目的探討miR-21在抗結(jié)核藥物性肝細(xì)胞損傷中的作用機制。方法培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞(HL-7702),以最佳三藥聯(lián)合濃度構(gòu)建肝損傷細(xì)胞模型,將細(xì)胞分為6組:control組、藥物組、藥物+miR-21 inhibitor組、inhibitor陰性對照組、藥物+miR-21 mimics組、mimics陰性對照組。蘇木精-伊紅染色法(HE染色)觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;賴氏法檢測各組丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平變化;實時熒光定量PCR (RT-PCR)法檢測miR-21及核轉(zhuǎn)錄因子κB (NF-κB)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的mRNA表達(dá)變化;Western blot法檢測各組NF-κB蛋白表達(dá)水平;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法檢測各組炎癥因子TNF-α、IL-6表達(dá)水平。結(jié)果與control組相比,藥物組細(xì)胞miR-21表達(dá)升高,NF-κB、TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白水平均升高;過表達(dá)miR-21可上調(diào)炎癥調(diào)節(jié)因子NF-κB的mRNA及蛋白表達(dá),同時炎癥因子TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白水平也進(jìn)一步上升;而...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及分組
    1.3 siRNA轉(zhuǎn)染
    1.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及肝功指標(biāo)檢測
    1.5 肝細(xì)胞miR-21、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)檢測
    1.6 肝細(xì)胞NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白含量檢測
    1.7 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
    2.2 各組細(xì)胞上清液中ALT和AST的含量比較
    2.3 各組細(xì)胞miR-21和NF-κB、 TNF-α、IL-6的mRNA相對表達(dá)量比較
    2.4 各組NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表達(dá)比較
3 討論



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