目的:觀察雙酚類(lèi)化合物雙酚A(Bisphenol A,BPA)及雙酚S(Bisphenol S,BPS)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞系SK-N-SH細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,探討Nrf2轉(zhuǎn)錄因子在BPA及BPS致細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡的作用,進(jìn)一步闡明其細(xì)胞毒性的機(jī)制。方法:1、用不同濃度的BPS(0、50、100、150、200、250、300、350、400μmol/L)或BPA(0、50、100、150、200μmol/L)處理SK-N-SH細(xì)胞48 h后,采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力;用分光光度法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽還原酶(GSH)、總活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量;免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Nrf2的蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡情況。2、用20μmol/L的Nrf2激活劑t-BHQ(特丁基對(duì)苯二酚)預(yù)處理SK-N-SH細(xì)胞30 min后再與BPS(100μmol/L)或BPA(100μmol/L)共孵育處理48 h,分光光度法測(cè)定ROS、SOD、MDA、GSH的表達(dá)水平;免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)凋亡...

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要英文縮略詞
第1章 前言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株及培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇
        2.1.2 試驗(yàn)藥物溶液配制和實(shí)驗(yàn)分組
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑和材料
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)相關(guān)溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力
        2.2.2 DCFH-DA法測(cè)定細(xì)胞ROS的含量
        2.2.3 TBA法測(cè)定細(xì)胞MDA的含量
        2.2.4 .微量酶標(biāo)法測(cè)定細(xì)胞GSH的含量
        2.2.5 WST-1 法測(cè)定細(xì)胞SOD的含量
        2.2.6 羅丹明123染色測(cè)定細(xì)胞線粒體膜電位
        2.2.7 PI染色法檢測(cè)細(xì)胞周期
        2.2.8 Annexin V-PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.2.9 Western Blot法檢測(cè)相關(guān)目的蛋白
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 結(jié)果
第4章 討論
    4.1 雙酚A及雙酚S對(duì) SK-N-SH細(xì)胞造成損傷并能誘導(dǎo)氧化應(yīng)激
    4.2 NRF2 轉(zhuǎn)錄因子在雙酚A及雙酚S對(duì) SK-N-SH細(xì)胞的作用
    4.3 BPA及 BPS介導(dǎo)SK-N-SH細(xì)胞氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝



本文編號(hào)：4033012