本文關(guān)鍵詞：治療原發(fā)性肺癌的肺吸入冬凌草甲素大多孔微粒的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肺癌發(fā)生率和死亡率都很高,其中非小細胞肺癌(NSCLC)占主要,約80-85%。NSCLC臨床治療以化療和放療為主,常通過靜脈和口服給藥,全身分布,到達肺中的藥物有限,毒副作用大。本研究中采用肺吸入大多孔微粒制劑局部治療肺癌,減小藥量,降低毒性。選擇冬凌草甲素作為抗腫瘤藥物,但其水溶性差,結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,應(yīng)用一直受到限制。本文采用兩種不同的工藝制備載冬凌草甲素的PLGA肺吸入大多孔微粒,克服了冬凌草甲素的缺點,并避免被肺泡巨噬細胞吞噬,增加藥物到達腫瘤組織的濃度。以粉末性質(zhì)、載藥量和包封率為指標,篩選最優(yōu)處方和工藝,并對大多孔微粒進行體內(nèi)外性質(zhì)考察。用化學(xué)誘導(dǎo)的方法建立了原發(fā)性非小細胞肺癌模型,用于抗腫瘤藥效學(xué)評價。直接氣管噴入冬凌草甲素大多孔微粒,考察了其體內(nèi)抗腫瘤效果和作用機制,探討了肺部給藥治療原發(fā)性肺癌的可行性和理論基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容如下:1.乳液溶劑揮發(fā)法制備冬凌草甲素大多孔微粒(LPMP)通過工藝參數(shù)調(diào)整,制備滿足需求的幾何粒徑大且多孔的微粒,并以包封率和載藥量為指標,用正交實驗篩選出冬凌草甲素大多孔微粒最優(yōu)處方為35%PLGA、1.5%致孔劑和1%PVA(w/v)。其載藥量和包封率分別為9.3±0.1%和81.5±1.0%。在掃描電鏡下觀察微粒表面多孔,內(nèi)部也有孔道分布。測得大多孔微粒幾何粒徑D50 11.63±2.32μm,堆密度0.057±0.014g/ml,休止角26.52±4.1°,空氣動力學(xué)粒徑2.72±0.28μm,肺部沉積率29.7%,適合肺吸入給藥。2.靜電紡絲法制備冬凌草甲素多孔微粒(EPM)嘗試用靜電紡絲的方法制備多孔微粒,工藝簡便,環(huán)境因素可控。以多孔微粒外觀為指標優(yōu)選冬凌草甲素多孔微粒最優(yōu)處方為6%PLGA、1.5%致孔劑和油水比為10:1。其載藥量和包封率分別為5.86±0.2%和58.59±2.0%。在掃描電鏡下觀察到微粒表面多孔,內(nèi)部也有孔道分布。測得靜電紡微粒粒徑D505.27μm,堆密度0.151±0.022g/ml,空氣動力學(xué)粒徑2.05±0.14μm,休止角29.37±6.6°,肺部沉積率19.1%,符合肺吸入粉霧劑要求。3.冬凌草甲素含量測定方法建立了HPLC法測定冬凌草甲素的含量,用于計算冬凌草甲素在制劑中的含量。該方法準確、可靠。4.冬凌草甲素大多孔微粒及靜電紡多孔微粒體內(nèi)外評價體外釋放實驗表明48小時冬凌草甲素可從大多孔微粒中釋放達到80%,釋放機理符合Ritger-Peppas釋放,屬于骨架溶蝕和藥物擴散共同作用。通過體外肺巨噬細胞清除實驗,證明了在12小時內(nèi),大多孔微粒在釋藥的同時,也能避免被巨噬細胞吞噬,提高藥物在腫瘤細胞的濃度。體內(nèi)CT成像表明大多孔微粒大部分沉積在肺部深處,體外用NGI測定大多孔微粒的FPF值為29.7%,體內(nèi)外相關(guān)性較好。在120小時內(nèi),冬凌草甲素在靜電紡多孔微粒中釋放達到70%,釋放機理和體內(nèi)外肺部沉積結(jié)果與乳液溶劑揮發(fā)法制備的大多孔微粒相似。5.原發(fā)性非小細胞肺癌模型建立采用三甲基膽蒽和二乙基亞硝胺聯(lián)合化學(xué)誘導(dǎo)的方式,在短時間內(nèi)建立了原發(fā)性非小細胞肺癌,并通過凋亡、甲基化等生化檢查,證明原發(fā)性肺癌建立成功。根據(jù)組織病理切片證明為非小細胞肺癌中的鱗癌。與移植瘤和轉(zhuǎn)移瘤相比,化學(xué)誘導(dǎo)的方法建立的腫瘤模型與臨床上肺癌發(fā)生過程相似。6.冬凌草甲素大多孔微粒及靜電紡多孔微粒治療原發(fā)性肺癌的效果體內(nèi)抗NSCLC藥效結(jié)果證明了大多孔微粒能很好提高冬凌草甲素對肺癌的抗腫瘤作用,與陽性藥相當。與原料藥治療組相比,冬凌草甲素大多孔微粒組的MMP降低,CD31和Bcl-2都有低表達(p0.01),Caspase-3、Caspase-9和Bax都為高表達(p0.05),驗證了冬凌草甲素體內(nèi)抗癌機制主要通過線粒體途徑,進一步激活Caspase聯(lián)級信號通路,引發(fā)癌細胞凋亡,為臨床提供一種新型治療肺癌的藥物和給藥途徑。通過CT成像和病理的初步抗癌藥效結(jié)果顯示靜電紡多孔微粒也能很好的提高冬凌草甲素對肺癌的治療效果。提供了一種新的簡單快速制備肺吸入多孔微粒的工藝。
【關(guān)鍵詞】：肺部給藥 大多孔微粒 非小細胞肺癌 冬凌草甲素 靜電紡絲
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R943
【目錄】：

• 縮寫表10-11
• 中文摘要11-14
• Abstract14-18
• 前言18-28
• 第一章 肺吸入冬凌草甲素大多孔微粒的制備和評價28-62
• 第一節(jié) 乳化-溶劑揮發(fā)法制備冬凌草甲素大多孔微粒28-44
• 1 材料與儀器28
• 2 方法28-32
• 2.1 冬凌草甲素大多孔微粒的制備28-29
• 2.2 冬凌草甲素大多孔微粒的處方篩選29-30
• 2.3 冬凌草甲素大多孔微粒的性質(zhì)驗證30
• 2.4 冬凌草甲素粉體學(xué)性質(zhì)30-32
• 3 結(jié)果與討論32-44
• 3.1 不同轉(zhuǎn)速對大多孔微粒粒徑的影響32-33
• 3.2 不同PLGA濃度的影響33-34
• 3.3 不同致孔劑濃度的影響34-35
• 3.4 不同PVA濃度的影響35-36
• 3.5 最優(yōu)處方的篩選36-37
• 3.6 冬凌草甲素大多孔微粒形態(tài)觀察37-38
• 3.7 X射線衍射驗證38-41
• 3.8 差示掃描量熱驗證41-43
• 3.9 冬凌草甲素大多孔微粒的粉體學(xué)性質(zhì)43-44
• 第二節(jié) 靜電紡法制備冬凌草甲素多孔微粒44-60
• 1 材料與儀器44-45
• 2 方法45-47
• 2.1 空白靜電紡多孔微粒的制備45
• 2.2 空白靜電紡多孔微粒的處方篩選45-46
• 2.3 載冬凌草甲素靜電紡多孔微粒的制備46
• 2.4 冬凌草甲素靜電紡微粒性質(zhì)表征46-47
• 2.5 冬凌草甲素靜電紡多孔微粒粉體學(xué)性質(zhì)47
• 3 結(jié)果與討論47-60
• 3.1 不同電壓、噴射距離的工藝影響47-48
• 3.2 不同PLGA濃度的影響48-49
• 3.3 不同致孔劑量的影響49
• 3.4 不同油水比的影響49-50
• 3.5 最優(yōu)空白處方及載冬凌草甲素處方篩選50-52
• 3.6 紅外光譜52-54
• 3.7 X射線衍射54-57
• 3.8 差示掃描量熱57-59
• 3.9 冬凌草甲素靜電紡微粒粉體學(xué)性質(zhì)59-60
• 本章小結(jié)60-62
• 第二章 冬凌草甲素的分析62-65
• 1 材料與儀器62
• 2 方法62-63
• 2.1 高效液相色譜條件62
• 2.2 冬凌草甲素標準曲線的建立62
• 2.3 方法學(xué)驗證62-63
• 3 結(jié)果與討論63-64
• 3.1 冬凌草甲素標準曲線63
• 3.2 精密度63-64
• 3.3 回收率64
• 本章小結(jié)64-65
• 第三章 冬凌草甲素大多孔微粒體內(nèi)外研究65-77
• 第一節(jié) 乳化-溶劑揮發(fā)法制備冬凌草甲素大多孔微粒體內(nèi)外研究65-71
• 1 材料與儀器65
• 2 方法65-66
• 2.1 冬凌草甲素大多孔微粒體外釋放65
• 2.2 冬凌草甲素大多孔微粒體外釋放形態(tài)觀察65-66
• 2.3 體外巨噬細胞吞噬觀察66
• 2.4 體內(nèi)肺部沉積考察66
• 3 結(jié)果與討論66-71
• 3.1 冬凌草甲素大多孔微粒體外釋放和形態(tài)觀察66-68
• 3.2 冬凌草甲素大多孔微粒體外釋放機理68-69
• 3.3 體外巨噬細胞對大多孔微粒的吞噬69-70
• 3.4 體內(nèi)肺部沉積70-71
• 第二節(jié) 靜電紡法制備冬凌草甲素多孔微粒體內(nèi)外研究71-75
• 1 材料與儀器71-72
• 2 方法72
• 2.1 冬凌草甲素靜電紡多孔微粒體外釋放72
• 2.2 冬凌草甲素靜電紡多孔微粒體外釋放形態(tài)觀察72
• 2.3 體內(nèi)肺部沉積考察72
• 3 結(jié)果與討論72-75
• 3.1 冬凌草甲素靜電紡多孔微粒體外釋放和形態(tài)觀察72-73
• 3.2 冬凌草甲素靜電紡多孔微粒體外釋放機理73-74
• 3.3 體內(nèi)肺部沉積74-75
• 本章小結(jié)75-77
• 第四章 肺癌模型的建立77-88
• 1 材料與儀器77-78
• 2 方法78-82
• 2.1 動物分組78
• 2.2 給藥方案78
• 2.3 檢測指標78-82
• 3 結(jié)果與討論82-87
• 3.1 大鼠肺組織及病理觀察82-83
• 3.2 大鼠肺組織中Bcl-2 的表達83-84
• 3.3 大鼠肺組織凋亡檢測84-85
• 3.4 肺組織基因甲基化檢測85-87
• 本章小結(jié)87-88
• 第五章 冬凌草甲素大多孔微粒治療肺癌的藥效和機制研究88-106
• 第一節(jié) 冬凌草甲素大多孔微粒體內(nèi)藥效和機制研究88-100
• 1 材料與儀器88-89
• 2 方法89-94
• 2.1 給藥方案89-90
• 2.2 檢測指標90-94
• 3 結(jié)果與討論94-100
• 3.1 肺組織外觀和CT成像94-95
• 3.2 CD31蛋白肺內(nèi)的表達95-96
• 3.3 Tunel凋亡檢測及H&E染色96-98
• 3.4 線粒體膜電位的檢測98
• 3.5 Bcl-2 和Bax的肺內(nèi)表達98-99
• 3.6 Caspase-3 和Caspase-9 的基因檢測99-100
• 第二節(jié) 冬凌草甲素靜電紡多孔微粒體內(nèi)初步藥效評價100-104
• 1 材料與儀器100
• 2 方法100-101
• 2.1 給藥方案100-101
• 2.2 檢測指標101
• 3 結(jié)果與討論101-104
• 3.1 肺組織外觀和CT成像101-102
• 3.2 CD31蛋白肺內(nèi)的表達102-103
• 3.3 Tunel凋亡檢測及H&E染色103-104
• 本章小結(jié)104-106
• 全文總結(jié)106-108
• 研究內(nèi)容106-107
• 創(chuàng)新點107
• 主要不足107-108
• 參考文獻108-114
• 附錄114-116
• 致謝116-117
• 綜述117-122
• 參考文獻120-122

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1 張仁斌,楊一鳴,趙國棟,王圣群,顧群;YWG全多孔微粒硅膠的液相色譜效能研究[J];中國科學(xué);1979年05期

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1 朱李飛;治療原發(fā)性肺癌的肺吸入冬凌草甲素大多孔微粒的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：治療原發(fā)性肺癌的肺吸入冬凌草甲素大多孔微粒的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：376196