第一部分抗CD30抗體與力達霉素偶聯(lián)藥物的制備和抗淋巴瘤活性研究研究目的:抗體偶聯(lián)藥物(antibody-drug conjugates,ADC)的發(fā)展和臨床應(yīng)用改變了血液惡性腫瘤的治療模式。CD30是腫瘤壞死因子受體超家族(tumor necrosis factor receptor superfamily,TNFRS)成員,屬于I型跨膜糖蛋白,其特異性地高表達于霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphomas,HLs)和間變性大細胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphomas,ALCLs),可作為抗體偶聯(lián)藥物的理想靶點。力達霉素(lidamycin,LDM)是我所自主研發(fā)的烯二炔類高效抗腫瘤抗生素,由活性烯二炔發(fā)色團AE和輔基蛋白LDP組成,二者可在體外進行拆分和組裝,LDP可通過基因工程技術(shù)與抗體偶聯(lián)。因此,LDM是理想的ADC“彈頭”藥物。本研究以LDM為“彈頭”藥物,通過基因工程和體外組裝相結(jié)合的“兩步法”構(gòu)建靶向CD30的新型ADC,并研究其對HLs和ALCLs的抗腫瘤活性。研究方法:通過基因工程技術(shù)將LDP偶聯(lián)到抗CD30抗體的輕鏈N端,構(gòu)建融合...

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【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
第一部分 靶向CD30抗體與力達霉素偶聯(lián)藥物的制備和抗淋巴瘤作用研究
    前言
    1. 實驗材料
        1.1 菌株
        1.2 質(zhì)粒
        1.3 細胞株及培養(yǎng)
        1.4 實驗動物
        1.5 主要試劑與耗材
        1.6 主要設(shè)備
        1.7 主要試劑配制
    2. 實驗方法
        2.1 分子生物學實驗方法
        2.2 CD30抗體anti-CD30及其融合蛋白anti-CD30-LDP表達載體的構(gòu)建
        2.3 表達載體轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞CHO/dhFr-

        2.4 融合蛋白anti-CD30-IgG和anti-CD30-LDP的分離純化
        2.5 細胞的培養(yǎng)
        2.6 融合蛋白對腫瘤細胞的體外活性分析
        2.7 活體成像法檢測融合蛋白體內(nèi)靶向性
        2.8 抗體偶聯(lián)藥物(ADC) anti-CD30-LDM的制備
        2.9 ADC藥物anti-CD30-LDM體外活性分析
        2.10 Anti-CD30-LDM體內(nèi)抗腫瘤活性評價
        2.11 統(tǒng)計學方法
    3. 實驗結(jié)果
        3.1 重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2 表達載體轉(zhuǎn)染CHO細胞及陽性克隆篩選
        3.3 CHO細胞的單克隆篩選
        3.4 融合蛋白的純化和鑒定
        3.5 融合蛋白體外生物學活性分析
        3.6 小動物活體成像觀察anti-CD30-LDP在體內(nèi)的腫瘤靶向能力
        3.7 融合蛋白anti-CD30-LDP與力達霉素發(fā)色團AE的組裝
        3.8 Anti-CD30-LDM對腫瘤細胞的增殖抑制或殺傷作用
        3.9 Anti-CD30-LDM對腫瘤細胞周期的影響
        3.10 Anti-CD30-LDM對腫瘤細胞凋亡過程的影響
        3.11 Anti-CD30-LDM對Karpas299移植瘤模型的生長抑制作用
    4. 討論
    5. 參考文獻
第二部分 Anti-CD30-LDM聯(lián)合克唑替尼對間變性大細胞淋巴瘤的治療作用
    前言
    1. 實驗材料
        1.1 細胞株
        1.2 試劑、耗材及設(shè)備
    2. 實驗方法
        2.1 藥物聯(lián)合作用評價
    3. 實驗結(jié)果
        3.1 Crizotinib對腫瘤細胞的增殖抑制作用
        3.2 Anti-CD30-LDM與crizotinib聯(lián)合對不同細胞的增殖抑制作用
        3.3 Anti-CD30-LDM與crizotinib聯(lián)合對細胞凋亡的誘導(dǎo)作用
        3.4 Anti-CD30-LDM和crizotinib聯(lián)合誘導(dǎo)細胞凋亡的機制
        3.5 Anti-CD30-LDM和crizotinib聯(lián)合作用的體內(nèi)抗腫瘤活性評價
    4. 討論
    5. 參考文獻
結(jié)論
創(chuàng)新點
綜述
附錄
    博士期間科研成果
    縮略語表
致謝



本文編號：3788453

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