本文關(guān)鍵詞：鹽酸貝那普利樂卡地平片毒代動力學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鹽酸貝那普利樂卡地平片為新的復(fù)方降壓藥。本課題采用目前國內(nèi)外新藥臨床前安全性評價研究模式對該藥進行了臨床前毒代動力學(xué)研究。課題通過建立同時測定血漿中貝那普利、活性代謝物貝那普利拉及樂卡地平濃度的HPLC-MS/MS測定方法,對鹽酸貝那普利樂卡地平片在大鼠和犬體內(nèi)的毒代動力學(xué)進行系統(tǒng)研究,考察長期給藥藥物在體內(nèi)是否蓄積,為該復(fù)方制劑的研究開發(fā)提供依據(jù)。目的1.建立靈敏度高、專屬性強、高通量的HPLC-MS/MS分析方法,同時測定血漿中貝那普利、貝那普利拉及樂卡地平的濃度。2.檢測鹽酸貝那普利樂卡地平重復(fù)給藥在Beagle犬和大鼠體內(nèi)的暴露和蓄積情況,結(jié)合出現(xiàn)的毒性反應(yīng),預(yù)測臨床毒性靶器官、確定無毒反應(yīng)劑量、毒性反應(yīng)劑量等,并與單方制劑進行比較。方法1.血漿樣品采用乙腈沉淀蛋白法處理。選用格列齊特和烏苯美司為內(nèi)標。色譜柱為Poroshell 120 SB-C1 (3.0×100 mm 2.7-Micron);流動相：0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),采用梯度洗脫,梯度：0～1.5 min, A:65%; 2min, A:30%; 2～4.5 min, A:30%; 5 min, A:65%; 5～6.5 min, A:65%;流速：0.5 mL/min;柱溫30℃。ESI源,正離子模式。多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式,貝那普利m/z 425.3→351.1,貝那普利拉m/z 397.1→351.1,樂卡地平m/z 612.3→280.2,內(nèi)標格列齊特m/z 324.1→127.2,烏苯美司m/z 309.2→119.9。2.研究采用直接給予原料藥的方法進行,鹽酸樂卡地平與鹽酸貝那普利的原料比為1：3,劑量表示為(鹽酸樂卡地平+鹽酸貝那普利)。Beagle犬經(jīng)口給予鹽酸貝那普利樂卡地平(6+18)、(20+60)、(60+180) mg/kg/d、單方鹽酸樂卡地平60 mg/kg/d和單方鹽酸貝那普利180 mg/kg/d,每周給藥6天,每天給藥1次,連續(xù)給藥39周。在給藥后第1和274天時取血。取血點為藥前及藥后0.33、0.67、1、2、3、4、7、10、13、24和36 h。大鼠灌胃給予鹽酸貝那普利樂卡地平(4+12)、(13+39)、(40+120)mg/kg/d、單方鹽酸樂卡地平40 mg/kg/d和單方鹽酸貝那普利120 mg/kg/d,每周給藥6天,每天給藥1次,連續(xù)給藥26周。在給藥第1和183天時取血。取血點為藥前及藥后0.25、0.5、1、2、3、5、7、9、12和24 h。采用HPLC-MS/MS測定Beagle犬血漿中樂卡地平、貝那普利及其活性代謝產(chǎn)物貝那普利拉的濃度,采用DAS2.1.1實用藥代動力學(xué)程序計算其藥動學(xué)參數(shù)。結(jié)果1.Beagle犬方法學(xué)驗證結(jié)果：貝那普利、貝那普利拉和樂卡地平的線性范圍分別為12～12000 ng/mL、12～12000 ng/mL和0.6～600 ng/mL。貝那普利、貝那普利拉和樂卡地平的定量下限分別為12、12、0.6ng/mL。日內(nèi)日間精密度RSD均小于15%,犬血漿樣品-80℃放置162天及處理后室溫放置17h穩(wěn)定。貝那普利回收率90.2%-96.8%,基質(zhì)效應(yīng)94.5%～103.8%,貝那普利拉回收率79%-82.7%,基質(zhì)效應(yīng)94.7%-104.4%,樂卡地平回收率87.5%～103.0%,基質(zhì)效應(yīng)97.55%-107.8%。2.大鼠血漿方法學(xué)驗證結(jié)果：貝那普利、貝那普利拉和樂卡地平的線性范圍分別為0.8～800 ng/mL、12～12000 ng/mL和1.5～1350 ng/mL。貝那普利、貝那普利拉和樂卡地平的定量下限分別為0.8、12、1.5 ng/mL。日內(nèi)日間精密度RSD均小于15%,大鼠血漿樣品-80℃放置149天穩(wěn)定。3. Beagle犬口服給予鹽酸貝那普利樂卡地平(6+18) mg/kg/d,動物無異常反應(yīng),(20+60)、 (60+180) mg/kg/d劑量與鹽酸樂卡地平60 mg/kg/d、鹽酸貝那普利180mg/kg/d出現(xiàn)稀便、嘔吐、食量減少、牙齦增生；ALT、 TBIL、 TG升高,尿液膽紅素陽性；腎臟腎小管擴張,上皮細胞扁平。與兩單方組比較,組方后鹽酸貝那普利樂卡地平未出現(xiàn)新的毒性反應(yīng),表現(xiàn)為鹽酸貝那普利樂卡地平高劑量可導(dǎo)致部分犬肝臟和腎臟出現(xiàn)組織病理學(xué)的改變。Beagle犬第一天給藥后,鹽酸貝那普利樂卡地平(6+18)、 (20+60)、 (60+180) mg/kg/d三個劑量組貝那普利的AUCo-t分別為：4276.6±2636.3、2343.6±3319.9、 35643.0±7163.1 μg/L·h;貝那普利拉的AUCo-t分別為：22171.3±8448.2, 70660.1±23362.9、409848.3±98893.7 μg/L·h;樂卡地平的AUCo-t分別為：125.6±+79.9、 283.9±162.3、662.2±319.3 μg/L·h。單方鹽酸樂卡地平60 mg/kg/d樂卡地平的AUCo-t為：369.1±298.1 μg/L·h。單方鹽酸貝那普利180 mg/kg/d,貝那普利的AUCo-t為：27031.9±9235.4 μg/L·h;貝那普利拉的AUCo-t為：284450.5±86289.2 μg/L·h。第274天給藥后,鹽酸貝那普利樂卡地平(6+18)、 (20+60)、(60+180) mg/kg/d三個劑量組貝那普利的AUCo-t分別為：3837.9±1944.7、14498.2±7456.1、 33241.2±9815.2 μg/L·h;貝那普利拉的AUC0-t分別為：10086.6±2432.0, 60389.8±34442.9,280135.8±72457.3 μg/L·h。樂卡地平的AUCo-t分別為：130.3±104.2、 790.9±386.1、1853.7±1427.5 μg/L·h。單方鹽酸樂卡地平60 mg/kg/d樂卡地平的AUC0-t為：1939.1±1649.4 μg/L·h。單方鹽酸貝那普利180 mg/kg/d,貝那普利的AUCo-t為：30629.9±5465.9 μg/L·h;貝那普利拉的AUCo-t為：237418.4±66054.8 μg/L·h。((6+18)、(20+60)和(60+180) mg/kg)三個劑量和單方鹽酸貝那普利(180mg/kg/d)、單方鹽酸樂卡地平(60 mg/kg/d),給藥274天與首次給藥貝那普利AUC比值分別為1.0、1.3、1.0和1.3；貝那普利拉AUC比值分別為0.5、1.0、0.7和0.9；樂卡地平AUC比值分別為1.1、3.7、3.9和10.5。4.大鼠口服給予鹽酸貝那普利樂卡地平(4+12) mg/kg/d,動物無異常反應(yīng),(13+39) (40+120) mg/kg/d劑量與鹽酸樂卡地平40 mg/kg/d、鹽酸貝那普利120mg/kg/d均可導(dǎo)致血液生化指標異常；復(fù)方降壓藥JY17 (40+120) mg/kg/d、鹽酸樂卡地平40 mg/kg/d劑量可引起SD大鼠腎臟組織病理學(xué)改變。貝那普利在大鼠體內(nèi)快速轉(zhuǎn)化為活性代謝產(chǎn)物貝那普利拉,血漿中幾乎檢測不到原形藥物貝那普利。大鼠第一天給藥后,鹽酸貝那普利樂卡地平(4+12)、(13+39)、(40+120) mg/kg/d三個劑量組貝那普利拉的AUCo-t分別為：109.6±6609、 30954.7±14906.、 97434.9±18599.8 μg/L·h;樂卡地平的AUCo-t分別為：1653.7±540.7、4391.4±1506.7、12553.9±3143.6 μg/L·h。單方鹽酸樂卡地平40 mg/kg/d樂卡地平的.AUCo-t為：17302.5±4095.5μg/L·h。單方鹽酸貝那普利120mg/kg/d,貝那普利拉的AUCo-t為：42329.7±15679.7 μg/L·h。第183天給藥后,鹽酸貝那普利樂卡地平(4+12)、(13+39)、(40+120) mg/kg/d三個劑量組貝那普利拉的AUCo-t分別為：17849.5±6241.5、41423.6±13415.3、 101125.6±23839.8μg/L·h;樂卡地平的AUCo-t分別為：1509.2±786.2、 6444.4±1068.1、 19625.2±6899.2 μg/L·h。單方鹽酸樂卡地平40 mg/kg/d樂卡地平的AUCo-t為：18579.1±3855.2 μg/L·h。單方鹽酸貝那普利120 mg/kg/d,貝那普利拉的AUC0-t為：114166.6±22773.8 μg/L·h。((4+12)、(13+39)和(40+120) mg/kg)三個劑量和單方鹽酸貝那普利(120mg/kg/d)、單方鹽酸樂卡地平(40mg/kg/d),給藥183天與首次給藥貝那普利拉AUC比值分別為1.8、1.3、1.0和2.7；樂卡地平AUC比值分別為0.9、1.5、1.6和1.1。結(jié)論1.本法的精密度、準確度、專屬性和定量線性范圍均符合體內(nèi)藥物分析的要求。該方法適合鹽酸貝那普利樂卡地平片毒代動力學(xué)試驗研究。2.鹽酸貝那普利樂卡地平片在Beagle犬和大鼠體內(nèi)均呈線性動力學(xué)過程。Beagle犬連續(xù)274天口服鹽酸貝那普利樂卡地平后貝那普利和貝那普利活性代謝產(chǎn)物貝那普利拉在Beagle犬體內(nèi)均不引起蓄積；樂卡地平劑量大于6 mg/kg/d時在Beagle犬體內(nèi)可能引起蓄積。高劑量樂卡地平可以起貝那普利、貝那普利拉暴露量的增加。大鼠連續(xù)183天灌胃給予鹽酸貝那普利樂卡地平后貝那普利、貝那普利活性代謝產(chǎn)物貝那普利拉及樂卡地平在大鼠體內(nèi)均不引起蓄積。高劑量樂卡地平可以引起貝那普利拉暴露量的增加,高劑量貝那普利可降低樂卡地平暴露量。
【關(guān)鍵詞】：貝那普利 樂卡地平 毒代動力學(xué) 高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀 大鼠 比格犬
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要10-14
• ABSTRACT14-18
• 縮略語說明18-20
• 前言20-22
• 第一部分 生物樣品中貝那普利、貝那普利拉和樂卡地平定量分析方法的建立與確證22-50
• 1 實驗儀器與試劑22
• 1.1 主要儀器22
• 1.2 主要試劑22
• 2 實驗方法22-26
• 2.1 標準溶液配制22-25
• 2.1.1 貝那普利、貝那普利拉及樂卡地平儲備液配制22-23
• 2.1.2 測定犬血漿樣本標準系列溶液配制23-24
• 2.1.3 測定大鼠血漿樣本標準系列溶液配制24-25
• 2.1.4 測定犬血漿樣本內(nèi)標溶液配制25
• 2.1.5 測定大鼠血漿樣本內(nèi)標溶液配制25
• 2.2 樣本分析25-26
• 2.2.1 色譜條件25
• 2.2.2 質(zhì)譜條件25-26
• 2.2.3 犬血漿樣品預(yù)處理26
• 2.2.4 大鼠血漿樣品預(yù)處理26
• 3 犬血漿樣本測定方法確證26-41
• 3.1 方法的選擇性26-31
• 3.2 標準曲線31-32
• 3.3 定量下限32-33
• 3.4 方法精密度與準確度33-36
• 3.5 穩(wěn)定性試驗36-38
• 3.6 基質(zhì)效應(yīng)38-40
• 3.7 回收率40-41
• 4 大鼠血漿樣本測定方法確證41-48
• 4.1 方法的選擇性41-43
• 4.2 標準曲線43-44
• 4.3 定量下限44-45
• 4.4 方法精密度與準確度45-47
• 4.5 穩(wěn)定性試驗47-48
• 5 討論48-49
• 5.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化48-49
• 5.2 色譜條件的優(yōu)化49
• 5.3 血漿樣本處理方法的優(yōu)化49
• 6 結(jié)論49-50
• 第二部分 鹽酸貝那普利樂卡地平片犬重復(fù)給藥毒代動力學(xué)研究50-79
• 1 實驗材料50-51
• 1.1 儀器和試劑50
• 1.2 供試品50
• 1.3 實驗動物與飼養(yǎng)環(huán)境50-51
• 2 實驗方法51-52
• 2.1 動物分組與給藥51
• 2.2 毒性反應(yīng)考察51
• 2.3 樣本采集51
• 2.4 樣本測定51-52
• 2.5 數(shù)據(jù)處理52
• 3 結(jié)果52-77
• 3.1 毒性考察52-53
• 3.2 毒代動力學(xué)結(jié)果53-77
• 3.2.1 Beagle犬重復(fù)給藥貝那普利、貝那普利拉及樂卡地平血藥濃度數(shù)據(jù)53-66
• 3.2.2 Beagle犬重復(fù)給藥貝那普利、貝那普利拉及樂卡地平血藥濃度曲線66-69
• 3.2.3 Beagle犬重復(fù)給藥貝那普利、貝那普利拉及樂卡地平主要動力學(xué)參數(shù)69-73
• 3.2.4 Beagle犬重復(fù)給藥各組別首次、末次給藥后藥時曲線下面積比較73-77
• 4 討論77-78
• 5 結(jié)論78-79
• 第三部分 鹽酸貝那普利樂卡地平片大鼠重復(fù)給藥毒代動力學(xué)研究79-96
• 1 實驗材料79
• 1.1 儀器和試劑79
• 1.2 供試品79
• 1.3 實驗動物與飼養(yǎng)環(huán)境79
• 2 實驗方法79-81
• 2.1 動物分組與給藥79-80
• 2.2 毒性反應(yīng)考察80
• 2.3 樣本采集80
• 2.4 樣本測定80
• 2.5 數(shù)據(jù)處理80-81
• 3 結(jié)果81-95
• 3.1 毒性考察81
• 3.2 毒代動力學(xué)結(jié)果81-95
• 3.2.1 大鼠重復(fù)給藥貝那普利、貝那普利拉及樂卡地平血藥濃度數(shù)據(jù)81-84
• 3.2.2 大鼠重復(fù)給藥貝那普利拉及樂卡地平血藥濃度曲線84-86
• 3.2.3 大鼠重復(fù)給藥貝那普利拉及樂卡地平主要動力學(xué)參數(shù)86-91
• 3.2.4 大鼠重復(fù)給藥各組別首次、末次給藥后藥時曲線下面積比較91-95
• 4 討論95
• 5 結(jié)論95-96
• 全文結(jié)論96-97
• 參考文獻97-99
• 致謝99-100
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文100-101
• 附件101

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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  本文關(guān)鍵詞：鹽酸貝那普利樂卡地平片毒代動力學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：379300