MicroRNAs（miRNAs）是一類非編碼的單鏈RNA,它們的長度在20至25個堿基之間。miRNA通過與mRNA的3’-非編碼區(qū)結(jié)合,形成局部堿基配對以抑制mRNA的翻譯或使其降解。一個mi RNA可以識別多個mRNA并與之結(jié)合,一個mRNA也可以被多個不同的mi RNA所識別并與之相互作用。研究顯示miRNA的異常表達與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系,在此過程中,mi RNA可發(fā)揮抑癌基因或癌基因的作用。宮頸癌在女性惡性腫瘤中是發(fā)病率和死亡率僅次于乳腺癌的惡性腫瘤。Hsa-mi R-124（miR-124）的表達在包括宮頸癌在內(nèi)的許多種腫瘤中都顯著降低。為探索miR-124在宮頸癌細胞中的調(diào)節(jié)作用,本研究構(gòu)建了miR-124的表達載體并篩選了穩(wěn)定表達miR-124的宮頸癌細胞株。研究結(jié)果顯示miRNA-124的高表達顯著抑制了宮頸癌細胞的生長和遷移及侵襲能力。進一步的研究發(fā)現(xiàn),CUB domain containing protein 1（CDCP1）的表達在miR-124高表達的細胞中顯著降低。螢熒光素酶實驗結(jié)果顯示Cdcp1基因是miR-124的直接下游靶點。miR-124... 

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞
第1章 緒論
    1.1 MicroRNA簡介
        1.1.1 MicroRNA的作用機制
        1.1.2 MicroRNA在癌癥治療中的應(yīng)用
    1.2 宮頸癌簡介
        1.2.1 宮頸癌的分布及病理類型
        1.2.2 宮頸癌的病因及診療
        1.2.3 宮頸癌與MicroRNA
    1.3 肺癌簡介
        1.3.1 肺癌的分布及病理類型
        1.3.2 肺癌的病因及診療
        1.3.3 肺癌與microRNA-34家族
    1.4 抗癌藥物載體研究現(xiàn)狀
        1.4.1 抗癌藥物載體的種類
        1.4.2 納米材料載體概述
        1.4.3 主動靶向載體概述
    1.5 本文的研究內(nèi)容及意義
第2章 miR-124在宮頸癌中的功能研究
    2.1 實驗材料及溶液配制
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 溶液配制
    2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 Si Ha細胞的培養(yǎng)
        2.3.2 pcDNA6.2-mi R-124載體構(gòu)建
        2.3.3 pcDNA6.2-mi R-124重組質(zhì)粒的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
        2.3.4 mi R-124轉(zhuǎn)染效果檢測
        2.3.5 CCK8實驗檢測細胞增殖
        2.3.6 Transwell實驗檢測細胞的轉(zhuǎn)移與侵襲能力
        2.3.7 傷.愈合實驗
        2.3.8 軟瓊脂集落形成實驗
        2.3.9 裸鼠體內(nèi)實驗
        2.3.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 pcDNA6.2-mi R-124重組質(zhì)粒的鑒定
        2.4.2 mi R-124在人宮頸癌細胞中的表達明顯調(diào)低
        2.4.3 Si Ha/miR-124細胞中miR-124的表達檢測
        2.4.4 mi R-124對宮頸癌細胞增殖能力的影響
        2.4.5 mi R-124對宮頸癌細胞侵襲和遷移能力的影響
        2.4.6 mi R-124對Si Ha細胞克隆形成的影響
        2.4.7 mi R-124對裸鼠體內(nèi)腫瘤形成抑制作用
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 miR-124靶基因的鑒定
    3.1 實驗材料及溶液配制
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 溶液配制
    3.2 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 通過數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-124靶基因
        3.3.2 雙熒光素酶報告基因載體的構(gòu)建
        3.3.3 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>        3.3.4 Western Blot檢測CDCP1蛋白表達水平
        3.3.5 mi R-124對CDCP1蛋白水平的影響
        3.3.6 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 mi R-124靶基因的預(yù)測
        3.4.2 Cdcp1基因在SiHa/miR-124細胞中的表達
        3.4.3 mi R-124的靶點檢測
        3.4.4 恢復(fù)CDCP1表達對腫瘤抑制的影響
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第4章 AMNPs的制備與表征
    4.1 實驗材料及溶液配制
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 溶液配制
    4.2 實驗儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 SPDP交聯(lián)劑修飾mi R-34a
        4.3.2 MNPs的制備
        4.3.3 AMNPs的制備
        4.3.4 NPs，MNPs和AMNPs粒徑、表面電位的檢測
        4.3.5 MNPs與AMNPs的形態(tài)觀察
        4.3.6 凝膠電泳檢測Aptamer-miR-34a嵌合體的連接
        4.3.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 MNPs的合成結(jié)果檢驗
        4.4.2 AMNPs的合成結(jié)果檢驗
        4.4.3 NPs，MNPs和AMNPs表征
        4.4.4 MNPs與AMNPs的形態(tài)觀察
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第5章 AMPNs在肺癌細胞中的轉(zhuǎn)運與作用研究
    5.1 實驗材料及溶液配制
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 溶液配制
    5.2 實驗儀器
    5.3 實驗方法
        5.3.1 A549細胞的傳代培養(yǎng)
        5.3.2 共聚焦顯微鏡檢驗AMPNs攝取能力
        5.3.3 Real-time PCR檢測miR-34a的表達
        5.3.4 Western Blot檢測SIRT1蛋白的表達
        5.3.5 Transwell實驗檢測A549細胞轉(zhuǎn)移能力
        5.3.6 Annexin V-PI檢測細胞凋亡
        5.3.7 統(tǒng)計學(xué)分析
    5.4 實驗結(jié)果
        5.4.1 共聚焦顯微鏡觀察AMPNs攝取能力
        5.4.2 mi R-34a的表達檢測
        5.4.3 SIRT1蛋白的表達檢測
        5.4.4 Transwell實驗檢測A549細胞轉(zhuǎn)移能力結(jié)果
        5.4.5 Annexin V-PI檢測細胞凋亡情況
    5.5 討論
    5.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄
攻讀博士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國肺癌死亡趨勢分析及發(fā)病、死亡的估計與預(yù)測[J]. 楊玲,李連弟,陳育德,Donald Maxwell Parkin.  中國肺癌雜志. 2005(04)



本文編號：3651768