第一部分抗CD30抗體與力達(dá)霉素偶聯(lián)藥物的制備和抗淋巴瘤活性研究研究目的:抗體偶聯(lián)藥物(antibody-drug conjugates,ADC)的發(fā)展和臨床應(yīng)用改變了血液惡性腫瘤的治療模式。CD30是腫瘤壞死因子受體超家族(tumor necrosis factor receptor superfamily,TNFRS)成員,屬于I型跨膜糖蛋白,其特異性地高表達(dá)于霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphomas,HLs)和間變性大細(xì)胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphomas,ALCLs),可作為抗體偶聯(lián)藥物的理想靶點(diǎn)。力達(dá)霉素(lidamycin,LDM)是我所自主研發(fā)的烯二炔類高效抗腫瘤抗生素,由活性烯二炔發(fā)色團(tuán)AE和輔基蛋白LDP組成,二者可在體外進(jìn)行拆分和組裝,LDP可通過基因工程技術(shù)與抗體偶聯(lián)。因此,LDM是理想的ADC“彈頭”藥物。本研究以LDM為“彈頭”藥物,通過基因工程和體外組裝相結(jié)合的“兩步法”構(gòu)建靶向CD30的新型ADC,并研究其對(duì)HLs和ALCLs的抗腫瘤活性。研究方法:通過基因工程技術(shù)將LDP偶聯(lián)到抗CD30抗體的輕鏈N端,構(gòu)建融合...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一部分 靶向CD30抗體與力達(dá)霉素偶聯(lián)藥物的制備和抗淋巴瘤作用研究
    前言
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 菌株
        1.2 質(zhì)粒
        1.3 細(xì)胞株及培養(yǎng)
        1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.5 主要試劑與耗材
        1.6 主要設(shè)備
        1.7 主要試劑配制
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法
        2.2 CD30抗體anti-CD30及其融合蛋白anti-CD30-LDP表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3 表達(dá)載體轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞CHO/dhFr-

        2.4 融合蛋白anti-CD30-IgG和anti-CD30-LDP的分離純化
        2.5 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.6 融合蛋白對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外活性分析
        2.7 活體成像法檢測(cè)融合蛋白體內(nèi)靶向性
        2.8 抗體偶聯(lián)藥物(ADC) anti-CD30-LDM的制備
        2.9 ADC藥物anti-CD30-LDM體外活性分析
        2.10 Anti-CD30-LDM體內(nèi)抗腫瘤活性評(píng)價(jià)
        2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2 表達(dá)載體轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞及陽性克隆篩選
        3.3 CHO細(xì)胞的單克隆篩選
        3.4 融合蛋白的純化和鑒定
        3.5 融合蛋白體外生物學(xué)活性分析
        3.6 小動(dòng)物活體成像觀察anti-CD30-LDP在體內(nèi)的腫瘤靶向能力
        3.7 融合蛋白anti-CD30-LDP與力達(dá)霉素發(fā)色團(tuán)AE的組裝
        3.8 Anti-CD30-LDM對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制或殺傷作用
        3.9 Anti-CD30-LDM對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響
        3.10 Anti-CD30-LDM對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡過程的影響
        3.11 Anti-CD30-LDM對(duì)Karpas299移植瘤模型的生長抑制作用
    4. 討論
    5. 參考文獻(xiàn)
第二部分 Anti-CD30-LDM聯(lián)合克唑替尼對(duì)間變性大細(xì)胞淋巴瘤的治療作用
    前言
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 試劑、耗材及設(shè)備
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 藥物聯(lián)合作用評(píng)價(jià)
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 Crizotinib對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用
        3.2 Anti-CD30-LDM與crizotinib聯(lián)合對(duì)不同細(xì)胞的增殖抑制作用
        3.3 Anti-CD30-LDM與crizotinib聯(lián)合對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用
        3.4 Anti-CD30-LDM和crizotinib聯(lián)合誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制
        3.5 Anti-CD30-LDM和crizotinib聯(lián)合作用的體內(nèi)抗腫瘤活性評(píng)價(jià)
    4. 討論
    5. 參考文獻(xiàn)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
綜述
附錄
    博士期間科研成果
    縮略語表
致謝



本文編號(hào)：3788453

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