多氯聯(lián)苯（PCBs）是持久性有機(jī)環(huán)境污染物。根據(jù)先前的流行病學(xué)報告,人們普遍認(rèn)為PCBs暴露與動脈粥樣硬化高度相關(guān),但是,潛在機(jī)制尚不清楚并缺乏相應(yīng)的機(jī)制研究。盡管多氯聯(lián)苯很容易被代謝,但是關(guān)于其代謝物對動脈粥樣硬化的作用的信息很少。在這項研究中,我們研究了一種醌型PCB代謝產(chǎn)物,即2,3,5-三氯-6-苯基-[1,4]-苯醌（PCB29-pQ）,對促進(jìn)動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的影響。動脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）是一種與脂質(zhì)代謝有關(guān)的全身性疾病,由它引起的心腦血管疾病嚴(yán)重危害人類健康。在一些歐美國家,它已成為人類健康的頭號殺手。其主要的病理特點是血液中的脂質(zhì)進(jìn)入血管動脈管壁,并沉積于血管內(nèi)膜形成粥樣化斑塊,導(dǎo)致動脈增厚、變硬,最后導(dǎo)致斑塊破裂。所以,研究AS的發(fā)生和發(fā)展的具體機(jī)制顯得非常重要。本文研究了多氯聯(lián)苯的代謝產(chǎn)物,多氯聯(lián)苯醌（PCB29-pQ）通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞泡沫化和上調(diào)CD36誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)加速動脈粥樣硬化形成的具體作用機(jī)制。第一部分:該部分旨在研究PCB29-pQ促進(jìn)巨噬細(xì)胞泡沫化的形成。我們探討了 2,3,5-三氯-6-苯基-[1,4]-苯醌（PC... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫符號對照表
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 多氯聯(lián)苯
        1.2.1 多氯聯(lián)苯的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)
        1.2.2 多氯聯(lián)苯的暴露與環(huán)境污染現(xiàn)狀
        1.2.3 多氯聯(lián)苯的暴露與毒性
        1.2.4 多氯聯(lián)苯的代謝
    1.3 動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制
        1.3.1 巨噬細(xì)胞泡沫化與動脈粥樣硬化
        1.3.2 炎癥與動脈粥樣硬化
        1.3.3 程序性壞死與動脈粥樣硬化
        1.3.4 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與動脈粥樣硬化
    1.4 多氯聯(lián)苯與動脈粥樣硬化
    1.5 立題依據(jù)及意義
第二章 PCB29-pQ促進(jìn)巨噬細(xì)胞泡沫化
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗細(xì)胞株
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 實驗試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細(xì)胞的培養(yǎng)與處理
        2.3.2 Western Blot實驗
        2.3.3 細(xì)胞總蛋白提取與蛋白定量
        2.3.4 實時熒光定量PCR檢測
        2.3.5 油紅O染色
        2.3.6 甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)和膽固醇酯的比例(CE/TC)檢測
        2.3.7 活性氧(ROS)檢測
        2.3.8 還原型谷胱甘肽(GSH)檢測
        2.3.9 丙二醛(MDA)檢測
        2.3.10 線粒體膜電位(JC-1)檢測JC-1
        2.3.11 乳酸脫氫酶活性(LDH)檢測
        2.3.12 碘化吡啶(PI)染色實驗
        2.3.13 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.0 PCB29-pQ通過誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中脂質(zhì)積累形成泡沫細(xì)胞
        2.4.1 PCB29-pQ誘導(dǎo)了RAW264.7細(xì)胞中TC,TG,FC以及CE水平的升高
        2.4.2 PCB29-pQ通過調(diào)節(jié)膽固醇攝取和流出通路實現(xiàn)RAW267.4細(xì)胞中脂質(zhì)積累
        2.4.3 PCB29-pQ通過MAPK-NF-κB信號通路誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥因子的釋放
        2.4.4 PCB29-pQ誘導(dǎo)RAW267.4細(xì)胞發(fā)生程序性壞死
        2.4.5 PCB29-pQ通過RIPK1/3-MLKL通路誘導(dǎo)RAW267.4細(xì)胞發(fā)生程序性壞死
        2.4.6 PCB29-pQ通過ROS依賴促進(jìn)RAW264.7RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞泡沫化
    2.5 討論
第三章 PCB29-pQ通過CD36誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗細(xì)胞株
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 實驗試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        3.3.2 細(xì)胞siRNA轉(zhuǎn)染A
        3.3.3 Western Blot實驗
        3.3.4 細(xì)胞總蛋白提取與定量
        3.3.5 實時熒光定量PCR檢測
        3.3.6 甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)和膽固醇酯的比例(CE/TC)檢測
        3.3.7 丙二醛(MDA)檢測
        3.3.8 線粒體膜電位(JC-1)檢測
        3.3.9 乳酸脫氫酶活性(LDH)檢測
        3.3.10 碘化吡啶(PI)染色實驗
        3.3.11 統(tǒng)計分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 PCB29-pQ通過CD36促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞脂質(zhì)的積累
        3.4.2 PCB29-pQ通過CD36誘導(dǎo)了RAW264.7細(xì)胞中TC,TG,FC以及CE水平的升高
        3.4.3 PCB29-pQ促進(jìn)Ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)
        3.4.4 PCB29-pQ通過CD36促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)
        3.4.5 PCB29-pQ通過CD36促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞發(fā)生凋亡和壞死
    3.5 討論
第四章 PCB29-pQ促進(jìn)ApoE~(-/-)小鼠動脈粥樣硬化斑塊的形成
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗動物
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 實驗試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 小鼠動脈粥樣硬化模型建立與PCB29-pQ的暴露
        4.3.2 小鼠取材
        4.3.3 Western Blot實驗
        4.3.4 細(xì)胞總蛋白提取與定量
        4.3.5 實時熒光定量PCR檢測
        4.3.6 HE染色
        4.3.7 免疫熒光組化
        4.3.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 PCB29-pQ誘導(dǎo)ApoE~(-/-)小鼠動脈粥樣硬化斑塊的形成
        4.4.2 PCB29-pQ誘導(dǎo)ApoE~(-/-)小鼠主動脈根部CD36的表達(dá)
        4.4.3 PCB29-pQ誘導(dǎo)ApoE~(-/-)小鼠脂質(zhì)的積累
        4.4.4 PCB29-pQ誘導(dǎo)ApoE~(-/-)小鼠炎癥因子的釋放
    4.5 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Enhancement of human ACAT1 gene expression to promote the macrophage-derived foam cell formation by dexamethasone[J]. Li YANG, Jin Bo YANG, Jia CHEN, Guang Yao YU, Pei ZHOU, Lei LEI, Zhen Zhen WANG, Catherine CY CHANG, XinYing YANG, Ta Yuan CHANG, Bo Liang LI State Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Graduate School of the Chinese Academy of Sciences, 320 Yueyang Road Shanghai 200031, China. Department of Biochemistry, Dartmouth Medical School, Hanover, NH 03756; USA..  Cell Research. 2004(04)



本文編號：3720905