本文關(guān)鍵詞：表面修飾金絲桃苷納米微球的心肌靶向性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：制備金絲桃苷聚乳酸納米微球(Polylactic acid Nanoparticle loaded Hyperoside, HPN)并進(jìn)行表面靶向性修飾。對(duì)其形態(tài)、制備工藝、體外釋藥規(guī)律、大鼠體內(nèi)體外靶向性以及靶向機(jī)制進(jìn)行研究,同時(shí),研究其在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)過程,并對(duì)其靶向性的優(yōu)劣進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法：1.采用乳化-高壓勻質(zhì)法,分別制備金絲桃苷聚乳酸納米球以及表面靶向性修飾納米球(PAC-Polylactic acid Nanoparticle loaded Hyperoside, PAC-HPN)。掃描電鏡觀察形態(tài)特征：激光粒度儀測(cè)定其平均粒度、粒度分布及Zeta電位。2.采用均勻設(shè)計(jì)法,設(shè)立綜合評(píng)分方法,研究納米球的最佳制備工藝；差示掃描量熱法檢測(cè)納米球的制備效果。3.采用高效液相色譜法,建立納米球、細(xì)胞裂解液、大鼠血漿及組織勻漿中的金絲桃苷含量測(cè)定方法。對(duì)建立的方法進(jìn)行驗(yàn)證考察,確定其可靠性。4.透析法研究納米球的藥物體外釋藥規(guī)律。釋藥數(shù)據(jù)分別經(jīng)零級(jí)模型、單指數(shù)函數(shù)、雙指數(shù)函數(shù)、Weibull分布函數(shù)和Higuchi平方根函數(shù)模擬,根據(jù)AIC值和擬合度(R2)判斷評(píng)價(jià)曲線擬合優(yōu)度指標(biāo)。5.采用高效液相色譜法,建立表面靶向性修飾配體的摻入率檢測(cè)方法,并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)。6.以培養(yǎng)的大鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞為靶細(xì)胞,藥物的細(xì)胞蛋白攝取率為指標(biāo),研究納米球體外靶向性;以已知的β1受體阻滯劑阿替洛爾為工具藥物,研究其體外靶向性機(jī)制；以缺氧培養(yǎng)的大鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞為靶細(xì)胞,考察金絲桃苷聚乳酸納米球與表面靶向修飾納米球?qū)θ毖跣募〖?xì)胞保護(hù)效果的差異。7.分別尾靜脈注射PAC-HPN、HPN、金絲桃苷(Hyperoside, Hyp),考察大鼠體內(nèi)藥-時(shí)過程及各主要器官藥物分布,以峰濃度比Ce、相對(duì)攝取率Re及靶向效率te評(píng)價(jià)納米球的心肌靶向性。結(jié)果：1.制備的HPN及PAC-HPN,掃描電鏡觀察形態(tài)特征為類球形,表面稍粗糙。激光散射粒度儀分析平均粒徑及Zeta電位,HPN平均粒徑為(159±43.7) nm,粒徑范圍為106.2～226.5 nm。平均Zeta電位為(-12.7±0.23)mV; PAC-HPN平均粒徑為(200.7±44)nm,粒徑范圍為146.6-268.3 nm。平均Zeta電位為(4.57±0.24)mV。2.均勻設(shè)計(jì)法確定的最優(yōu)條件為聚乳酸和藥物的投料比10%、油水體積比15%、勻質(zhì)次數(shù)6次、勻質(zhì)壓力15000psi。差示掃描量熱法結(jié)果表明,在HPN及PAC-HPN圖譜中PLA的熔點(diǎn)峰基本消失,同時(shí)Hyp的熔融峰完全消失,表明Hyp在HPN及PAC-HPN中以無定型存在或者被PLA包裹。3.采用高效液相色譜法,建立了納米球、細(xì)胞裂解液、大鼠血漿及組織勻漿中的金絲桃苷含量測(cè)定方法。方法學(xué)考察的精密度、回收率、穩(wěn)定性、重復(fù)性等各項(xiàng)結(jié)果均符合檢測(cè)要求,方法簡便易行,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。4.納米球體外釋藥試驗(yàn)結(jié)果表明,HPN及PAC-HPN在釋放介質(zhì)中首日釋藥率分別為5.66%、4.26%；15天累積釋放率分別為56.89%、54.03%,不具有明顯的緩釋性。數(shù)據(jù)分別經(jīng)各釋放函數(shù)模擬,HPN及PAC-HPN體外釋放均符合Higuchi函數(shù)模型,其釋藥曲線分別為y=0.1678t1/2-0.039、y=0.1672t1/2-0.0548其T50分別為1 0.32天及11.01天。5.采用高效液相色譜法,建立了表面靶向性修飾配體的摻入率檢測(cè)方法,PAC的平均摻入為5.33±0.11%。摻入率并不與加入量成正比,其保持相對(duì)穩(wěn)定。方法學(xué)考察的精密度、回收率、穩(wěn)定性、重復(fù)性各項(xiàng)結(jié)果均符合檢測(cè)要求,方法簡便易行,結(jié)果準(zhǔn)確可靠。6.體外靶向性研究結(jié)果表明,HPN及PAC-HPN的藥物總攝取率分別O.141ng/μg、0.032ng/μg。其中,細(xì)胞胞吞方式攝取率分別為0.088 ng/μ.g、0.005ng/μg。加入β,受體阻滯劑Atenolol后,PAC-HPN的心肌細(xì)胞攝取明顯被抑制(P0.001),而對(duì)HPN的攝取沒有明顯變化(P0.05)。說明Atenolol競爭性抑制了心肌細(xì)胞對(duì)PAC-HPN的攝取,PAC-HPN具有心肌細(xì)胞靶向作用。對(duì)缺氧心肌細(xì)胞藥物攝取率試驗(yàn)結(jié)果表明,在常氧狀態(tài)下培養(yǎng)2、4、24 h,心肌細(xì)胞對(duì)PAC-HPN攝取率分別為HPN攝取率的3.72、4.73、4.67倍。而缺氧條件下,心肌細(xì)胞對(duì)PAC-HPN攝取率分別為HPN攝取率的4.32、6.27、42.5倍,增加倍數(shù)明顯高于常氧狀態(tài),說明由于缺氧使得心肌細(xì)胞表面的β1受體數(shù)量顯著增加,PAC-HP N對(duì)缺氧心肌細(xì)胞的靶向性更為突出,且隨著缺氧狀態(tài)的持續(xù),其靶向性越來越顯著。7.大鼠尾靜脈分別注射PAC-HPN、HPN、Hyp,給藥劑量按Hyp計(jì)算為12mg/kg。體內(nèi)藥-時(shí)數(shù)據(jù)經(jīng)PKSolver擬合處理,PAC-HPN、HPN、 Hyp的血漿t1/2、Tmax、Cmax、AUC分別為4.78h、1.0h、18.88μg/ml、 59.66μg/ml*h; 3.04h、1.0h、14.15μg/ml、50.28μg/ml*h; 2.07h、0.5h、28.22μg/ml、 50.16μg/ml*h。PAN-HPN在血漿、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟各組織中的靶向參數(shù)與HPN比較,其峰濃度比Ce分別為1.33、1.68、0.55、0.58、0.37、1.19,相對(duì)攝取率Re分別為1.19、1.69、0.63、0.53、0.29、1.02；與Hyp比較,其峰濃度比Ce分別為0.67、1.22、0.65、0.69、0.42、1.14,相對(duì)攝取率Re分別1.19、3.68、1.58、1.70、O.85、1.24。數(shù)據(jù)表明其中心臟具有顯著性差異(P0.01),說明其具有較好的心肌靶向作用。結(jié)論：本試驗(yàn)制備的聚乳酸金絲桃苷納米球具有良好的心肌靶向性,體內(nèi)釋放具有緩釋性,有望成為心肌細(xì)胞損傷的靶向長效治療藥物。
【關(guān)鍵詞】：聚乳酸納米球 心肌細(xì)胞 藥代動(dòng)力學(xué) 靶向性 金絲桃苷
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 個(gè)人簡歷3-7
• 主要中英文縮略語表7-8
• 摘要8-12
• ABSTRACT12-17
• 前言17-21
• 參考文獻(xiàn)18-21
• 第一章 SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞的原代分離培養(yǎng)21-27
• 1 儀器與材料21
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物21
• 1.2 設(shè)備和試劑21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 2.1 乳鼠心肌細(xì)胞的原代分離培養(yǎng)21-23
• 2.2 細(xì)胞存活率評(píng)定23
• 2.3 細(xì)胞純度評(píng)定23-24
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析24
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-26
• 3.1 形態(tài)學(xué)觀察24
• 3.2 細(xì)胞存活率24-25
• 3.3 心肌細(xì)胞α-actin免疫組織化學(xué)鑒定25-26
• 4 討論與小結(jié)26-27
• 第二章 金絲桃苷聚乳酸納米微球的制備27-42
• 1 引言27
• 2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料27-28
• 2.1 儀器27-28
• 2.2 試藥28
• 3 實(shí)驗(yàn)方法28-33
• 3.1 金絲桃苷聚乳酸納米微球的制備28
• 3.2 HPN質(zhì)量評(píng)價(jià)28-30
• 3.3 HPN釋藥特性考察30-31
• 3.4 制備工藝優(yōu)化31-32
• 3.5 差示掃描量熱分析32
• 3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析32-33
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-40
• 4.1 HPN質(zhì)量評(píng)價(jià)33-37
• 4.2 HPN釋藥特性考察37-38
• 4.3 制備工藝優(yōu)化38-40
• 4.4 差示掃描量熱分析40
• 5 討論與小結(jié)40-42
• 第三章 表面修飾金絲桃苷聚乳酸納米微球的制備42-56
• 1 引言42
• 2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料42-43
• 2.1 儀器42-43
• 2.2 試藥43
• 3 實(shí)驗(yàn)方法43-46
• 3.1 PAC修飾金絲桃苷聚乳酸納米微球(PAC-HPN)的制備43
• 3.2 PAC-HPN質(zhì)量評(píng)價(jià)43-44
• 3.3 PAC摻入率的測(cè)定44-46
• 3.4 PAC-HPN釋藥特性46
• 3.5 差示掃描量熱分析46
• 3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析46
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-54
• 4.1 PAC-HPN質(zhì)量評(píng)價(jià)46-48
• 4.2 PAC摻入率的測(cè)定48-52
• 4.3 PAC摻入對(duì)包封率載藥量的影響52
• 4.4 PAC摻入對(duì)HPN釋藥特性影響52-53
• 4.5 制備工藝優(yōu)化53-54
• 4.6 差示掃描量熱分析54
• 5 討論與小結(jié)54-56
• 5.1 PAC摻入對(duì)PAC-HPN釋藥行為的影響54-55
• 5.2 PAC摻入對(duì)包封率及載藥量的影響55
• 5.3 PAC的降解55
• 5.4 PAC-HPN的表征55-56
• 第四章 表面修飾納米球的體外靶向性及機(jī)理研究56-71
• 1 儀器與材料56
• 1.1 主要儀器設(shè)備56
• 1.2 試劑試藥56
• 2 實(shí)驗(yàn)方法56-61
• 2.1 心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)總量測(cè)定56-57
• 2.2 心肌細(xì)胞對(duì)PAC-HPN及HPN的攝取57-60
• 2.3 心肌細(xì)胞靶向機(jī)理研究60-61
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理61
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-69
• 3.1 心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)總量測(cè)定61-62
• 3.2 心肌細(xì)胞對(duì)PAC-HPN及HPN的攝取62-67
• 3.3 心肌細(xì)胞靶向機(jī)理研究67-69
• 4 討論與小結(jié)69-71
• 第五章 表面修飾納米微球的體內(nèi)靶向性研究71-89
• 1 儀器與材料71
• 1.1 主要儀器設(shè)備71
• 1.2 試劑試藥71
• 2 實(shí)驗(yàn)方法71-75
• 2.1 血漿Hyp含量測(cè)定71-73
• 2.2 各主要器官Hyp含量測(cè)定73-74
• 2.3 PAC-HPN的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)74
• 2.4 體內(nèi)靶向性試驗(yàn)74-75
• 2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析75
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果75-87
• 3.1 血漿Hyp含量測(cè)定75-78
• 3.2 各主要器官Hyp含量測(cè)定78-81
• 3.3 PAC-HPN的大鼠藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)81-83
• 3.4 體內(nèi)靶向性試驗(yàn)83-87
• 4 討論與小結(jié)87-89
• 全文總結(jié)89-91
• 參考文獻(xiàn)91-96
• 綜述96-109
• 參考文獻(xiàn)103-109
• 致謝109-110
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄110-111
• 附件111-121

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 官習(xí)鵬;全大萍;廖凱榮;麥堪成;;殼聚糖修飾PLGA陽離子型納米微球的制備與表征[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào);2006年10期

2 覃振明;孔曉龍;梁凱;莫鳳珍;黃紹德;汪永玲;李云龍;;貫葉金絲桃苷對(duì)心肌細(xì)胞作用的初步研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年16期

3 馬麗芳;鄭云;杜翔宇;王晰婷;郭麗;;PAMAM-Poloxamer的合成及作為藥物載體的體外試驗(yàn)[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(工程科學(xué)版);2011年01期

4 陳妍;王振遠(yuǎn);郭秀俠;于洪濤;鄧英杰;;乳鼠心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法的改進(jìn)[J];中國生物制品學(xué)雜志;2006年05期

5 陳妍,鄧英杰,郝艷麗,王秀敏,王振遠(yuǎn),盛軍;膜修飾脂質(zhì)體的制備及對(duì)心肌細(xì)胞的靶向作用[J];沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年02期

6 王偉;程偉;肖穎彬;;新生大鼠心房肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)和快速電場(chǎng)起搏模型的建立[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2009年21期

7 于蓮;崔丹;應(yīng)曉英;杜永忠;;表面修飾脂質(zhì)納米粒給藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2011年02期

8 張海燕;陳曉燕;萬娜;楊軍宣;汪建民;鄭琴;楊明;;殼聚糖修飾梔子苷聚乳酸-羥基乙酸納米粒的制備及經(jīng)鼻入腦的靶向性[J];中國新藥與臨床雜志;2010年06期

9 曾萍;彭明利;徐溢;;PLGA微粒/納米粒基因載體的研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2010年11期

10 楊建國;黃衛(wèi)蓮;徐承策;方惠珍;劉丹;;艾司洛爾類似物PAC的合成[J];醫(yī)學(xué)信息;2010年07期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳妍;心肌靶向脂質(zhì)體的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2005年

  本文關(guān)鍵詞：表面修飾金絲桃苷納米微球的心肌靶向性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：375677