本文關(guān)鍵詞：以PLGA微球和PLA納米粒為基質(zhì)構(gòu)建抗腫瘤藥物與miRNA共遞送體系，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在全球范圍內(nèi),腫瘤的發(fā)病率和死亡率都在逐年升高,成為威脅人類健康的首要疾病,發(fā)展安全有效的治療策略迫在眉睫。近年來,靶向型的藥物與基因共遞送體系,成為人們研究的焦點(diǎn),有望在未來成為安全有效的腫瘤治療手段。基于上述考慮,本研究首先構(gòu)建了阿霉素與PEI25K/miR-34a共遞送的微球體系。對(duì)于肺癌,普通的靜脈給藥手段比較難在肺部達(dá)到有效濃度,若加大給藥劑量則會(huì)對(duì)正常組織造成很大的毒副作用。微球體系能夠通過可吸入式給藥,沉積在肺泡之中,從而達(dá)到肺部局部給藥的目的。傳統(tǒng)的PLGA微球釋放率較低,因此我們構(gòu)建了多孔PLGA微球系統(tǒng),因?yàn)槠浔砻娴目椎?以及PLGA的可降解性,能夠緩慢持續(xù)地釋放所裝載的藥物與基因。MiR-34a是一種在轉(zhuǎn)錄水平由p53調(diào)控的內(nèi)源性miRNA,在人類腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。我們對(duì)藥物與基因共遞送的多孔PLGA微球轉(zhuǎn)染肺癌A549細(xì)胞系的細(xì)胞學(xué)效應(yīng)及分子機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)分析。結(jié)果表明阿霉素與miR-34a能夠產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),并產(chǎn)生更強(qiáng)的抑制腫瘤增殖與遷移的效果。隨后,我們進(jìn)一步構(gòu)建了適配子靶向的藥物與基因共遞送的PLA納米粒子遞送體系。以適配子AS1411為靶向配體,它能夠與大多數(shù)腫瘤細(xì)胞表面過表達(dá)的核仁素特異性結(jié)合,介導(dǎo)納米粒子入胞,實(shí)現(xiàn)納米粒子的主動(dòng)靶向。然而腫瘤細(xì)胞容易產(chǎn)生多藥耐藥性,這給臨床上的化療造成了很大困難。多藥耐藥性的產(chǎn)生是由于腫瘤細(xì)胞表面過表達(dá)外排泵蛋白,這其中就包括ABCG2蛋白。為了解決這一問題,我們將抑制ABCG2蛋白表達(dá)的miR-519c質(zhì)粒與阿霉素共載,沉默腫瘤細(xì)胞中的ABCG2蛋白表達(dá)的同時(shí)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該P(yáng)LA納米粒子能夠特異性地被肝癌細(xì)胞HepG2內(nèi)吞,同時(shí)由于miR-519c的存在,HepG2細(xì)胞對(duì)阿霉素的敏感性增強(qiáng)從而產(chǎn)生更明顯的腫瘤增殖抑制效果。在接下來的實(shí)驗(yàn)中,我們將構(gòu)建裸鼠的腫瘤模型,檢測(cè)PLA納米粒子的體內(nèi)分布以及抑制腫瘤組織生長(zhǎng)的效果,進(jìn)一步驗(yàn)證其在動(dòng)物水平上的效果。綜上所述,以PLGA微球和PLA納米粒子為基質(zhì)構(gòu)建藥物與基因的共遞送體系能夠通過不同的方式靶向肺癌細(xì)胞和肝癌細(xì)胞,并且實(shí)現(xiàn)藥物和基因在腫瘤細(xì)胞中的富集。同時(shí)miRNA與化藥的共同遞送,能夠產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),進(jìn)而極大地提高對(duì)腫瘤的殺傷效果。因此,以上體系有希望在動(dòng)物水平實(shí)現(xiàn)更好的腫瘤抑制效果,并且減小化療產(chǎn)生的毒副作用,實(shí)現(xiàn)安全、有效地靶向治療腫瘤。
【關(guān)鍵詞】：共遞送 基因治療 多孔PLGA微球 PLA納米粒子 適配子
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 緒論12-36
• 1.1 腫瘤治療的主要手段12-16
• 1.1.1 傳統(tǒng)療法12-14
• 1.1.2 納米藥物及其優(yōu)勢(shì)14-16
• 1.2 基因治療16-24
• 1.2.1 基因治療的意義及策略16-17
• 1.2.2 治療基因的選擇17-19
• 1.2.3 基于miRNA的腫瘤治療策略19-24
• 1.3 抗腫瘤藥物與基因共遞送體系24-29
• 1.3.1 藥物與基因共遞送體系的意義24-25
• 1.3.2 藥物與基因共遞送系統(tǒng)的設(shè)計(jì)25-29
• 1.4 靶向治療29-35
• 1.4.1 被動(dòng)靶向29-30
• 1.4.2 主動(dòng)靶向30-32
• 1.4.3 核酸適配子32-35
• 1.5 本課題研究思路35-36
• 第2章 多孔PLGA微球介導(dǎo)阿霉素與miR-34a共遞送的研究36-58
• 2.1 引言36
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料36-39
• 2.2.1 質(zhì)粒與細(xì)胞株36-37
• 2.2.2 主要試劑37
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器37
• 2.2.4 主要溶液的配制37-39
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法39-44
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)39-40
• 2.3.2 pcDNA-miRNA-34a質(zhì)粒提取40
• 2.3.3 多孔PLGA微球的制備40-41
• 2.3.4 多孔PLGA微球的表征41
• 2.3.5 藥物裝載與包封率的測(cè)定41-42
• 2.3.6 體外藥物釋放42
• 2.3.7 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)42
• 2.3.8 細(xì)胞凋亡分析42-43
• 2.3.9 細(xì)胞周期阻滯實(shí)驗(yàn)43
• 2.3.10 相關(guān)蛋白表達(dá)量檢測(cè)43
• 2.3.11 Caspase-3、8 和9活性檢測(cè)43
• 2.3.12 劃痕實(shí)驗(yàn)43-44
• 2.3.13 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)44
• 2.4 結(jié)果與討論44-57
• 2.4.1 多孔PLGA微球的表征44-49
• 2.4.2 多孔PLGA微球釋放液抑制細(xì)胞增殖及機(jī)制的研究49-54
• 2.4.3 凋亡相關(guān)蛋白的檢測(cè)54-55
• 2.4.4 微球釋放液抑制腫瘤細(xì)胞遷移與浸潤(rùn)55-57
• 2.5 本章小結(jié)57-58
• 第3章 以適配子為靶向的藥物與基因共遞送PLA納米粒子的構(gòu)建與評(píng)價(jià)58-72
• 3.1 引言58
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器58-59
• 3.2.1 細(xì)胞株58-59
• 3.2.2 質(zhì)粒與核酸序列59
• 3.2.3 主要試劑59
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器59
• 3.2.5 主要溶液的配制59
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法59-62
• 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)59-60
• 3.3.2 pcDNA-miR-519c質(zhì)粒提取60
• 3.3.3 PLA納米粒子的制備60
• 3.3.4 PLA納米粒子的表征60-61
• 3.3.5 ABCG2蛋白表達(dá)情況的研究61
• 3.3.6 PLA納米粒子細(xì)胞毒性檢測(cè)61-62
• 3.3.7 PLA納米粒子靶向性分析62
• 3.3.8 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析62
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論62-71
• 3.4.1 PLA納米粒子的表征62-65
• 3.4.2 ABCG2蛋白在細(xì)胞中表達(dá)情況65-66
• 3.4.3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)66-68
• 3.4.4 靶向性檢測(cè)68-71
• 3.5 本章小結(jié)71-72
• 全文總結(jié)72-73
• 參考文獻(xiàn)73-80
• 攻讀碩士期間的研究成果及所獲獎(jiǎng)勵(lì)80-82
• 致謝82-83

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本文編號(hào)：383806