發(fā)布時(shí)間：2023-10-03 20:17

　　目的:探討吡格列酮(PIO)對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)的影響及可能機(jī)制,為防治糖尿病腎病提供理論依據(jù)及新靶點(diǎn)。方法:將大鼠腎小管細(xì)胞NRK-52E隨機(jī)分為對(duì)照組(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖組(30 mmol/L葡萄糖)、PIO干預(yù)組(30 mmol/L葡萄糖+5.0μmol/L PIO)、GW9662干預(yù)組(30 mmol/L葡萄糖+5.0μmol/L PIO+5.0μmol/L特異性拮抗劑GW9662)。前3組細(xì)胞分別在培養(yǎng)6、12、24、48 h時(shí)進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè),GW9662干預(yù)組細(xì)胞在培養(yǎng)48 h時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。采用Realtime PCR法檢測(cè)細(xì)胞中第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源基因(PTEN)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)mRNA的表達(dá)水平;采用Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞中PTEN、PPARγ、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、上皮鈣黏素(E-cadherin)的表達(dá)以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信號(hào)通路的變化。結(jié)果:隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),與正常組比較,高糖組細(xì)胞中PPARγ、P...

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【文章目錄】：
1 材料
    1.1 儀器
    1.2 藥品與試劑
    1.3 PCR引物
    1.4 細(xì)胞
2 方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和藥物母液制備
    2.2 MTT法檢測(cè)PIO對(duì)NRK-52E細(xì)胞活性的影響
    2.3 細(xì)胞分組與處理
    2.4 Real-time PCR法檢測(cè)NRK-52E細(xì)胞中PPARγ、PTEN m RNA的表達(dá)水平
    2.5 Western blotting法檢測(cè)NRK-52E細(xì)胞中PPARγ、PTEN、E-cadherin、α-SMA、p-AKT(Thr308）蛋白的表達(dá)水平
    2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3 結(jié)果
    3.1 不同濃度PIO對(duì)NRK-52E細(xì)胞活性的影響
    3.2 不同條件下NRK-52E細(xì)胞中相應(yīng)因子的mRNA及蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化
        3.2.1 mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化
        3.2.2 蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化
    3.3 PIO和PPARγ拮抗劑GW9662對(duì)高糖條件下NRK-52E細(xì)胞中相應(yīng)因子的m RNA及蛋白表達(dá)的影響
        3.3.1對(duì)m RNA表達(dá)的影響
        3.3.2 對(duì)蛋白表達(dá)的影響
4 討論



本文編號(hào)：3850572