人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起全球小于一歲嬰幼兒急性下呼吸道感染最主要的病原體,同時RSV還可以感染器官移植以后的病人、免疫缺陷人群以及老年人,致死率極高。RSV是1956年在一只黑猩猩的鼻炎分泌液中首次發(fā)現(xiàn)的,一年后在患有呼吸道疾病感染的嬰兒體內(nèi)分離出同樣的病毒。因該病毒可致使感染的細(xì)胞產(chǎn)生特殊的細(xì)胞間融合現(xiàn)象,故稱之為“呼吸道合胞病毒”。RSV每年感染3千萬左右的嬰幼兒,其中對發(fā)展中國家的影響最大。在全世界范圍內(nèi),迄今無疫苗或有效的藥物來治療其感染。因此急需研發(fā)有效的抗病毒藥物和疫苗。環(huán)靶明(Cyclopamine,CPM)是一種異甾體類生物堿,對多種腫瘤都有良好的抑制作用。我們課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)環(huán)靶明能夠有效抑制呼吸道合胞病毒的復(fù)制,但其可影響Hedgehog信號通路的正常活性,具有致畸作用,這一特性妨礙了將其開發(fā)為治療病毒感染的兒科用藥。基于之前的研究,我們課題組在CPM結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了一系列的修飾,設(shè)計了 14種類似物,根據(jù)修飾位置和基團(tuán)的不同分為4個系列,S1-1,S1-2,S1-3,S1-4為第一...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 緒論
    1.1 呼吸道合胞病毒的生物學(xué)性質(zhì)
        1.1.1 呼吸道合胞病毒的分類
        1.1.2 呼吸道合胞病毒形態(tài)的多樣性
        1.1.3 呼吸道合胞病毒基因組結(jié)構(gòu)及其功能作用
        1.1.4 呼吸道合胞病毒的生活史
    1.2 呼吸道合胞病毒的傳播途徑及流行情況
        1.2.1 呼吸道合胞病毒的傳播
        1.2.2 呼吸道合胞病毒的流行情況
        1.2.3 嬰幼兒感染呼吸道合胞病毒的臨床癥狀
    1.3 人呼吸道合胞病毒的藥物及疫苗研究進(jìn)展
        1.3.1 人呼吸道合胞病毒藥物的研究進(jìn)展
        1.3.2 人呼吸道合胞病毒疫苗的研究進(jìn)展
    1.4 本研究的內(nèi)容和意義
第二章 快速抗RSV藥物篩選方法的建立及CPM類似物抑制RSV復(fù)制能力的鑒定
    研究背景
    2.1 實(shí)驗材料
        2.1.1 化合物
        2.1.2 細(xì)胞和病毒株
        2.1.3 試劑耗材
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 常用溶液
    2.2 實(shí)驗方法
        2.2.1 HEp-2細(xì)胞的復(fù)蘇及傳代
        2.2.2 HEp-2細(xì)胞的凍存
        2.2.3 RSV-Luc毒株的擴(kuò)繁
        2.2.4 RSV-Luc毒株滴度的測定
        2.2.5 重組病毒RSV-Luc感染細(xì)胞熒光素酶活性與病毒滴度相關(guān)性分析
        2.2.6 RSV-Luc基于細(xì)胞水平藥篩模型的建立
        2.2.7 類似物的獲得
        2.2.8 CPM及其類似物細(xì)胞活力檢測
        2.2.9 CPM及其類似物抑制RSV-Luc復(fù)制能力的鑒定
        2.2.10 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實(shí)驗結(jié)果
        2.3.1 免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測RSV-Luc毒株的滴度
        2.3.2 重組病毒RSV-Luc感染細(xì)胞熒光素酶活性與病毒滴度相關(guān)性分析
        2.3.3 CPM抗病毒功能的濃度依賴性
        2.3.4 CPM及其類似物細(xì)胞活力檢測
        2.3.5 類似物抑制RSV-Luc復(fù)制能力的鑒定
    2.4 總結(jié)
第三章 Smo介導(dǎo)的Hedgehog信號通路活性檢測方法建立及CPM類似物干預(yù)Smo功能的分析
    研宄背景
    3.1 實(shí)驗材料
        3.1.1 化合物
        3.1.2 細(xì)胞系
    3.2 實(shí)驗方法
        3.2.1 基于雙報告基因檢測系統(tǒng)檢測Smo介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄事件水平的分析模型
        3.2.2 Smo介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄事件的人為調(diào)控
        3.2.3 CPM及類似物對Smo介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄事件的干預(yù)程度分析
        3.2.4 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗結(jié)果
        3.3.1 兩種激活劑的比較
        3.3.2 兩種激活劑激活的基礎(chǔ)上兩種抑制劑抑制水平的比較
        3.3.3 六種化合物對Hedgehog信號通路干擾水平IC50的分析
    3.4 總結(jié)
第四章 CPM和最佳類似物作用靶點(diǎn)分析
    研宄背景
    4.1 實(shí)驗材料
        4.1.1 化合物
        4.1.2 細(xì)胞系及質(zhì)粒
    4.2 實(shí)驗方法
        4.2.1 化合物功能的評估方法
        4.2.2 質(zhì)粒的抽提
        4.2.3 微基因組技術(shù)檢測CPM和最佳類似物作用靶點(diǎn)
    4.3 實(shí)驗結(jié)果
        4.3.1 化合物的綜合評估
        4.3.2 CPM及S2-5作用靶點(diǎn)分析
    4.4 總結(jié)
第五章 討論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
學(xué)位論文評閱及答辯情況表



本文編號：3779097