發(fā)布時間：2022-01-27 19:09

　　目的:探索維生素B12預(yù)處理對H₂O₂誘導(dǎo)下的神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及自噬和凋亡蛋白表達(dá)的影響。方法:將大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細(xì)胞（PC12）分為對照組（Control組）RPMI 1640培養(yǎng)、損傷組（H₂O₂組）RPMI 1640培養(yǎng)并加入200μmol/L的H₂O₂刺激,維生素B12保護(hù)組（H₂O₂+Vit B12組）RPMI 1640培養(yǎng)加入200μmol/L維生素B12預(yù)處理和200μmol/L的H₂O₂刺激。24 h后檢測細(xì)胞的活性,Western blot和免疫熒光檢測凋亡及自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:與Control組比較,H₂O₂組的細(xì)胞存活率、細(xì)胞DNA復(fù)制水平降低,Bcl-2和P62蛋白的表達(dá)量下降,Bax、ATG-5和LC3蛋白的表達(dá)量明顯上升,胞漿內(nèi)LC3的激活數(shù)量上升（均P<0.05）。與H... 

【文章來源】：溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,50(06)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

3組PC12細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞增殖能力和DNA復(fù)制水平比較

與Control組比，H202組的ATG-5和LC3的蛋白表達(dá)量上升，P62的蛋白表達(dá)量下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）；與H202組比，H202+VitB12組ATG-5和LC3的蛋白表達(dá)量降低，P62蛋白表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。與Control組比，H202組的LC3熒光強(qiáng)度顯著上升；與H202組比，H202+VitB12組的LC3熒光強(qiáng)度下降。見圖3。3 討論

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞在一定的生理或病理條件下，受多種基因精確調(diào)控的主動的、程序化的死亡過程，是機(jī)體重要的自穩(wěn)調(diào)節(jié)機(jī)制[12]。在眾多的凋亡調(diào)控基因中，Bcl-2蛋白家族和胱天蛋白酶（Caspase）家族目前最受關(guān)注[13]，其中Bcl-2基因和Bax基因是目前已知的在凋亡調(diào)控過程中功能相互對立的一對最重要的調(diào)控基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn)受氧化應(yīng)激的細(xì)胞表現(xiàn)出Bax蛋白表達(dá)量上升，Bcl-2下降，而維生素B12能減弱Bax蛋白表達(dá)量的上升和Bcl-2的下降，這提示維生素B12能夠有效減少損傷后凋亡信號的激活從而保護(hù)PC12細(xì)胞。細(xì)胞自噬也參與了多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，自噬與凋亡之間存在著復(fù)雜的交互調(diào)控，自噬本身也會誘發(fā)細(xì)胞死亡[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，H202處理后神經(jīng)細(xì)胞中的自噬相關(guān)蛋白均被顯著激活。Western blot結(jié)果表示，損傷組的LC3、ATG-5的蛋白表達(dá)明顯上升，而維生素B12預(yù)保護(hù)能降低自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)。免疫熒光結(jié)果同樣證實了H202誘導(dǎo)后LC3呈點狀分布在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，維生素B12預(yù)處理后能夠減少胞漿中的LC3激活。這些結(jié)果提示維生素B12能夠抑制氧化應(yīng)激后的自噬水平升高，是保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的另一重要原因。Ed U是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶滲入正在復(fù)制的DNA分子中，它能有效反映DNA復(fù)制活性[11]。通過EdU染色結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，H202處理后發(fā)現(xiàn)，處于復(fù)制期的DNA數(shù)目較少，而維生素B12預(yù)保護(hù)后能有效提高神經(jīng)細(xì)胞DNA復(fù)制水平。這進(jìn)一步提示維生素B12能夠改善氧化應(yīng)激造成的細(xì)胞損傷。本研究顯示維生素B12能有效抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷，抑制H202對細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)一步機(jī)制研究提示維生素B12通過調(diào)控自噬來抑制凋亡信號激活從而保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。本研究在信號通路方面的研究還不夠完善，比如自噬激活劑或抑制劑對神經(jīng)細(xì)胞的影響的作用，有待于深入探討。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3612931