目的獲得1種能夠增加人成骨細(xì)胞堿性磷酸酶生成量的金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽螯合鈣（collagen peptide from tuna bone chelated calcium, TCP-Ca）的工藝方法。方法利用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化蛋白酶酶解法制備金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽的工藝,利用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽和檸檬酸鈣進(jìn)行螯合反應(yīng)的工藝,然后利用傅里葉變換紅外光譜對(duì)TCP-Ca進(jìn)行定性分析,同時(shí)檢測(cè)TCP-Ca對(duì)MG-63細(xì)胞堿性磷酸酶生成量的影響。結(jié)果金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽制備的最佳工藝為pH 9.0、酶解時(shí)間180 min、加酶量5 000 U/g、酶解溫度45℃;TCP-Ca制備的最佳工藝為溫度35℃、pH 7.5、肽鈣質(zhì)量比6∶1、時(shí)間40 min;金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽的氨基和羥基均參與了鈣螯合反應(yīng);TCP-Ca比金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽更有利于增加MG-63細(xì)胞分泌堿性磷酸酶。結(jié)論本文優(yōu)化了TCP-Ca的制備工藝,發(fā)現(xiàn)其具有增加成骨細(xì)胞分泌堿性磷酸酶的生物活性。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 金槍魚(yú)骨和實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    1.4 方法
        1.4.1 酶解反應(yīng)制備TCP
        1.4.2 MG-63細(xì)胞ALP檢測(cè)
        1.4.3 酶解反應(yīng)條件優(yōu)化
            (1)酶解溫度對(duì)ALP增長(zhǎng)率的影響
            (2)酶解時(shí)間對(duì)ALP增長(zhǎng)率的影響
            (3)酶解pH對(duì)ALP增長(zhǎng)率的影響
            (4)加酶量對(duì)ALP增長(zhǎng)率的影響
            (5)酶解反應(yīng)獲取TCP正交實(shí)驗(yàn)方法
        1.4.4 金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽氨基酸分析
        1.4.5 金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽螯合鈣制備及工藝優(yōu)化
            (1)肽鈣質(zhì)量比對(duì)螯合率的影響
            (2)pH對(duì)螯合率的影響
            (3)溫度對(duì)螯合率的影響
            (4)時(shí)間對(duì)螯合率的影響
            (5)螯合反應(yīng)正交實(shí)驗(yàn)方法
        1.4.6 傅里葉變換紅外光譜分析
        1.4.7 金槍魚(yú)骨膠原蛋白肽螯合鈣對(duì)MG-63細(xì)胞的影響
    1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 酶制劑的選擇
    2.2 金槍魚(yú)骨酶解反應(yīng)單因素實(shí)驗(yàn)分析
    2.3 金槍魚(yú)骨酶解反應(yīng)正交實(shí)驗(yàn)分析
    2.4 TCP氨基酸分析
    2.5 TCP螯合鈣制備單因素實(shí)驗(yàn)分析
    2.6 TCP螯合鈣制備正交實(shí)驗(yàn)分析
    2.7 紅外光譜表征TCP螯合鈣
    2.8 TCP螯合鈣對(duì)MG-63細(xì)胞ALP增長(zhǎng)率的影響
3 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]羅非魚(yú)皮膠原蛋白小肽螯合鈣的制備、鑒定及抗氧化研究[J]. 夏光華,申鉉日,酒志強(qiáng).  食品科技. 2013(06)
[2]金槍魚(yú)骨營(yíng)養(yǎng)成分分析[J]. 賈建萍,周彥鋼,林賽君,魯健章,鄭高利.  食品工業(yè)科技. 2013(10)

碩士論文
[1]金槍魚(yú)罐頭的研制及其副產(chǎn)物利用技術(shù)研究[D]. 胡靜.海南大學(xué) 2015
[2]鱘魚(yú)皮膠原蛋白肽的制備、純化工藝及理化性質(zhì)研究[D]. 劉培勇.武漢工業(yè)學(xué)院 2012
[3]牛骨膠原多肽螯合鈣的制備及其結(jié)構(gòu)表征[D]. 付文雯.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3647054