目的雙氯芬酸鈉治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎機(jī)制的再研究,并從糖酵解方面探討其可能機(jī)制。方法MTT法檢測細(xì)胞增殖抑制;基因芯片檢測糖酵解和線粒體相關(guān)基因的變化;利用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)基于蛋白結(jié)構(gòu)的靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測,使雙氯芬酸分別與糖代謝相關(guān)的蛋白晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行分子對接,選擇結(jié)合活性預(yù)測高的靶點(diǎn)進(jìn)行詳細(xì)分子作用分析;乳酸試劑盒檢測胞內(nèi)乳酸變化,通過脂質(zhì)體Lipofectamine 2000將si-COX-2 Inhibitor、si-PKM2 Inhibitor、si-GLUT1 Inhibitor分別轉(zhuǎn)染至人RA FLS細(xì)胞,Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡,RT-q PCR法和Western blot法分別檢測糖酵解相關(guān)基因和蛋白的相對表達(dá)水平;2-NBDG檢測大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織葡萄糖攝取變化;免疫組化法檢測大鼠滑膜組織COX-2糖酵解相關(guān)蛋白PKM2、GLUT1相對表達(dá)量。結(jié)果雙氯芬酸對RA FLS細(xì)胞糖酵解有顯著抑制作用,其中對糖酵解酶PKM2和GLUT1抑制作用較明顯,機(jī)制為雙氯酚酸鈉通過COX-2介導(dǎo)RA FLS細(xì)胞中GLUT1/PKM2途徑的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。免疫組化結(jié)果同樣證明...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 雙氯芬酸鈉對RAFLS細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    1.材料與方法
        1.1 .實(shí)驗(yàn)材料、試劑
        1.2 .細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3 .MTT比色法檢測細(xì)胞增殖
        1.4 .Annexin V-FITC/ PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡
        1.5 .透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞死亡的方式
        1.6 .統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.結(jié)果
        2.1 .雙氯芬酸鈉對RAFLS細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    3.討論
    4.結(jié)論
第二章 COX-2 調(diào)節(jié)RA FLS細(xì)胞中PKM2/GLUT1 的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
    1.材料與方法
        1.1 .實(shí)驗(yàn)材料、試劑
        1.2 .細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3 .RT-q PCR
        1.4 .蛋白質(zhì)印跡
        1.5 .基因芯片
        1.6 .乳酸的測定
        1.7 .檢測細(xì)胞葡萄糖攝取
        1.8 .細(xì)胞內(nèi)ATP水平檢測
        1.9 .Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡
        1.10 .大鼠滑膜組織葡萄糖攝取
        1.11 .Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡
        1.12 .計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)
    2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
        2.1 .動物模型的準(zhǔn)備
        2.2 .動物分組和管理
        2.3 .免疫組化
        2.4 .組織病理學(xué)
        2.5 .統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.結(jié)果
        3.1 .雙氯芬酸鈉對RAFLS細(xì)胞糖酵解的影響
        3.2 .基于計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)預(yù)測雙氯芬酸鈉糖酵解蛋白結(jié)構(gòu)靶點(diǎn)
        3.3 .COX-2 調(diào)節(jié)RA FLS細(xì)胞中PKM2 的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        3.4 .GLUT1與COX-2/PKM2 通路的調(diào)節(jié)有關(guān)
        3.5 .雙氯芬酸鈉對AA大鼠滑膜組織病理學(xué)及大鼠滑膜組織COX-2,PKM2 和GLUT1表達(dá)的影響
    4.討論
    5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄A
附錄B
附錄C
    個人簡歷
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3916319