瘧疾是世界上最嚴(yán)重的以蟲為媒介的傳染性疾病之一,也是世界上最嚴(yán)重的傳染病之一,每年全球大約有2億多人遭到感染,超過40萬人死亡。目前,在抗瘧疾的研究上,雖然青蒿素在抑制瘧疾方面發(fā)揮著顯著的作用,但是瘧原蟲對青蒿素等藥物的耐藥性卻不容忽視。因此,有必要研發(fā)其它安全高效的抗瘧藥物/疫苗用于控制瘧疾。MSP2是惡性瘧原蟲裂殖子表面第二豐富的蛋白,在瘧原蟲表面表現(xiàn)出聚集狀態(tài),并以此破壞生物膜參與入侵宿主細(xì)胞。MSP2和來源于其功能性N端區(qū)域的MSP2衍生多肽已經(jīng)顯示出其作為抗瘧疾藥物/疫苗的潛能,但是在之前的MSP2相關(guān)疫苗研發(fā)中,忽略了其聚集和對膜的破壞可能會產(chǎn)生的安全性和有效性的問題。已有研究表明MSP2蛋白N端的MSP21-25序列是形成淀粉樣纖維的關(guān)鍵區(qū)域,其中MSP28-15序列是形成淀粉樣纖維的核心部位,而MSP215-22序列則是MSP2抗原表位所在的區(qū)域。在本研究中,我們通過定點(diǎn)插入、定點(diǎn)突變以及片段插入引入β轉(zhuǎn)折序列的方法,設(shè)計(jì)并化學(xué)合成WT-MSP28-22的變體,監(jiān)測其聚集、與膜的相互作用以及抗原性。其中M5-MSP2小肽（注:之后全文均用M5小肽代替）是插入了一段具有強(qiáng)... 

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一章 緒言
    1.1 瘧疾防治
    1.2 MSP2及基于MSP2的抗瘧藥物/疫苗
        1.2.1 MSP2簡介
        1.2.2 基于MSP2的抗瘧藥物/疫苗
    1.3 β-結(jié)構(gòu)對淀粉樣纖維蛋白/肽聚集的影響
    1.4 研究目的及意義
    1.5 研究內(nèi)容
        1.5.1 β-結(jié)構(gòu)對MSP2-N衍生小肽聚集的影響
        1.5.2 β-結(jié)構(gòu)對MSP2-N衍生小肽與膜相互作用的影響
        1.5.3 β-結(jié)構(gòu)對MSP2-N衍生小肽抗原性的影響
    1.6 技術(shù)路線
第二章 基于MSP2的抗瘧藥物/疫苗的設(shè)計(jì)
    2.1 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.1 MSP2多肽的設(shè)計(jì)
        2.1.2 MSP2多肽的合成及樣品制備
        2.1.3 MSP2多肽的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.1.4 MSP2多肽的聚集傾向性分析
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 WT-MSP2藥物/疫苗候選物區(qū)域的選擇
        2.2.2 WT-MSP2衍生小肽的設(shè)計(jì)
        2.2.3 WT-MSP2_(8-22)及其突變體小肽二級結(jié)構(gòu)的預(yù)測
        2.2.4 WT-MSP2_(8-22)及其突變體小肽的聚集傾向性分析
    2.3 結(jié)果分析
第三章 β-結(jié)構(gòu)對MSP2衍生小肽聚集的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 制備多肽的儲備溶液
        3.2.2 ThT熒光檢測聚集動力學(xué)
        3.2.3 OD_(405nm)濁度檢測聚集動力學(xué)
        3.2.4 高分辨透射電子顯微鏡(TEM)
        3.2.5 圓二色譜法(CD)
        3.2.6 分子篩(SEC)
        3.2.7 核磁共振法(NMR)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽的聚集動力學(xué)
        3.3.2 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽聚集體的形態(tài)
        3.3.3 非聚集性MSP2衍生小肽的結(jié)構(gòu)和狀態(tài)
        3.3.4 M5-MSP2小肽與WT-MSP2_(8-22)小肽相互作用的聚集動力學(xué)
        3.3.5 M5-MSP2小肽與WT-MSP2_(8-22)小肽相互作用的聚集體形態(tài)學(xué)
    3.4 結(jié)果分析
第四章 β-結(jié)構(gòu)對MSP2衍生小肽與膜相互作用的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 模擬膜脂質(zhì)體(SUVs)以及包裹鈣黃綠素脂質(zhì)體的制備
        4.2.2 鈣黃綠素?zé)晒庑孤秾?shí)驗(yàn)
        4.2.3 模擬膜與小肽濃度的配置
        4.2.4 ThT熒光檢測聚集動力學(xué)
        4.2.5 高分辨透射電子顯微鏡(TEM)
        4.2.6 圓二色譜法(CD)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽在膜環(huán)境中的二級結(jié)構(gòu)變化
        4.3.2 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽在膜環(huán)境中的聚集動力學(xué)
        4.3.3 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽在膜環(huán)境中的聚集體的形態(tài)學(xué)
        4.3.4 膜在WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽存在時的完整性
    4.4 結(jié)果分析
第五章 β-結(jié)構(gòu)對MSP2衍生小肽抗原性的影響
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 抗原親和樹脂純化抗體
        5.2.2 間接性ELISA實(shí)驗(yàn)
        5.2.3 多克隆抗體的濃度與小肽濃度比例配置
    5.3 研究結(jié)果
        5.3.1 M5多克隆抗體的效價
        5.3.2 WT-MSP2_(8-22)和M5-MSP2在M5多抗存在時的聚集動力學(xué)
        5.3.3 WT-MSP2_(8-22)在M5多抗存在時在膜環(huán)境中的聚集動力學(xué)
        5.3.4 膜在WT-MSP2_(8-22)和M5多克隆抗體存在時的完整性
    5.4 結(jié)果分析
第六章 研究討論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]瘧疾疫苗研究的現(xiàn)狀和展望[J]. 潘衛(wèi)慶.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2004(01)
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本文編號：3731280