本文關(guān)鍵詞：表面修飾金絲桃苷納米微球的心肌靶向性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：制備金絲桃苷聚乳酸納米微球(Polylactic acid Nanoparticle loaded Hyperoside, HPN)并進行表面靶向性修飾。對其形態(tài)、制備工藝、體外釋藥規(guī)律、大鼠體內(nèi)體外靶向性以及靶向機制進行研究,同時,研究其在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動力學過程,并對其靶向性的優(yōu)劣進行評價。方法：1.采用乳化-高壓勻質(zhì)法,分別制備金絲桃苷聚乳酸納米球以及表面靶向性修飾納米球(PAC-Polylactic acid Nanoparticle loaded Hyperoside, PAC-HPN)。掃描電鏡觀察形態(tài)特征：激光粒度儀測定其平均粒度、粒度分布及Zeta電位。2.采用均勻設(shè)計法,設(shè)立綜合評分方法,研究納米球的最佳制備工藝；差示掃描量熱法檢測納米球的制備效果。3.采用高效液相色譜法,建立納米球、細胞裂解液、大鼠血漿及組織勻漿中的金絲桃苷含量測定方法。對建立的方法進行驗證考察,確定其可靠性。4.透析法研究納米球的藥物體外釋藥規(guī)律。釋藥數(shù)據(jù)分別經(jīng)零級模型、單指數(shù)函數(shù)、雙指數(shù)函數(shù)、Weibull分布函數(shù)和Higuchi平方根函數(shù)模擬,根據(jù)AIC值和擬合度(R2)判斷評價曲線擬合優(yōu)度指標。5.采用高效液相色譜法,建立表面靶向性修飾配體的摻入率檢測方法,并進行方法學驗證試驗。6.以培養(yǎng)的大鼠乳鼠原代心肌細胞為靶細胞,藥物的細胞蛋白攝取率為指標,研究納米球體外靶向性;以已知的β1受體阻滯劑阿替洛爾為工具藥物,研究其體外靶向性機制；以缺氧培養(yǎng)的大鼠乳鼠原代心肌細胞為靶細胞,考察金絲桃苷聚乳酸納米球與表面靶向修飾納米球?qū)θ毖跣募〖毎Ｗo效果的差異。7.分別尾靜脈注射PAC-HPN、HPN、金絲桃苷(Hyperoside, Hyp),考察大鼠體內(nèi)藥-時過程及各主要器官藥物分布,以峰濃度比Ce、相對攝取率Re及靶向效率te評價納米球的心肌靶向性。結(jié)果：1.制備的HPN及PAC-HPN,掃描電鏡觀察形態(tài)特征為類球形,表面稍粗糙。激光散射粒度儀分析平均粒徑及Zeta電位,HPN平均粒徑為(159±43.7) nm,粒徑范圍為106.2～226.5 nm。平均Zeta電位為(-12.7±0.23)mV; PAC-HPN平均粒徑為(200.7±44)nm,粒徑范圍為146.6-268.3 nm。平均Zeta電位為(4.57±0.24)mV。2.均勻設(shè)計法確定的最優(yōu)條件為聚乳酸和藥物的投料比10%、油水體積比15%、勻質(zhì)次數(shù)6次、勻質(zhì)壓力15000psi。差示掃描量熱法結(jié)果表明,在HPN及PAC-HPN圖譜中PLA的熔點峰基本消失,同時Hyp的熔融峰完全消失,表明Hyp在HPN及PAC-HPN中以無定型存在或者被PLA包裹。3.采用高效液相色譜法,建立了納米球、細胞裂解液、大鼠血漿及組織勻漿中的金絲桃苷含量測定方法。方法學考察的精密度、回收率、穩(wěn)定性、重復性等各項結(jié)果均符合檢測要求,方法簡便易行,結(jié)果準確可靠。4.納米球體外釋藥試驗結(jié)果表明,HPN及PAC-HPN在釋放介質(zhì)中首日釋藥率分別為5.66%、4.26%；15天累積釋放率分別為56.89%、54.03%,不具有明顯的緩釋性。數(shù)據(jù)分別經(jīng)各釋放函數(shù)模擬,HPN及PAC-HPN體外釋放均符合Higuchi函數(shù)模型,其釋藥曲線分別為y=0.1678t1/2-0.039、y=0.1672t1/2-0.0548其T50分別為1 0.32天及11.01天。5.采用高效液相色譜法,建立了表面靶向性修飾配體的摻入率檢測方法,PAC的平均摻入為5.33±0.11%。摻入率并不與加入量成正比,其保持相對穩(wěn)定。方法學考察的精密度、回收率、穩(wěn)定性、重復性各項結(jié)果均符合檢測要求,方法簡便易行,結(jié)果準確可靠。6.體外靶向性研究結(jié)果表明,HPN及PAC-HPN的藥物總攝取率分別O.141ng/μg、0.032ng/μg。其中,細胞胞吞方式攝取率分別為0.088 ng/μ.g、0.005ng/μg。加入β,受體阻滯劑Atenolol后,PAC-HPN的心肌細胞攝取明顯被抑制(P0.001),而對HPN的攝取沒有明顯變化(P0.05)。說明Atenolol競爭性抑制了心肌細胞對PAC-HPN的攝取,PAC-HPN具有心肌細胞靶向作用。對缺氧心肌細胞藥物攝取率試驗結(jié)果表明,在常氧狀態(tài)下培養(yǎng)2、4、24 h,心肌細胞對PAC-HPN攝取率分別為HPN攝取率的3.72、4.73、4.67倍。而缺氧條件下,心肌細胞對PAC-HPN攝取率分別為HPN攝取率的4.32、6.27、42.5倍,增加倍數(shù)明顯高于常氧狀態(tài),說明由于缺氧使得心肌細胞表面的β1受體數(shù)量顯著增加,PAC-HP N對缺氧心肌細胞的靶向性更為突出,且隨著缺氧狀態(tài)的持續(xù),其靶向性越來越顯著。7.大鼠尾靜脈分別注射PAC-HPN、HPN、Hyp,給藥劑量按Hyp計算為12mg/kg。體內(nèi)藥-時數(shù)據(jù)經(jīng)PKSolver擬合處理,PAC-HPN、HPN、 Hyp的血漿t1/2、Tmax、Cmax、AUC分別為4.78h、1.0h、18.88μg/ml、 59.66μg/ml*h; 3.04h、1.0h、14.15μg/ml、50.28μg/ml*h; 2.07h、0.5h、28.22μg/ml、 50.16μg/ml*h。PAN-HPN在血漿、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟各組織中的靶向參數(shù)與HPN比較,其峰濃度比Ce分別為1.33、1.68、0.55、0.58、0.37、1.19,相對攝取率Re分別為1.19、1.69、0.63、0.53、0.29、1.02；與Hyp比較,其峰濃度比Ce分別為0.67、1.22、0.65、0.69、0.42、1.14,相對攝取率Re分別1.19、3.68、1.58、1.70、O.85、1.24。數(shù)據(jù)表明其中心臟具有顯著性差異(P0.01),說明其具有較好的心肌靶向作用。結(jié)論：本試驗制備的聚乳酸金絲桃苷納米球具有良好的心肌靶向性,體內(nèi)釋放具有緩釋性,有望成為心肌細胞損傷的靶向長效治療藥物。
【關(guān)鍵詞】：聚乳酸納米球 心肌細胞 藥代動力學 靶向性 金絲桃苷
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 個人簡歷3-7
• 主要中英文縮略語表7-8
• 摘要8-12
• ABSTRACT12-17
• 前言17-21
• 參考文獻18-21
• 第一章 SD大鼠乳鼠心肌細胞的原代分離培養(yǎng)21-27
• 1 儀器與材料21
• 1.1 試驗動物21
• 1.2 設(shè)備和試劑21
• 2 實驗方法21-24
• 2.1 乳鼠心肌細胞的原代分離培養(yǎng)21-23
• 2.2 細胞存活率評定23
• 2.3 細胞純度評定23-24
• 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析24
• 3 實驗結(jié)果24-26
• 3.1 形態(tài)學觀察24
• 3.2 細胞存活率24-25
• 3.3 心肌細胞α-actin免疫組織化學鑒定25-26
• 4 討論與小結(jié)26-27
• 第二章 金絲桃苷聚乳酸納米微球的制備27-42
• 1 引言27
• 2 實驗儀器與材料27-28
• 2.1 儀器27-28
• 2.2 試藥28
• 3 實驗方法28-33
• 3.1 金絲桃苷聚乳酸納米微球的制備28
• 3.2 HPN質(zhì)量評價28-30
• 3.3 HPN釋藥特性考察30-31
• 3.4 制備工藝優(yōu)化31-32
• 3.5 差示掃描量熱分析32
• 3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析32-33
• 4 實驗結(jié)果33-40
• 4.1 HPN質(zhì)量評價33-37
• 4.2 HPN釋藥特性考察37-38
• 4.3 制備工藝優(yōu)化38-40
• 4.4 差示掃描量熱分析40
• 5 討論與小結(jié)40-42
• 第三章 表面修飾金絲桃苷聚乳酸納米微球的制備42-56
• 1 引言42
• 2 實驗儀器與材料42-43
• 2.1 儀器42-43
• 2.2 試藥43
• 3 實驗方法43-46
• 3.1 PAC修飾金絲桃苷聚乳酸納米微球(PAC-HPN)的制備43
• 3.2 PAC-HPN質(zhì)量評價43-44
• 3.3 PAC摻入率的測定44-46
• 3.4 PAC-HPN釋藥特性46
• 3.5 差示掃描量熱分析46
• 3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析46
• 4 實驗結(jié)果46-54
• 4.1 PAC-HPN質(zhì)量評價46-48
• 4.2 PAC摻入率的測定48-52
• 4.3 PAC摻入對包封率載藥量的影響52
• 4.4 PAC摻入對HPN釋藥特性影響52-53
• 4.5 制備工藝優(yōu)化53-54
• 4.6 差示掃描量熱分析54
• 5 討論與小結(jié)54-56
• 5.1 PAC摻入對PAC-HPN釋藥行為的影響54-55
• 5.2 PAC摻入對包封率及載藥量的影響55
• 5.3 PAC的降解55
• 5.4 PAC-HPN的表征55-56
• 第四章 表面修飾納米球的體外靶向性及機理研究56-71
• 1 儀器與材料56
• 1.1 主要儀器設(shè)備56
• 1.2 試劑試藥56
• 2 實驗方法56-61
• 2.1 心肌細胞蛋白質(zhì)總量測定56-57
• 2.2 心肌細胞對PAC-HPN及HPN的攝取57-60
• 2.3 心肌細胞靶向機理研究60-61
• 2.4 統(tǒng)計學處理61
• 3 實驗結(jié)果61-69
• 3.1 心肌細胞蛋白質(zhì)總量測定61-62
• 3.2 心肌細胞對PAC-HPN及HPN的攝取62-67
• 3.3 心肌細胞靶向機理研究67-69
• 4 討論與小結(jié)69-71
• 第五章 表面修飾納米微球的體內(nèi)靶向性研究71-89
• 1 儀器與材料71
• 1.1 主要儀器設(shè)備71
• 1.2 試劑試藥71
• 2 實驗方法71-75
• 2.1 血漿Hyp含量測定71-73
• 2.2 各主要器官Hyp含量測定73-74
• 2.3 PAC-HPN的大鼠藥代動力學試驗74
• 2.4 體內(nèi)靶向性試驗74-75
• 2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析75
• 3 實驗結(jié)果75-87
• 3.1 血漿Hyp含量測定75-78
• 3.2 各主要器官Hyp含量測定78-81
• 3.3 PAC-HPN的大鼠藥代動力學試驗81-83
• 3.4 體內(nèi)靶向性試驗83-87
• 4 討論與小結(jié)87-89
• 全文總結(jié)89-91
• 參考文獻91-96
• 綜述96-109
• 參考文獻103-109
• 致謝109-110
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄110-111
• 附件111-121

【參考文獻】

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本文編號：375677