本文關(guān)鍵詞：氯喹差異性調(diào)節(jié)金葡菌激活的RAW 264.7巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：氯喹(Chloroquine,CQ)是治療瘧疾癥狀發(fā)作時最有效的藥物,其已有60多年的臨床應(yīng)用歷史。CQ還能用于治療一些自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等,作用機(jī)制可能與其抑制單核/巨噬細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子如TNF-α、IL-6等有關(guān)。本課題通過分析CQ對滅活金黃色葡萄球菌(inactivated Staphylococcus aureus cells,SAC)刺激活化的RAW 264.7巨噬細(xì)胞表達(dá)炎癥因子的影響,探討其對革蘭氏陽性菌引起的炎癥反應(yīng)的潛在作用及機(jī)制。方法:1.采用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法(ICS)分析RAW 264.7巨噬細(xì)胞胞內(nèi)TNF-α、IL-6、CCL2的表達(dá),利用流式微球陣列法(CBA)檢測RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-6、CCL2的表達(dá)。2.利用實(shí)時定量RT-PCR法分析RAW 264.7巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-6、CCL2的m RNA表達(dá)水平;免疫印跡法檢測TNF-α前體的表達(dá),以及CQ對有絲分裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)、NF-kB等通路相關(guān)蛋白磷酸化水平的影響。結(jié)果:1.CQ明顯抑制SAC激活的RAW 264.7巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-6、CCL2的表達(dá),而細(xì)胞內(nèi)TNF-α和CCL2的表達(dá)水平提高。2.定量RT-PCR法顯示CQ減少SAC激活的RAW 264.7巨噬細(xì)胞IL-6m RNA的表達(dá),增加CCL2的m RNA表達(dá)水平,然而對TNF-α的m RNA水平?jīng)]有影響;免疫印跡分析表明,CQ對SAC激活的MAPKs、NF-kB炎癥相關(guān)信號通路的蛋白磷酸化水平影響不大,然而,CQ使SAC誘導(dǎo)的26 k Da和28 k Da TNF-α前體蛋白的表達(dá)水平顯著升高。結(jié)論:1.CQ通過抑制TNF-α從膜結(jié)合的26 k Da和28 k Da前體蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄猿墒斓鞍椎募庸み^程而抑制該炎癥細(xì)胞因子的分泌。2.CQ能差異性調(diào)節(jié)金黃色葡萄球菌激活的RAW 264.7巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá),發(fā)揮其抗炎效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：氯喹 IL-6 巨噬細(xì)胞 金黃色葡萄球菌 腫瘤壞死因子
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 一、前言9-15
• 1.1 氯喹的研發(fā)10
• 1.2 氯喹的物理化學(xué)性質(zhì)10-11
• 1.3 氯喹的臨床應(yīng)用11
• 1.4 有關(guān)氯喹抗炎的作用機(jī)制11-12
• 1.5 炎癥相關(guān)信號通路12-13
• 1.6 本課題的研究目的和意義13-15
• 二、實(shí)驗(yàn)材料和方法15-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-20
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.1.3 主要儀器16
• 2.1.4 主要溶液配方16-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-23
• 2.2.1 RAW 264.7 細(xì)胞培養(yǎng)20
• 2.2.2 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色20
• 2.2.3 CBA檢測培養(yǎng)液上清中細(xì)胞因子20
• 2.2.4 實(shí)時定量PCR20-21
• 2.2.5 免疫印跡分析21
• 2.2.6 免疫熒光染色21-22
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22-23
• 三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-33
• 3.1 氯喹(CQ)上調(diào)SAC激活的RAW 264.7 巨噬細(xì)胞胞內(nèi)促炎細(xì)胞因子的表達(dá),然而卻抑制促炎細(xì)胞因子在培養(yǎng)上清中的分泌23-25
• 3.2 CQ差異性調(diào)節(jié)SAC激活的RAW 264.7 巨噬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子m RNA的水平25-27
• 3.3 CQ對SAC激活的RAW 264.7 細(xì)胞MAPK, NF-κB和p70S6K信號通路無明顯影響27-31
• 3.4 CQ對SAC激活的RAW 264.7 細(xì)胞TNF-α 加工成熟的影響31-33
• 四、討論33-36
• 參考文獻(xiàn)36-42
• 五、全文總結(jié)42-43
• 附錄I 英文縮略詞43-44
• 附錄II 在校期間發(fā)表文章及成果44-45
• 致謝45-46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 孫凌云;抗瘧藥在紅斑狼瘡治療中的作用[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2004年04期

2 章銳鋒;金黃色葡萄球菌感染的預(yù)防和治療[J];國外醫(yī)學(xué)(流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊);2002年04期

3 那學(xué)本;支氣管哮喘的治療新進(jìn)展[J];臨床薈萃;1991年04期

4 雷源文;磷酸氯喹治療腓腸肌痙攣54例報(bào)告[J];臨床薈萃;1992年06期

5 朱俊山;施資堅(jiān);張延亭;喬靜;何健;歐陽東云;何賢輝;;葫蘆素B對小鼠淋巴細(xì)胞活化、增殖和凋亡的影響[J];免疫學(xué)雜志;2011年12期

6 王遙;劉坤鵬;宋方茗;潘浩;徐麗慧;歐陽東云;何賢輝;;雪膽素乙對小鼠淋巴細(xì)胞體外活化及增殖的影響[J];免疫學(xué)雜志;2013年03期

7 孫力;氯喹治療掌跖膿皰病療效觀察[J];河北醫(yī)藥;1994年05期

8 趙俊強(qiáng)，，姬蘇林;賽庚啶、氯喹、強(qiáng)的松治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的臨床觀察[J];山西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1994年03期

9 石守道,胡艷玲;老藥新用治療糖尿病[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;1991年04期

  本文關(guān)鍵詞：氯喹差異性調(diào)節(jié)金葡菌激活的RAW 264.7巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：370448