目的:觀察雙酚類化合物雙酚A(Bisphenol A,BPA)及雙酚S(Bisphenol S,BPS)對神經(jīng)細(xì)胞系SK-N-SH細(xì)胞生長的影響,探討Nrf2轉(zhuǎn)錄因子在BPA及BPS致細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡的作用,進(jìn)一步闡明其細(xì)胞毒性的機(jī)制。方法:1、用不同濃度的BPS(0、50、100、150、200、250、300、350、400μmol/L)或BPA(0、50、100、150、200μmol/L)處理SK-N-SH細(xì)胞48 h后,采用MTT法檢測細(xì)胞活力;用分光光度法測定細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽還原酶(GSH)、總活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量;免疫印跡法(Western Blot)檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Nrf2的蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡情況。2、用20μmol/L的Nrf2激活劑t-BHQ(特丁基對苯二酚)預(yù)處理SK-N-SH細(xì)胞30 min后再與BPS(100μmol/L)或BPA(100μmol/L)共孵育處理48 h,分光光度法測定ROS、SOD、MDA、GSH的表達(dá)水平;免疫印跡法(Western Blot)檢測凋亡...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要英文縮略詞
第1章 前言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗細(xì)胞株及培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇
        2.1.2 試驗藥物溶液配制和實驗分組
        2.1.3 主要實驗試劑和材料
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要實驗相關(guān)溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 MTT法檢測細(xì)胞活力
        2.2.2 DCFH-DA法測定細(xì)胞ROS的含量
        2.2.3 TBA法測定細(xì)胞MDA的含量
        2.2.4 .微量酶標(biāo)法測定細(xì)胞GSH的含量
        2.2.5 WST-1 法測定細(xì)胞SOD的含量
        2.2.6 羅丹明123染色測定細(xì)胞線粒體膜電位
        2.2.7 PI染色法檢測細(xì)胞周期
        2.2.8 Annexin V-PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡
        2.2.9 Western Blot法檢測相關(guān)目的蛋白
    2.3 統(tǒng)計分析
第3章 結(jié)果
第4章 討論
    4.1 雙酚A及雙酚S對 SK-N-SH細(xì)胞造成損傷并能誘導(dǎo)氧化應(yīng)激
    4.2 NRF2 轉(zhuǎn)錄因子在雙酚A及雙酚S對 SK-N-SH細(xì)胞的作用
    4.3 BPA及 BPS介導(dǎo)SK-N-SH細(xì)胞氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝



本文編號：4033012