目的雙氯芬酸鈉治療類風濕關(guān)節(jié)炎機制的再研究,并從糖酵解方面探討其可能機制。方法MTT法檢測細胞增殖抑制;基因芯片檢測糖酵解和線粒體相關(guān)基因的變化;利用計算機輔助藥物設(shè)計基于蛋白結(jié)構(gòu)的靶點進行預(yù)測,使雙氯芬酸分別與糖代謝相關(guān)的蛋白晶體結(jié)構(gòu)進行分子對接,選擇結(jié)合活性預(yù)測高的靶點進行詳細分子作用分析;乳酸試劑盒檢測胞內(nèi)乳酸變化,通過脂質(zhì)體Lipofectamine 2000將si-COX-2 Inhibitor、si-PKM2 Inhibitor、si-GLUT1 Inhibitor分別轉(zhuǎn)染至人RA FLS細胞,Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡,RT-q PCR法和Western blot法分別檢測糖酵解相關(guān)基因和蛋白的相對表達水平;2-NBDG檢測大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織葡萄糖攝取變化;免疫組化法檢測大鼠滑膜組織COX-2糖酵解相關(guān)蛋白PKM2、GLUT1相對表達量。結(jié)果雙氯芬酸對RA FLS細胞糖酵解有顯著抑制作用,其中對糖酵解酶PKM2和GLUT1抑制作用較明顯,機制為雙氯酚酸鈉通過COX-2介導(dǎo)RA FLS細胞中GLUT1/PKM2途徑的誘導(dǎo)細胞凋亡。免疫組化結(jié)果同樣證明...

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 雙氯芬酸鈉對RAFLS細胞增殖和凋亡的影響
    1.材料與方法
        1.1 .實驗材料、試劑
        1.2 .細胞培養(yǎng)
        1.3 .MTT比色法檢測細胞增殖
        1.4 .Annexin V-FITC/ PI雙染法檢測細胞凋亡
        1.5 .透射電子顯微鏡觀察細胞死亡的方式
        1.6 .統(tǒng)計學處理
    2.結(jié)果
        2.1 .雙氯芬酸鈉對RAFLS細胞增殖和凋亡的影響
    3.討論
    4.結(jié)論
第二章 COX-2 調(diào)節(jié)RA FLS細胞中PKM2/GLUT1 的表達誘導(dǎo)細胞凋亡
    1.材料與方法
        1.1 .實驗材料、試劑
        1.2 .細胞培養(yǎng)
        1.3 .RT-q PCR
        1.4 .蛋白質(zhì)印跡
        1.5 .基因芯片
        1.6 .乳酸的測定
        1.7 .檢測細胞葡萄糖攝取
        1.8 .細胞內(nèi)ATP水平檢測
        1.9 .Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡
        1.10 .大鼠滑膜組織葡萄糖攝取
        1.11 .Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡
        1.12 .計算機輔助藥物設(shè)計
    2 體內(nèi)實驗
        2.1 .動物模型的準備
        2.2 .動物分組和管理
        2.3 .免疫組化
        2.4 .組織病理學
        2.5 .統(tǒng)計學處理
    3.結(jié)果
        3.1 .雙氯芬酸鈉對RAFLS細胞糖酵解的影響
        3.2 .基于計算機輔助藥物設(shè)計預(yù)測雙氯芬酸鈉糖酵解蛋白結(jié)構(gòu)靶點
        3.3 .COX-2 調(diào)節(jié)RA FLS細胞中PKM2 的表達誘導(dǎo)細胞凋亡
        3.4 .GLUT1與COX-2/PKM2 通路的調(diào)節(jié)有關(guān)
        3.5 .雙氯芬酸鈉對AA大鼠滑膜組織病理學及大鼠滑膜組織COX-2,PKM2 和GLUT1表達的影響
    4.討論
    5.結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄A
附錄B
附錄C
    個人簡歷
綜述
    參考文獻



本文編號：3916319