基于分子對接、分子動(dòng)力學(xué)模擬、紫外吸收光譜法、熒光光譜法與紅外光譜法,研究了細(xì)胞色素CYP2C9與雙酚A (BPA)之間的相互作用。分子對接研究表明,對接位點(diǎn)位于Thr364附近的空腔,結(jié)合能為-7. 51 kcal/mol;分子動(dòng)力學(xué)模擬觀察了10 ns內(nèi)蛋白的整體構(gòu)象變化,發(fā)現(xiàn)Thr364也是BPA與CYP2C9發(fā)生相互作用時(shí)的結(jié)合位點(diǎn)。光譜學(xué)研究發(fā)現(xiàn)CYP2C9與雙酚A結(jié)合發(fā)生熒光增強(qiáng)現(xiàn)象,并且它們間的相互作用力主要為疏水作用力;二級結(jié)構(gòu)中β-轉(zhuǎn)角、無規(guī)則卷曲與β-折疊等也發(fā)生明顯變化;隨著底物濃度增加紫外吸收峰有明顯上升且伴隨紅移。模擬計(jì)算與光譜檢測均表明CYP2C9與BPA間存在較強(qiáng)的相互作用。

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【部分圖文】：

圖1BPA與CYP2C9的分子對接結(jié)果圖

使用分子動(dòng)力學(xué)模擬技術(shù)可以研究BPA與CYP2C9發(fā)生相互作用時(shí)的動(dòng)力學(xué)情況，并進(jìn)一步驗(yàn)證對接結(jié)果的準(zhǔn)確性，對小分子BPA與CYP2C9蛋白進(jìn)行10ns的分子動(dòng)力學(xué)模擬。通過對BPA與CYP2C9相互作用過程的均方根偏差(RMSD)、均方根波動(dòng)(RMSF)與回旋半徑(Rg)進(jìn)行....

圖2游離態(tài)CYP2C9與復(fù)合物BPA-CYP2C9的RMSF(A),RMSD(B),Rg(C)

圖1BPA與CYP2C9的分子對接結(jié)果圖2.3雙酚A與CYP2C9作用的熒光光譜與結(jié)合常數(shù)

圖3310K下BPA與CYP2C9相互作用的熒光光譜圖

其中△F=F-F0，△F∞=F∞-F0式中，F(xiàn)0為CYP2C9的初始熒光強(qiáng)度;F為BPA與CYP2C9溶液發(fā)生相互作用后的熒光強(qiáng)度;△F∞為BPA與CYP2C9溶液相互作用飽和時(shí)的值;K為BPA與CYP2C9的結(jié)合常數(shù);Q為BPA的濃度。以1/△F對1/Q繪圖。經(jīng)計(jì)算分析得結(jié)合常....

圖4BPA與CYP2C9相互作用的紫外吸收光譜圖

紫外吸收光譜可用于檢測配體小分子是否與蛋白質(zhì)形成復(fù)合物，其變化值可以反應(yīng)蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的變化[13]。如圖4所示，可以判斷BPA與CYP2C9的復(fù)合物存在2個(gè)吸收峰，第1個(gè)位于210nm附近，第2個(gè)峰位于250～260nm之間，隨著BPA濃度的上升，吸收峰值不斷上升且存在紅移....

本文編號：3919806