研究背景前梯度同源蛋白2(Aterior gradient protein 2 homolog,AGR2)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)二硫鍵異構(gòu)酶(protein disulfide isomerase,PDI)家族成員之一,在人體正常組織如肺、乳腺、胃、小腸、前列腺等組織中表達(dá),其生理功能尚不完全清楚,可能與腺體的形成、胚胎發(fā)育與肢體再生等有關(guān)。人AGR2蛋白含175個(gè)氨基酸殘基,其獨(dú)特的蛋白結(jié)構(gòu)決定其功能多樣性:i)第81-84氨基酸殘基為PDI活性Motif(CPHS),但與經(jīng)典的PDI結(jié)構(gòu)(CXXC)相比卻只含一個(gè)Cys,其PDI活性不強(qiáng),但仍具有PDI樣分子伴侶的功能、促進(jìn)蛋白的正確折疊;ii)大多數(shù)PDI蛋白的C端具有典型的H/KDEL內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào),而AGR2的信號(hào)為KTEL,對(duì)KDEL受體的結(jié)合力弱,可脫離內(nèi)質(zhì)網(wǎng),作為分泌蛋白在細(xì)胞外以及體液中發(fā)揮功能;iii)AGR2還可定位于細(xì)胞核、胞質(zhì),通過(guò)蛋白-蛋白相互作用參與信號(hào)傳導(dǎo)而發(fā)揮功能。由于AGR2在多種腫瘤組織中高表達(dá),已確定其為原癌基因,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移以及產(chǎn)生多藥耐藥等惡性表型,是潛在的藥物治療靶點(diǎn)和診斷標(biāo)志物。本課題組前期...

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２蛋白酶體抑制劑Ｂｏｒ增加ＡＧＲ２的泛素化水平??

??圖１．１蛋白酶體抑制劑下調(diào)ＡＧＲ２的蛋白水平??３６??

圖２．１?ＭＧ１３２通過(guò)Ｋ４８位點(diǎn)泛素連接方式促進(jìn)ＡＧＲ２的泛素化降解??

連接酶?Ｅ３?組件識(shí)別蛋白?５（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｉｇａｓｅ?Ｅ３?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ－ｒｅｃｏｇｎｉｎ５，ＵＢＲ５）??能夠與ＡＧＲ２發(fā)生相互作用［５４］，所以我們推測(cè)ＵＢＲ５可能是ＡＧＲ２進(jìn)行泛素化??的Ｅ３連接酶。如圖２．Ｃ結(jié)果所示，在ＭＧ１３２作用下，....

圖２．２?ＵＢＲ５是ＡＧＲ２的泛素連接酶??

??＿??圖２．１?ＭＧ１３２通過(guò)Ｋ４８位點(diǎn)泛素連接方式促進(jìn)ＡＧＲ２的泛素化降解??（２）?ＭＧＩ３２通過(guò)Ｅ３連接酶ＵＢＲ５介導(dǎo)ＡＧＲ２的泛素化??在蛋白質(zhì)泛素化的過(guò)程中，泛素連接酶Ｅ３能夠行使目標(biāo)蛋白識(shí)別和招募泛??素載體酶Ｅ２的關(guān)鍵作用，且具有同源性低和特異性高的特點(diǎn)，因此能....

圖３．１?ＡＧＲ２賴氨酸位點(diǎn)及全賴氨酸突變表達(dá)質(zhì)粒示意圖??注：ＡＧＲ２－ＬｙＳ突變質(zhì)粒由王大偉師兄構(gòu)建??

Ｋ１７２，我們通過(guò)構(gòu)建關(guān)于這１７個(gè)賴氨酸位點(diǎn)相應(yīng)的突變質(zhì)粒（如Ｋ８９：只??有Ｋ８９位點(diǎn)為Ｌｙｓ；?Ｋ８９Ｒ：只有Ｋ８９位點(diǎn)Ｌｙｓ突變?yōu)椋粒颍纾�，探討ＡＧＲ２是通過(guò)其??哪一賴氨酸位點(diǎn)的泛素化進(jìn)行降解的（圖３．Ａ）。??Ａ??Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ?ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ?ｌｏｃａｔ....

本文編號(hào)：3901187