發(fā)布時間：2017-06-07 10:24

  本文關(guān)鍵詞：基于內(nèi)含肽的環(huán)境響應(yīng)納米載體的構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：環(huán)境響應(yīng)性的藥物遞送載體在一定外界條件的刺激下,可以對所載藥物的釋放進行劑量、時間、空間的控制。這種給藥方式能有效避免藥物過早釋放,提高靶點作用濃度,減少毒副作用,是納米生物醫(yī)藥研究的熱點和前沿。為了建立納米載體控釋新策略,本研究利用生物智能元件—內(nèi)含肽特有的溫度響應(yīng)性自催化斷裂活性,結(jié)合金納米顆粒的光熱轉(zhuǎn)換性質(zhì),通過基因融合技術(shù),以綠色熒光蛋白為載荷與內(nèi)含肽融合、并在融合蛋白C端引入與金納米顆粒高親和的標(biāo)簽,一步法實現(xiàn)了金納米顆粒的表面修飾與藥物裝載。聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、非變性瓊脂糖凝膠電泳和熒光光譜分析結(jié)果證實融合蛋白高效地裝載到了金納米顆粒表面;SDS-PAGE和熒光光譜分析表明,該載體在40℃刺激下,能夠?qū)崿F(xiàn)載荷的可控釋放。載荷釋放后,內(nèi)含肽仍結(jié)合于金納米顆粒表面,維持其良好的生物相容性。在此基礎(chǔ)上,針對融合蛋白質(zhì)在金納米顆粒表面裝載的空間取向這一關(guān)鍵問題,本研究進一步探索了蛋白質(zhì)與金納米顆粒相互作用的規(guī)律。通過在金納米顆粒表面裝載不同性質(zhì)的蛋白質(zhì),利用內(nèi)含肽的溫度響應(yīng)性自催化斷裂活性,分析了蛋白質(zhì)自身性質(zhì)對其在金納米顆粒表面裝載取向的影響。綜上,本研究利用生物智能元件內(nèi)含肽,構(gòu)建了一種新型的溫度響應(yīng)性納米載體,同時為研究蛋白質(zhì)在納米顆粒表面裝載的空間取向提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：環(huán)境響應(yīng) 控釋 內(nèi)含肽 空間取向 金納米顆粒
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院(武漢病毒研究所)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R943
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 第1章 引言11-53
• 1.1 環(huán)境響應(yīng)性藥物遞送載體11-25
• 1.1.1 環(huán)境響應(yīng)性藥物遞送載體的概念11-12
• 1.1.2 納米材料作為藥物遞送載體的優(yōu)勢12-13
• 1.1.3 環(huán)境響應(yīng)性藥物遞送載體的分類13-25
• 1.1.3.1 溫度響應(yīng)的藥物遞送載體13-14
• 1.1.3.2 pH響應(yīng)的藥物遞送載體14-16
• 1.1.3.3 光響應(yīng)的藥物遞送載體16-18
• 1.1.3.4 氧化還原電勢響應(yīng)的藥物遞送載體18-20
• 1.1.3.5 磁場響應(yīng)的藥物遞送載體20-22
• 1.1.3.6 酶分子響應(yīng)的藥物遞送載體22-23
• 1.1.3.7 其他刺激響應(yīng)的藥物遞送載體23-24
• 1.1.3.8 雙重響應(yīng)及多重響應(yīng)的藥物遞送載體24-25
• 1.2 生物智能元件—內(nèi)含肽25-39
• 1.2.1 內(nèi)含肽的定義25-26
• 1.2.2 內(nèi)含肽的剪接機制26-29
• 1.2.2.1 N-O鍵重排27-28
• 1.2.2.2 轉(zhuǎn)酯作用28
• 1.2.2.3 Asn環(huán)化28
• 1.2.2.4 O-N鍵重組28-29
• 1.2.3 內(nèi)含肽的分類29-30
• 1.2.4 內(nèi)含肽在的生物學(xué)上的應(yīng)用30-39
• 1.2.4.1 蛋白質(zhì)的表達(dá)及分離純化30-34
• 1.2.4.2 環(huán)肽的人工制備34
• 1.2.4.3 基因功能的研究和藥物靶點34-35
• 1.2.4.4 蛋白質(zhì)相互作用研究35-36
• 1.2.4.5 內(nèi)含肽介導(dǎo)的蛋白質(zhì)連接技術(shù)36-39
• 1.2.4.6 其他用途39
• 1.3 蛋白質(zhì)/多肽藥物遞送的研究現(xiàn)狀39-40
• 1.4 蛋白質(zhì)和納米顆粒的相互作用40-52
• 1.4.1 蛋白質(zhì)與納米顆粒相互作用的影響因素40-45
• 1.4.1.1 納米顆粒的性質(zhì)41-43
• 1.4.1.2 蛋白質(zhì)的性質(zhì)43-44
• 1.4.1.3 溶液因素44-45
• 1.4.2 蛋白質(zhì)和納米顆粒相互作用的研究意義45-46
• 1.4.3 蛋白質(zhì)和納米顆粒相互作用的表征參數(shù)46
• 1.4.4 蛋白質(zhì)和納米顆粒相互作用的研究方法46-48
• 1.4.5 蛋白質(zhì)在納米顆粒表面取向的研究現(xiàn)狀48-51
• 1.4.6 超電荷綠色熒光蛋白簡介51-52
• 1.5 本研究的主要目標(biāo)及研究內(nèi)容52-53
• 第2章 基于內(nèi)含肽的環(huán)境響應(yīng)納米載體的構(gòu)建53-87
• 2.1 材料與方法53-70
• 2.1.1 試驗材料53-59
• 2.1.1.1 菌株和質(zhì)粒53-55
• 2.1.1.2 主要儀器55-57
• 2.1.1.3 試劑與溶液配方57-59
• 2.1.2 方法59-70
• 2.1.2.1 表達(dá)載體pET32a-EGFPI及pET32a-mEGFPI的構(gòu)建59-64
• 2.1.2.2 蛋白EGFPI及mEGFPI的表達(dá)和純化64-65
• 2.1.2.3 溫度和還原劑誘導(dǎo)的EGFPI蛋白的裂解反應(yīng)65-67
• 2.1.2.4 金納米顆粒的合成、修飾及表征67-68
• 2.1.2.5 貨物蛋白在金納米顆粒表面的裝載68-69
• 2.1.2.6 內(nèi)含肽介導(dǎo)的貨物蛋白與載體的分離69-70
• 2.2 結(jié)果與分析70-85
• 2.2.1 表達(dá)載體pET32a-EGFPI和pET32a-mEGFPI的構(gòu)建及驗證70-72
• 2.2.2 融合蛋白EGFPI及mEGFPI的表達(dá)純化72-73
• 2.2.3 EGFPI的裂解反應(yīng)及產(chǎn)物鑒定73-76
• 2.2.4 金納米顆粒的TEM表征76
• 2.2.5 金納米顆粒吸收光譜測定76-77
• 2.2.6 載荷蛋白裝載的瓊脂糖凝膠電泳表征77-79
• 2.2.7 金-蛋白復(fù)合物的分離純化79-80
• 2.2.8 貨物裝載效率計算80-81
• 2.2.9 貨物釋放的SDS-PAGE表征81-83
• 2.2.10 貨物釋放的熒光強度表征83-85
• 2.3 討論與結(jié)論85-87
• 第3章 金納米顆粒表面蛋白質(zhì)取向的研究87-101
• 3.1 材料和方法87-93
• 3.1.1 材料87-90
• 3.1.1.1 質(zhì)粒與菌株87-90
• 3.1.1.2 主要儀器90
• 3.1.1.3 試劑與溶液配方90
• 3.1.2 方法90-93
• 3.1.2.1 表達(dá)載體的構(gòu)建pET32a-MBPI，pET32a-GSTI，pET32a- (-30)EGFPI，pET32a-(+15)EGFPI90-92
• 3.1.2.2 GSTI，MBPI，-30GFPI，+15GFPI蛋白的表達(dá)及純化92
• 3.1.2.3 內(nèi)含肽介導(dǎo)的融合蛋白的裂解反應(yīng)92
• 3.1.2.4 蛋白質(zhì)在金納米顆粒表面的裝載及釋放92-93
• 3.2 結(jié)果與分析93-100
• 3.2.1 表達(dá)載體pET32a-MBPI，pET32a-GSTI，pET32a-(-30)EGFPI， pET32a-(+15)EGFPI的構(gòu)建和驗證93-96
• 3.2.2 融合蛋白MBPI，，GSTI，-30GFPI，+15GFPI的表達(dá)純化96
• 3.2.3 融合蛋白的裂解反應(yīng)96-97
• 3.2.4 蛋白質(zhì)在金納米顆粒表面的取向分析97-100
• 3.3 討論與結(jié)論100-101
• 參考文獻(xiàn)101-118
• 附錄118-125
• 附錄1 縮略詞表118-119
• 附錄2 金納米顆粒濃度計算表119-120
• 附錄3 金納米顆粒粒徑計算表120
• 附錄4 金納米顆粒表面裂解產(chǎn)物的二級質(zhì)譜圖120-121
• 附錄5 融合蛋白序列121-123
• 附錄6 金納米顆粒表面裂解產(chǎn)物的色譜分離圖123-124
• 附錄7 金納米顆粒的合成124-125
• 作者簡歷125

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  本文關(guān)鍵詞：基于內(nèi)含肽的環(huán)境響應(yīng)納米載體的構(gòu)建，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：428663