目的建立穩(wěn)定有效的抗生素相關(guān)性腹瀉(antibiotic-associated diarrhea, AAD)小鼠模型,為抗生素相關(guān)腹瀉的機(jī)制及藥物的研究提供支持。方法各抗生素按約臨床劑量的8倍,每日灌胃2次,連續(xù)5d;停止抗生素后,再觀察8d;觀察小鼠的腹瀉情況;根據(jù)單用抗生素的結(jié)果,選取致腹瀉較明顯的進(jìn)行組合:頭孢拉定(1.00g/kg)+慶大霉素(0.16g/kg),頭孢呋辛(0.26g/kg)+左氧氟沙星(0.20g/kg),頭孢克肟(0.10g/kg)+羅紅霉素(0.08g/kg),每日灌胃給藥2次,連續(xù)5d,觀察小鼠腹瀉情況、腸道微生物菌群和結(jié)腸組織等。結(jié)果各抗生素單用,劑量達(dá)到約臨床的8倍,小鼠腹瀉率低,恢復(fù)快,不適于作為AAD模型繼續(xù)研究�？股芈�(lián)用,小鼠腹瀉出現(xiàn)時間提早、腹瀉率高,其中頭孢呋辛+左氧氟沙星于第3天出現(xiàn)明顯腹瀉癥狀,到第5天腹瀉率達(dá)到100%,腹瀉評分最高。停止抗生素6d后,即實驗的第11天,該組小鼠全部可見腹瀉癥狀,且無小鼠死亡。結(jié)腸組織觀察發(fā)現(xiàn),頭孢呋辛+左氧氟沙星組小鼠結(jié)腸組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤;進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)結(jié)腸組織緊密連接蛋白表達(dá)下降。腸道菌群分析發(fā)現(xiàn)...

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圖1抗生素造模實驗流程圖

在前期單用抗生素試驗的基礎(chǔ)上，選取致腹瀉效果明顯的抗生素按照抗菌譜相似性進(jìn)行組合后，開始聯(lián)用抗生素致小鼠腹瀉的試驗，擬降低抗生素用量和發(fā)現(xiàn)腹瀉癥狀穩(wěn)定的抗生素組合。考慮到聯(lián)用時，抗生素間可能存在協(xié)同作用，選擇各抗生素劑量約為臨床劑量的2倍。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，40只小鼠按隨機(jī)數(shù)字表....

圖2單用抗生素各組造模期增重率

空白對照組小鼠整個試驗期間活潑好動，飲食、飲水等情況均正常，體重持續(xù)增長，糞便正常，肛周毛發(fā)干凈，未出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。造模聯(lián)合組1(頭孢拉定+慶大霉素)、聯(lián)合組2(頭孢呋辛+左氧氟沙星)、聯(lián)合組3(頭孢克肟+羅紅霉素)小鼠在灌服抗生素之后，均出現(xiàn)了較為明顯的腹瀉現(xiàn)象，表現(xiàn)為精神萎靡，....

圖3聯(lián)用抗生素各組造模期增重率(A)、飲水量(B)和飲食量(C)

根據(jù)“2.4”項結(jié)果，本研究發(fā)現(xiàn)頭孢呋辛聯(lián)用左氧氟沙星造模后腹瀉現(xiàn)象明顯、腹瀉率高達(dá)100%，并且在停止給與抗生素后，腹瀉現(xiàn)象持續(xù)至整個實驗流程的第11天，作為AAD造模方法更為適合。于是我們對頭孢呋辛聯(lián)用左氧氟沙星組模型小鼠的結(jié)腸組織進(jìn)行H&E染色后鏡下(200×)觀察，發(fā)現(xiàn)頭....

圖4頭孢呋辛+左氧氟沙星灌胃后小鼠結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)的變化(HE×400、×200)

由于抗生素會嚴(yán)重破壞腸道微生態(tài)，引起腸道菌群失調(diào)，于是我們采集空白對照組(C)和頭孢呋辛聯(lián)用左氧氟沙星組(M)小鼠糞便，用高通量16SrRNA測序技術(shù)測定其微生物菌群多樣性，進(jìn)行腸道菌群分析對比。對細(xì)菌16SrRNA的V3、V4可變區(qū)序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測序，共得到494....

本文編號：3962039