本文關(guān)鍵詞：豬與牛來源肝素制備低分子肝素的比較研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：20世紀末,歐洲地區(qū)暴發(fā)“瘋牛病” (Bovine spongiform encephalopathy, BSE)導致大部分國家藥典規(guī)定禁止使用牛來源肝素生產(chǎn)肝素類藥物。就目前臨床藥用肝素類藥物而言,其原料種屬來源僅依賴于豬,并且中國是世界上養(yǎng)豬數(shù)量最多的國家,其肝素原料產(chǎn)量約占全球的60%,這種單一的動物種屬來源與原料來源的不均衡已構(gòu)成肝素類藥物市場不穩(wěn)定的最大潛在因素。肝素藥物在臨床治療過程中會產(chǎn)生一些副作用,后來發(fā)現(xiàn)其經(jīng)降解制備得到的低分子量肝素(Lowmolecular weight heparin, LMWH)I臨床治療副作用小且抗凝血效果更好。目前LMWH已成為抗血栓臨床治療最主要的藥物,其中依諾肝素鈉是應用最廣的一種LMWH。另一方面,“瘋牛病”的發(fā)病機理已被研究確認以及其擴散也得到有效控制。據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(United Nations Food and Agriculture Organization, UNFAO)報告顯示,世界范圍內(nèi)牛的數(shù)量比豬的數(shù)量高約70%,且主要分布于南美與南亞,恰好與豬的地理分布形成互補。種種因素均促使牛成為LMWH新物種來源的首選。本論文中采用豬腸和牛肺來源肝素作為原料,主要通過調(diào)節(jié)肝素芐基酯堿解的時間、溫度與加堿量等工藝參數(shù)分別制備依諾肝素鈉,直至滿足美國藥典(United States Pharmacopeia, USP)對依諾肝素鈉分子量分布和1,6-內(nèi)醚含量的要求。然后應用高效液相色譜法(High performance liquid chromatography, HPLC)、液質(zhì)聯(lián)用法(Liquid chromatography-Mass spectrometry, LC-MS)、核磁共振波譜法(Nuclear magnetic resonance, NMR)等分析技術(shù)表征對比USP依諾肝素鈉標準品與實驗室制備的豬腸和牛肺來源依諾肝素鈉的結(jié)構(gòu)與活性的差異。該實驗首次實現(xiàn)了對牛肺來源依諾肝素鈉的糖鏈組成成分定性和定量分析。通過牛肺來源的依諾肝素鈉與USP標準品的比較分析,可評估其作為臨床抗凝血藥物的發(fā)展?jié)摿�。通過此研究建立了兩種屬來源依諾肝素鈉的制備工藝體系與質(zhì)量評價體系。
【關(guān)鍵詞】：肝素 低分子肝素 美國藥典 豬腸 牛肺 液質(zhì)聯(lián)用 核磁
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R943
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 縮略符號說明9-11
• 第一章 前言11-27
• 1.1 肝素的結(jié)構(gòu)和功能11-12
• 1.2 肝素類藥物的發(fā)展歷史12-14
• 1.3 “瘋牛病”的研究進展14-15
• 1.4 牛肝素類藥物的發(fā)展?jié)摿?/span>15-17
• 1.5 LMWH的種類與制備方法17-21
• 1.5.1 β-消除降解法18-19
• 1.5.2 硝酸降解法19-20
• 1.5.3 肝素酶降解法20
• 1.5.4 過氧化物降解法20-21
• 1.6 LMWH分析方法21-25
• 1.6.1 聚丙烯酰氨凝膠電泳法22
• 1.6.2 毛細管電泳法22-23
• 1.6.3 高效液相色譜法23-24
• 1.6.4 核磁共振波譜法24
• 1.6.5 質(zhì)譜法24-25
• 1.6.6 生物信息學25
• 1.7 本課題的創(chuàng)新點和研究意義25-27
• 第二章 豬腸與牛肺來源依諾肝素鈉的制備27-37
• 2.1 引言27
• 2.2 實驗材料27-29
• 2.2.1 實驗儀器27-29
• 2.2.2 實驗試劑29
• 2.3 實驗方法29-33
• 2.3.1 肝素來源驗證29-30
• 2.3.2 豬腸與牛肺來源肝素分子量檢測30
• 2.3.3 豬腸與牛肺來源肝素生物活性檢測30-31
• 2.3.4 依諾肝素鈉制備工藝31-33
• 2.4 實驗結(jié)果分析與討論33-37
• 2.4.1 肝素來源PCR結(jié)果分析33
• 2.4.2 豬腸與牛肺來源肝素的分子量分析比較33-34
• 2.4.3 豬腸與牛肺來源肝素活性對比分析34-35
• 2.4.4 工藝優(yōu)化與依諾肝素鈉制備35-37
• 第三章 豬腸與牛肺來源依諾肝素鈉的比較分析37-58
• 3.1 引言37
• 3.2 實驗材料37-40
• 3.2.1 實驗儀器37-38
• 3.2.2 實驗試劑38-40
• 3.3 實驗方法40-45
• 3.3.1 分子量分布與1,6-內(nèi)醚含量測定40-43
• 3.3.1.1 分子量分布檢測40-41
• 3.3.1.2 1,6-內(nèi)醚含量測定41-43
• 3.3.2 NMR結(jié)構(gòu)檢測43
• 3.3.3 完整糖鏈LC-MS指紋圖譜檢測43-44
• 3.3.4 生物活性檢測44-45
• 3.4 實驗結(jié)果分析與討論45-58
• 3.4.1 分子量分布與1,6-內(nèi)醚含量對比分析45-52
• 3.4.2 NMR檢測對比分析52-55
• 3.4.3 完整糖鏈LC-MS指紋圖譜對比分析55-57
• 3.4.4 生物活性檢測對比分析57-58
• 第四章 結(jié)論58-59
• 參考文獻59-65
• 致謝65-66
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文及申請的專利66-67
• 學術(shù)論文評閱及答辯情況表67

【相似文獻】

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1 金飛;徐飛虎;王彥廣;;依諾肝素鈉的制備與純化[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2008年01期

2 ;[J];;年期

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1 杜厚兵;堵燕萍;陳旭驊;莊亮;夏玉;葉閔e

本文編號：442782