小鼠LCs,用3β-羥基類固醇脫氫酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)法對(duì)獲得的LCs進(jìn)行純度鑒定。(2)LCs融合度達(dá)80～85%時(shí),用硫酸鎳(NiSO4)0、250、500和1000μmol/L處理24h,采用DCFH-DA探針法,熒光倒置顯微鏡觀察LCs活性氧(ROS)的含量,采用磷鉬酸比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷(Adenosine-5'-triphosphate, ATP)含量。(3)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)LCs線粒體電子呼吸鏈關(guān)鍵基因NADH-氧化還原酶-1(NADH dehydrogenase subunit1, ND1)、細(xì)胞色素-b (Cytochrome b, Cyt-b)和細(xì)胞色素氧化酶II (Cytochrome oxidaseII, COXII) mRNA及蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：(1)經(jīng)3β-HSD法鑒定,該提取方法可獲得純度達(dá)90%以上的LCs。(2) LCs經(jīng)各濃度NiSO4處理24h后,NiSO4500和1000μmol/L濃度組LCs內(nèi)ROS含量升高,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。NiSO4500和1000μmol/L濃度組LCs內(nèi)ATP含量降低,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P,0.05)。(3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,NiSO4500和1000μmol/L濃度組,睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ND1、 Cyt-b和COX II的mRNA和蛋白表達(dá)量均降低,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：建立了較理想的原代小鼠LCs的分離、純化和培養(yǎng)方法；硫酸鎳可使原代培養(yǎng)小鼠LCs內(nèi)ATP含量降低,可能與其提高小鼠LCs內(nèi)ROS水平,降低線粒體內(nèi)電子呼吸鏈關(guān)鍵基因ND1、 Cyt-b和COX II mRNA和蛋白表達(dá)水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：硫酸鎳 睪丸間質(zhì)細(xì)胞 活性氧 線粒體
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 前言7-15
• 1.1 鎳的生物學(xué)功能7-8
• 1.2 鎳的一般毒性作用8-10
• 1.3 鎳的致癌性10-11
• 1.4 鎳的生殖毒性11-15
• 第二章 小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的分離、純化、培養(yǎng)及鑒定15-23
• 2.1 材料15
• 2.2 方法15-19
• 2.3 結(jié)果19-20
• 2.4 討論20-22
• 2.5 小結(jié)22-23
• 第三章 硫酸鎳對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ROS和ATP水平的影響23-30
• 3.1 材料23
• 3.2 方法23-25
• 3.3 結(jié)果25-26
• 3.4 討論26-29
• 3.5 小結(jié)29-30
• 第四章 硫酸鎳致小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體ND1、Cyt-b和CoXⅡ表達(dá)水平的變化30-41
• 4.1 材料30-31
• 4.2 方法31-36
• 4.3 結(jié)果36-38
• 4.4 討論38-40
• 4.5 小結(jié)40-41
• 第五章 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-49
• 在學(xué)期間的研究成果49-50
• 致謝50-51
• 附錄 英文~.略詞表51

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1044137