目的1明確小豆蔻明(cardamonin,CAR)抑制mTOR抑制劑[雷帕霉素(Rapamycin,RAP)或(AZD8055,AZD)]耐藥HeLa細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞增殖的作用。2探討CAR抑制RAP或AZD耐藥細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。方法1藥物濃度遞增法構(gòu)建耐RAP或AZD的HeLa細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞采用藥物濃度遞增法,在體外對(duì)HeLa及MCF-7細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)篩選,構(gòu)建RAP耐藥細(xì)胞(HeLa/RAP、MCF-7/RAP)或AZD耐藥細(xì)胞(HeLa/AZD、MCF-7/AZD),經(jīng)RAP與AZD細(xì)胞毒性試驗(yàn)及Western blot鑒定耐藥程度。2有限稀釋法獲取單細(xì)胞源性子代細(xì)胞亞克隆3細(xì)胞培養(yǎng)在常規(guī)培養(yǎng)條件下(37℃、5%CO₂、10%胎牛血清、100μg·mL^-1鏈霉素及100 U·mL^-1青霉素),1640培養(yǎng)液培養(yǎng)HeLa系列細(xì)胞(HeLa、HeLa/RAP、HeLa/AZD),High-glucose DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)MCF-7系列細(xì)胞(MCF-7、MCF-7/RAP、MCF-7/AZD)。保持細(xì)胞單層貼...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞對(duì)照表
摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要溶液配制
        1.4 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 構(gòu)建RAP或AZD耐藥的HeLa細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞
        2.3 細(xì)胞形態(tài)觀察
        2.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.5 有限稀釋法獲取單克隆
        2.6 MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖
        2.7 MTT法測(cè)定細(xì)胞生長曲線
        2.8 克隆及含藥單克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞增殖
        2.9 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.10 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
        2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1 成功構(gòu)建RAP或AZD耐藥的HeLa細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞
        1.1 RAP或AZD耐藥的HeLa細(xì)胞(HeLa/RAP、HeLa/AZD)
        1.2 RAP或AZD耐藥的MCF-7細(xì)胞(MCF-7/RAP、MCF-7/AZD)
    2 CAR抑制RAP或AZD耐藥細(xì)胞增殖的作用
        2.1 CAR抑制耐藥細(xì)胞的增殖
        2.2 CAR抑制耐藥細(xì)胞的克隆形成
    3 CAR抑制RAP或AZD耐藥細(xì)胞遷移及β-catenin蛋白表達(dá)的作用
    4 CAR抑制RAP或AZD耐藥細(xì)胞的mTOR信號(hào)通路活性
    5 CAR抑制RAP或AZD耐藥細(xì)胞ABC跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MDR1表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3760187