發(fā)布時間：2017-06-15 14:08

  本文關(guān)鍵詞：肝靶向肽-人內(nèi)皮抑制素融合蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化及活性鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了獲得足夠多純度高且有活性的肝靶向肽-人內(nèi)皮抑制素融合蛋白(HTP-r ES),首先研究了BL21/p ET21b-HTP-r ES重組菌株的生長曲線和最佳誘導(dǎo)時機;單因素分析不同p H值、不同誘導(dǎo)時間、不同誘導(dǎo)劑濃度、不同誘導(dǎo)溫度時融合蛋白表達(dá)量;通過包涵體洗滌、復(fù)性、純化,以獲得高純度的肝靶向肽-人內(nèi)皮抑制素融合蛋白;最后采用流式細(xì)胞儀和MTT對融合蛋白進(jìn)行活性鑒定。結(jié)果表明,BL21/p ET21b-HTP-r ES重組菌株在1.5 3.5 h處于對數(shù)生長期,培養(yǎng)基p H 8.0、IPTG終濃度0.06 mmol/L、42℃、誘導(dǎo)表達(dá)5 h為最佳表達(dá)條件。包涵體洗滌后純度達(dá)60%,經(jīng)復(fù)性、純化后獲得的目的蛋白純度達(dá)到95%以上,對人肝癌細(xì)胞具有靶向性,能抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。研究確立了融合蛋白最佳表達(dá)條件以及復(fù)性、純化條件,為進(jìn)一步研究其生物學(xué)活性及藥物開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣東藥科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院廣東省生物活性藥物研究重點實驗室;廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 肝靶向肽 人內(nèi)皮抑制素 表達(dá)條件優(yōu)化 活性鑒定
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81502520) 廣東省自然科學(xué)基金(No.2016A030310299)資助~~
【分類號】：R91
【正文快照】： Received:April 28,2016;Accepted:August 8,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(No.81502520),Natural Science Foundation of Guangdong Province(No.2016A030310299).Corresponding author:Yan Ma.Tel:+86-20-39352552;E-mail:mayan820901@126

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本文編號：452630