基于熒光偏振(fluorescence polarization, FP)原理,建立并應(yīng)用以β-catenin/TCF4 (T-cell factor 4)相互作用為靶標(biāo)的小分子抑制劑熒光偏振高通量篩選模型獲得苗頭化合物。利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng),原核表達(dá)和分離純化重組人β-catenin,以酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)進(jìn)行生物學(xué)活性鑒定。以異硫氰酸熒光素(fluorescence isothiocyanate, FITC)標(biāo)記的TCF4多肽為熒光探針,通過優(yōu)化FITC-TCF4與β-catenin反應(yīng)濃度,建立并應(yīng)用靶向β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制劑熒光偏振高通量篩選模型進(jìn)行苗頭化合物篩選。利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)成功進(jìn)行了重組人β-catenin原核表達(dá)與分離純化。ELISA實驗證實了純化的重組人β-catenin具有良好的生物學(xué)活性。選用20 nmol·L-1FITC-TCF4和100 nmol·L-1β-catenin,成功建立了Z'因子為0.88的熒光偏振高通量篩選模型。應(yīng)用本篩選模型進(jìn)...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料與方法
結(jié)果
    1 重組人β-catenin原核表達(dá)、分離純化與活性鑒定
    2 熒光探針FITC-TCF4最佳反應(yīng)濃度的確定
    3 β-Catenin/FITC-TCF4結(jié)合反應(yīng)的穩(wěn)定性
    4 β-Catenin最佳反應(yīng)濃度的確定
    5 實驗體系對DMSO的耐受性
    6 Z'因子及其他主要技術(shù)參數(shù)的測定
    7 苗頭化合物的篩選與發(fā)現(xiàn)
討論



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