本文關(guān)鍵詞：全反式維甲酸對于鎳引起的心臟毒性的保護(hù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：重金屬鎳由于其耐腐蝕性和導(dǎo)電特性,在電氣化學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域和納米領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。本課題深入研究鎳對于心臟的毒性作用及其可能機制,并在此基礎(chǔ)上尋找以全反式維甲酸(ATRA)為代表的高效、低毒的預(yù)防或者解毒藥物,為早期防治重金屬污染和大量接觸重金屬毒物導(dǎo)致的人類健康危害提供嶄新的理論基礎(chǔ)與指導(dǎo)。方法：1)采用CCK-8試劑盒、流式細(xì)胞術(shù)、AO/EB染色和Western Blotting法測定氯化鎳(NiCl2)對大鼠心肌細(xì)胞系H9c2的體外增殖的抑制作用,以及與不同濃度ATRA合用后,對細(xì)胞存活的影響。2)流式細(xì)胞術(shù)檢測NiCl2在作用于H9c2心肌細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(ROS)含量的改變,以及與ATRA合用后,ROS水平的變化。3)采用Western Blotting法檢測NiCl2單用或者與ATRA合用后,心肌細(xì)胞中MAPK信號通路的變化。4)在大鼠原代心肌細(xì)胞中通過DAPI染色和自動節(jié)律性功能的檢測,研究NiCl2對于心肌細(xì)胞的毒性以及ATRA的保護(hù)作用。5)建立SD大鼠心臟鎳中毒模型,并研究ATRA的體內(nèi)保護(hù)作用。結(jié)果：1)H9c2心肌細(xì)胞在NiCl2作用72小時后,細(xì)胞凋亡率呈濃度依賴性地上升,提示NiCl2有明顯的心臟毒性。ATRA與NiCl2合用后,細(xì)胞形態(tài)和生存率基本恢復(fù)正常。同時,細(xì)胞凋亡的標(biāo)志物PARP和caspase-3蛋白在NiCl2單用時會被激活進(jìn)而發(fā)生切割,而ATRA的合用可顯著抑制凋亡通路的激活。2)在H9c2細(xì)胞中,ATRA合用3小時后可明顯逆轉(zhuǎn)NiCl2誘導(dǎo)的ROS水平升高。3)NiCl2上調(diào)MAPK家族中的MEK、ERK和p38蛋白的磷酸化水平,而ATRA合用可使蛋白磷酸化水平發(fā)生顯著下調(diào)。4)在大鼠原代心肌細(xì)胞中,ATRA的合用可顯著逆轉(zhuǎn)NiCl2誘導(dǎo)的染色質(zhì)固縮、細(xì)胞核破裂和自動節(jié)律性的喪失。5)經(jīng)心電圖分析發(fā)現(xiàn),SD大鼠對NiCl2的急性最大耐受量在2 mg/kg至3mg/kg之間。為構(gòu)建SD大鼠心臟鎳中毒模型,采取NiCl2連續(xù)給藥27天后,心電圖檢測發(fā)現(xiàn)NiCl2誘導(dǎo)產(chǎn)生逆向P波和ST段下移。合用40mg/kg ATRA可部分逆轉(zhuǎn)NiCl2誘導(dǎo)的體內(nèi)心臟毒性。結(jié)論：NiCl2誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞系H9c2和大鼠原代心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡,且能影響SD大鼠原代心肌細(xì)胞的自動節(jié)律性功能并引起大鼠心律失常。ATRA治療可能通過降低細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生,抑制凋亡信號通路中PARP和caspase-3的激活,降低MEK、ERK和p38的磷酸化活化從而恢復(fù)MAPK信號通路的正常功能等途徑有效地減輕上述NiCl2引起的心臟毒性。這一研究成果不僅深入闡明了鎳引起心臟毒性的分子機制,還為進(jìn)一步尋找以ATRA為代表的治療和預(yù)防重金屬中毒藥物提供新的視角,具有很高的理論研究和實際應(yīng)用價值。
【關(guān)鍵詞】：鎳 全反式維甲酸 心臟毒性 活性氧簇 MAPK
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-12
• 1 前言12-14
• 2 材料與方法14-16
• 2.1 藥物14
• 2.2 細(xì)胞株14
• 2.3 實驗動物14
• 2.4 試劑14-16
• 2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑14
• 2.4.2 Western blot相關(guān)試劑14-16
• 2.4.3 流式細(xì)胞術(shù)相關(guān)試劑16
• 2.4.4 細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)染色相關(guān)試劑16
• 2.5 儀器16
• 3 實驗方法16-21
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)16
• 3.2 細(xì)胞凋亡的檢測16-17
• 3.2.1 細(xì)胞活力檢測16-17
• 3.2.2 流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡17
• 3.2.3 AO/EB染色檢測細(xì)胞凋亡17
• 3.3 Western blotting檢測蛋白表達(dá)17-18
• 3.3.1 總蛋白提取17-18
• 3.3.2 Western blotting18
• 3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧變化18-19
• 3.5 原代乳鼠心肌細(xì)胞的分離19
• 3.6 原代心肌細(xì)胞的自動節(jié)律性監(jiān)測19
• 3.7 DAPI染色檢測原代細(xì)胞核形態(tài)改變19-20
• 3.8 鎳中毒模型20
• 3.9 統(tǒng)計學(xué)分析20-21
• 4 實驗結(jié)果21-36
• 5 討論與展望36-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-56
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 碩士期間已發(fā)表的論文、綜述及會議摘要56-57
• 作者簡歷57

【共引文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 胡曉婷;硫酸鎳對小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞線粒體損傷的機制研究[D];蘭州大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：全反式維甲酸對于鎳引起的心臟毒性的保護(hù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：384873