發(fā)布時間：2023-04-12 05:58

　　蛋白藥物開發(fā)過程中的問題之一就是蛋白質(zhì)分子的不穩(wěn)定性,因此開發(fā)穩(wěn)定性好、有效期長、適于企業(yè)生產(chǎn)的藥物劑型尤為重要。目前臨床上通常使用水針劑和凍干粉針劑兩種劑型的蛋白質(zhì)藥物,水針劑生產(chǎn)和使用方便,不需要使用前復溶,但蛋白質(zhì)穩(wěn)定性不好,需要低溫保存,凍干粉劑型蛋白穩(wěn)定性好,運輸存儲方便,使用前需要復溶。真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白(Fungal immunomodulatory protein,Fip)是從靈芝、蘑菇等高等擔子菌中提取的一類小分子蛋白質(zhì)。其中重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(recombinant Ganoderma Lucidum Immunoregulatory Protein,rLZ-8)是從靈芝中提取的一種真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白,具有血細胞凝集、促進淋巴細胞的增殖及各種細胞因子的分泌、抗腫瘤、升高白細胞等生物學活性,近年來引起了科研人員的廣泛關注,具有重要的研究意義。本課題組應用畢赤酵母菌株重組表達了rLZ-8,但發(fā)現(xiàn)rLZ-8在水溶劑中穩(wěn)定性不佳,且液體狀態(tài)使得存儲和運輸較為麻煩,不適合制備成水針劑使用,因此研究rLZ-8的凍干粉針劑至關重要�；谝陨蠁栴},本論文首先構建rLZ-8表達菌株,優(yōu)...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
    1.1 靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白（LZ-8）
        1.1.1 LZ-8 簡介
        1.1.2 LZ-8 的生物學活性
    1.2 畢赤酵母表達系統(tǒng)
        1.2.1 畢赤酵母表達系統(tǒng)的特點
        1.2.2 畢赤酵母表達宿主菌
        1.2.3 影響外源蛋白在畢赤酵母中表達的主要因素
    1.3 rLZ-8 表達的研究進展
    1.4 蛋白質(zhì)藥物制劑概述
        1.4.1 蛋白質(zhì)藥物劑型的選擇
        1.4.2 蛋白注射劑常用輔料分類
    1.5 真空冷凍干燥法
        1.5.1 真空冷凍干燥法簡介
        1.5.2 真空冷凍干燥的優(yōu)勢
    1.6 論文的立題依據(jù)和內(nèi)容
第2章 rLZ-8 表達菌株的構建及表達
    2.1 實驗儀器與試劑
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 設計合成rLZ-8 片段
        2.2.2 構建重組質(zhì)粒
        2.2.3 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)及線性化制備篩選
        2.2.4 rLZ-8 的搖瓶小量表達
    2.3 實驗結果與分析
        2.3.1 構建重組rLZ-8 組成型表達載體
        2.3.2 構建重組rLZ-8 組成型畢赤酵母表達菌株
        2.3.3 重組表達菌株的鑒定
    2.4 小結
    2.5 討論
第3章rLZ-8 發(fā)酵工藝的建立及優(yōu)化
    3.1 實驗儀器與試劑
        3.1.1 實驗儀器
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 試劑配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 rLZ-8 菌株的中試發(fā)酵
        3.2.2 菌液粗處理
        3.2.3 rLZ-8 的純化
    3.3 實驗結果與分析
        3.3.1 rLZ-8 菌株中試發(fā)酵工藝的優(yōu)化
        3.3.2 畢赤酵母表達rLZ-8 的發(fā)酵穩(wěn)定實驗
        3.3.3 HPLC測定蛋白純度
    3.4 小結
    3.5 討論
第4章rLZ-8 凍干粉針劑處方篩選及凍干工藝研究
    4.1 實驗儀器與試劑
        4.1.1 實驗儀器
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 試劑配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 輔料篩選
        4.2.2 輔料處方組合篩選
        4.2.3 rLZ-8 凍干工藝的摸索
    4.3 實驗結果與分析
        4.3.1 穩(wěn)定劑的選擇
        4.3.2 表面活性劑的選擇
        4.3.3 處方組合的選擇
        4.3.4 凍干條件的選擇
    4.4 小結
    4.5 討論
第5章 結論
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3790573