本文關(guān)鍵詞：IFITM5基因c.-14C＞T定點突變對Saos-2細胞生物學(xué)功能的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白5(interferon induced transmembrane protein 5,IFITM5)是干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白家族成員之一,是一種成骨細胞特異性膜蛋白,在成骨細胞分化階段表達量增加,尤其是骨基質(zhì)形成期和礦化階段達到峰值,具有促進成骨細胞礦化的作用。Ⅴ型成骨不全患者中均發(fā)現(xiàn)存在IFITM5基因的5'UTR的c.-14CT突變,該類患者臨床特征主要是前臂骨間膜鈣化和增生性骨痂形成。此外,IFITM5還參與了腫瘤抑制通路,對癌細胞具有抗增殖的作用,該蛋白具有腫瘤抑制的性質(zhì),可以在腫瘤形成之前起調(diào)制作用,推測該基因可能與腫瘤疾病的發(fā)生或發(fā)展密切相關(guān)。目的:本實驗旨在探究IFITM5基因c.-14CT定點突變對人骨肉瘤細胞生物學(xué)功能的影響。方法:應(yīng)用Real-time PCR和Western blotting的方法檢測癌細胞和轉(zhuǎn)染Saos-2細胞的IFITM5 m RNA和蛋白水平的表達情況。通過將構(gòu)建好的pc DNA4-IFITM5-E12-W野生型、pc DNA4-IFITM5-E12-MU突變型質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Saos-2細胞,采用MTT、細胞劃痕、細胞凋亡和transwell的方法測定細胞的增殖、遷移、凋亡和侵襲的情況。轉(zhuǎn)染Saos-2細胞誘導(dǎo)礦化后采用茜素紅染色法觀察礦化結(jié)節(jié)的形成,并應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測分化標志蛋白ALP、OCN、Runx2等基因的表達。結(jié)果:IFITM5在癌細胞系中存在并有表達差異,在骨腫瘤以及人卵巢癌細胞系中高表達;在肝癌H7402與橫紋肌肉瘤RD等細胞中表達量低(p0.05)。構(gòu)建好的pc DNA4-IFITM5-E12-W野生型、pc DNA4-IFITM5-E12-MU突變型質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染Saos-2細胞后采用MTT、細胞劃痕、細胞凋亡和transwell的方法測定細胞的增殖、遷移、凋亡和侵襲的變化,結(jié)果表明pc DNA4-IFITM5-E12-W野生型、pc DNA4-IFITM5-E12-MU突變型比空白對照組的細胞增殖能力、遷移速率、凋亡速率、侵襲能力稍有降低,但野生型和突變型實驗組無明顯差別(p0.05);茜素紅染色實驗發(fā)現(xiàn),相比于空白對照組,在誘導(dǎo)礦化72h后pc DNA4-IFITM5-E12-W和pc DNA4-IFITM5-E12-MU組均促進礦化結(jié)節(jié)的形成;實時熒光定量PCR檢測礦化標志蛋白ALP、OCN、Runx2,相比于對照組,pc DNA4-IFITM5-E12-W和pc DNA4-IFITM5-E12-MU組ALP、OCN、Runx2的m RNA表達量均上升。pc DNA4-IFITM5-E12-MU突變型IFITM5 m RNA表達水平明顯高于pc DNA4-IFITM5-E12-W野生型(p0.05)。通過Real-time PCR和Western blotting的方法發(fā)現(xiàn)pc DNA4-IFITM5-E12-W野生型、pc DNA4-IFITM5-E12-MU突變型比空白對照組的IFITM5 m RNA和蛋白表達水平均顯著上升(p0.05),pc DNA4-IFITM5-E12-MU突變型IFITM5 m RNA和蛋白表達水平明顯高于pc DNA4-IFITM5-E12-W野生型(p0.05)。結(jié)論:IFITM5在癌細胞系中存在并有表達差異。pc DNA4-IFITM5-E12-W野生型、pc DNA4-IFITM5-E12-MU突變型質(zhì)粒能促進IFITM5的表達,但對細胞增殖能力、遷移速率、凋亡速率、侵襲能力等細胞生物學(xué)功能無明顯影響,驗證了IFITM5促進成骨細胞礦化的作用。
【關(guān)鍵詞】：IFITM5 成骨細胞 礦化 癌細胞 pc DNA4
【學(xué)位授予單位】：濟南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 導(dǎo)師簡介5
• 課題組成員5-9
• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 主要符號表13-14
• 前言14-20
• 1 IFITM5基因14-16
• 1.1 IFITM5研究背景14
• 1.2 IFITM5功能14-16
• 2 IFITM5與Ⅴ型成骨不全16-17
• 3 腫瘤細胞生物學(xué)特性研究方法17-20
• 第一章 IFITM5在不同癌細胞中的差異表達20-33
• 1 材料與方法20-30
• 1.1 材料20-22
• 1.1.1 細胞20
• 1.1.2 試劑20-21
• 1.1.3 儀器21-22
• 1.2 方法22-30
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)及傳代22
• 1.2.2 RT-QPCR測定轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達水平22-25
• 1.2.3 Western Blotting檢測IFITM5的表達25-29
• 1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法29-30
• 2 結(jié)果30-31
• 2.1 不同癌細胞系中IFITM5 mRNA表達差異30
• 2.2 不同癌細胞系中IFITM5蛋白表達差異30-31
• 3 討論31-33
• 第二章 IFITM5基因c.-14C>T定點突變對Saos-2 細胞生物學(xué)功能的影響33-47
• 1 材料與方法33-40
• 1.1 材料33-34
• 1.1.1 細胞和質(zhì)粒33-34
• 1.1.2 試劑34
• 1.1.3 儀器34
• 1.2 方法34-40
• 1.2.1 Saos-2 細胞培養(yǎng)及傳代34
• 1.2.2 pc DNA4質(zhì)粒提取34-36
• 1.2.3 Saos-2 細胞瞬時轉(zhuǎn)染36
• 1.2.3.1 細胞種板36
• 1.2.4 IFITM5基因c.-14C>T定點突變對Saos-2 細胞生物學(xué)功能的影響36-40
• 2 結(jié)果40-45
• 2.1 pcDNA4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Saos-2 細胞mRNA水平的表達40-41
• 2.2 pcDNA4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Saos-2 細胞IFITM5蛋白表達41
• 2.3 pcDNA4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Saos-2 細胞對細胞增殖的影響41-42
• 2.4 pcDNA4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Saos-2 細胞對細胞遷移的影響42-43
• 2.5 pcDNA4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Saos-2 細胞對細胞凋亡的影響43-44
• 2.6 pcDNA4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Saos-2 細胞對細胞侵襲的影響44-45
• 3 討論45-47
• 第三章 IFITM5對Saos-2 細胞礦化的功能研究47-55
• 1 材料與方法47-50
• 1.1 材料47-48
• 1.1.1 細胞47
• 1.1.2 試劑47-48
• 1.1.3 儀器48
• 1.2 方法48-50
• 1.2.1 Saos-2 細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染48-49
• 1.2.2 IFITM5定量檢測49
• 1.2.3 茜素紅染色49-50
• 1.2.4 ALP、OCN、Runx2定量檢測50
• 2 結(jié)果50-53
• 2.1 Saos-2 細胞轉(zhuǎn)染前后IFITM5的表達變化50-51
• 2.2 茜素紅染色法檢測Saos-2 細胞的礦化程度51-52
• 2.3 Real-time PCR檢測各組Runx2、ALP、OCN的mRNA的表達52-53
• 3 討論53-55
• 參考文獻55-60
• 附錄60-61
• 綜述61-66
• 參考文獻64-66
• 在校期間發(fā)表論文66-67
• 致謝67

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1 王東生,袁肇凱,郭志華;細胞凋亡與中醫(yī)藥[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2000年12期

2 萬曉艷,于蘇國,郭玉芹,何慶;細胞凋亡與自身免疫性甲狀腺疾病的研究進展[J];中國地方病防治雜志;2002年06期

3 祝偉民,林建棣,馬曉東,段小平;運動與細胞凋亡[J];中國臨床康復(fù);2004年27期

4 王會玲,景文莉,張小紅,高維娟;細胞凋亡與心肌缺血-再灌注損傷[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年04期

5 梁薇;細胞凋亡的中藥調(diào)節(jié)機制[J];四川中醫(yī);2005年11期

6 張松彪;細胞凋亡與細胞養(yǎng)生[J];中國科技產(chǎn)業(yè);2005年01期

7 楊竹林,伍漢文;細胞凋亡調(diào)控因素有關(guān)基因的研究[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);1997年02期

8 劉恩梅,楊錫強;細胞凋亡及其影響因素[J];重慶醫(yī)學(xué);1998年01期

9 ;美開發(fā)調(diào)控細胞凋亡藥物[J];中國腫瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明陽;細胞凋亡在致畸中的作用[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2000年02期

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1 陳穎麗;李前忠;;不同亞細胞位置的細胞凋亡蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性分析[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

2 孫英麗;趙允;朱山;翟中和;;植物細胞凋亡及其機理的研究[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

3 劉二龍;袁慧;;鋅與細胞凋亡[A];2003全國家畜內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文專輯[C];2003年

4 邱潔;高海青;;鋅在細胞凋亡中的作用研究進展[A];山東省微量元素科學(xué)研究會第三屆學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

5 俞雅萍;;細胞凋亡的機制及途徑和影響因素[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

6 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細胞凋亡的機制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨鋒;;調(diào)控細胞凋亡的線粒體因素[A];腫瘤病因?qū)W研究與中西醫(yī)結(jié)合腫瘤綜合診療交流研討會論文集[C];2009年

8 吳經(jīng)緯;湯長發(fā);;運動中細胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學(xué)會2006年度學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2007年

9 蒲小平;李長齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細胞凋亡的實驗研究[A];第七屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

10 江鍵;宋誠榮;崔黎麗;方影;王小平;;靜電場對細胞凋亡作用的初步探討[A];中國物理學(xué)會第九屆靜電學(xué)術(shù)年會論文集[C];2000年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 商東;“細胞凋亡”與臨床醫(yī)學(xué)[N];中國醫(yī)藥報;2001年

2 張志軍;細胞凋亡與中醫(yī)藥[N];中國醫(yī)藥報;2002年

3 ;“細胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2002年

4 記者張建松;治療癌癥新途徑：細胞凋亡療法[N];科技日報;2002年

5 李明輝;“細胞凋亡”治癌癥[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2002年

6 洪敏;細胞凋亡研究引人關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報;2008年

7 陶春祥;細胞凋亡對心臟疾病的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 本報實習(xí)記者 梁媛媛;薛定：發(fā)現(xiàn)癌癥“開關(guān)”[N];北京科技報;2010年

9 高書明;誘導(dǎo)癌細胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2004年

10 勇匯;中藥誘導(dǎo)癌細胞凋亡研究進展[N];中國醫(yī)藥報;2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊利;系列多氮類化合物的抗腫瘤活性研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 張浩;從分子、細胞和動物水平研究鉛誘發(fā)氧化損傷及細胞凋亡的效應(yīng)與機理[D];山東大學(xué);2015年

3 何欣怡;家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）抑制家蠶BmN細胞凋亡的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

4 馮全服;從線粒體途徑研究川芎嗪誘導(dǎo)HepG2細胞凋亡效應(yīng)機制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 張曉倩;高糖誘導(dǎo)Bim蛋白高表達而促腎近曲小管上皮細胞凋亡的機制探討[D];山東大學(xué);2015年

6 孫健瑋;PTEN基因負調(diào)控Raf1磷酸化的作用及其對PC3細胞凋亡的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

7 徐林艷;腫瘤細胞凋亡過程中TNFRSF10B和CFLAR調(diào)控機制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 樊慶端;生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的建模與動力學(xué)行為研究[D];上海大學(xué);2015年

9 王德選;WNK_3對鈉氯協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)運子的調(diào)節(jié)及在胚腎細胞凋亡中的保護作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 葉嘉;Nogo-B在急性肺損傷肺泡上皮細胞凋亡中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹璐璐;2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚(BDE-47)對人胚腎細胞(HEK293)的毒理效應(yīng)及作用機制研究[D];中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所;2015年

2 張薇;蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細胞凋亡的研究[D];云南民族大學(xué);2015年

3 唐建國;視黃醇X受體出核抑制對神經(jīng)元細胞凋亡的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 安璐;3-氯-1,2-丙二醇細胞毒性及其誘導(dǎo)HEK293細胞凋亡途徑探究[D];江南大學(xué);2015年

5 楊翔;Procaspase-8的異常表達抑制TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡[D];昆明理工大學(xué);2015年

6 張昌明;I3C通過調(diào)控p53泛素化對喉癌Hep-2細胞凋亡的影響[D];延邊大學(xué);2015年

7 彭涵;共軛亞油酸對仔豬脂肪細胞凋亡的影響[D];西南大學(xué);2015年

8 李立輝;ΔFosB通過MMP-9調(diào)控山羊乳腺上皮細胞凋亡的分子機制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

9 楊鑫鋮;Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細胞凋亡中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 賈瓊瓊;MicroRNA-214對H_2O_2損傷L6骨骼肌成肌細胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：IFITM5基因c.-14C＞T定點突變對Saos-2細胞生物學(xué)功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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