目的探討miR-21在抗結核藥物性肝細胞損傷中的作用機制。方法培養(yǎng)人正常肝細胞(HL-7702),以最佳三藥聯合濃度構建肝損傷細胞模型,將細胞分為6組:control組、藥物組、藥物+miR-21 inhibitor組、inhibitor陰性對照組、藥物+miR-21 mimics組、mimics陰性對照組。蘇木精-伊紅染色法(HE染色)觀察各組細胞形態(tài)學變化;賴氏法檢測各組丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)水平變化;實時熒光定量PCR (RT-PCR)法檢測miR-21及核轉錄因子κB (NF-κB)、白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的mRNA表達變化;Western blot法檢測各組NF-κB蛋白表達水平;酶聯免疫吸附法(ELISA)法檢測各組炎癥因子TNF-α、IL-6表達水平。結果與control組相比,藥物組細胞miR-21表達升高,NF-κB、TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白水平均升高;過表達miR-21可上調炎癥調節(jié)因子NF-κB的mRNA及蛋白表達,同時炎癥因子TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白水平也進一步上升;而...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 細胞培養(yǎng)及分組
    1.3 siRNA轉染
    1.4 細胞形態(tài)學觀察及肝功指標檢測
    1.5 肝細胞miR-21、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表達檢測
    1.6 肝細胞NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白含量檢測
    1.7 統(tǒng)計學處理
2 結果
    2.1 各組細胞形態(tài)學變化
    2.2 各組細胞上清液中ALT和AST的含量比較
    2.3 各組細胞miR-21和NF-κB、 TNF-α、IL-6的mRNA相對表達量比較
    2.4 各組NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表達比較
3 討論



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