安莎霉素是一類(lèi)結(jié)構(gòu)獨(dú)特、生物活性多樣的大環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素,主要存在于放線(xiàn)菌和少數(shù)的植物�；蚪M測(cè)序和生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,放線(xiàn)菌蘊(yùn)藏著巨大的次級(jí)代謝潛能。對(duì)放線(xiàn)菌的基因進(jìn)行遺傳操作,獲得基因簇過(guò)表達(dá)突變株,即可能獲得目標(biāo)化合物,這將對(duì)新藥的發(fā)現(xiàn)有重要貢獻(xiàn)。本論文研究以AHBA合酶基因陽(yáng)性菌株疣孢菌（Verrucosispora sp.NS0172）和鏈霉菌（Sreptomyces sp.S035）的過(guò)表達(dá)突變株為實(shí)驗(yàn)材料,進(jìn)行了次級(jí)代謝產(chǎn)物的分離純化,共獲得了30個(gè)化合物,通過(guò)MS、NMR等方法確定了它們的結(jié)構(gòu),其中20個(gè)為新化合物,包括1個(gè)開(kāi)環(huán)三酮安莎霉素和12個(gè)開(kāi)環(huán)四酮安莎霉素類(lèi)化合物。Verrucosispora sp.NS0172菌株分離自廈門(mén)潮間帶,PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明它是一株AHBA合酶基因陽(yáng)性菌,有產(chǎn)生安莎霉素類(lèi)化合物的潛力。本課題組的李穩(wěn)碩士過(guò)表達(dá)vas10和vas12基因,分別構(gòu)建了NS0172-OELAL和NS0172-SARP突變株。作者從NS0172-OELAL突變株的YMG瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)物中分離得到了 1個(gè)已知化合物;從NS0172-SARP突變株的YMG瓊脂培... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖３．３化合物Ａｌ?（１）的ＣＯＳＹ和ＨＭＢＣ相關(guān)信號(hào)??

體平板小批量發(fā)酵對(duì)照菌株ＮＳ０１７２和突變株ＮＳ０１７２－ＳＡＲＰ，常規(guī)處理后將其??粗體物進(jìn)行ＨＰＬＣ檢測(cè)（洗脫條件見(jiàn)表３．２），發(fā)現(xiàn)保留時(shí)間１２－１５?ｍｉｎ含有差異峰??（圖３．４）。因此對(duì)突變株０１７２－ＳＡＲＰ的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了研究。??１３??

?Ｐ９?（１０）?Ｐ１０（１１）??圖３．６分離自突變菌株ＮＳ０１７２－ＳＡＲＰ的化合物的結(jié)構(gòu)??（見(jiàn)電子版文件夾ＮＳ０１７２－ＳＡＲＰ）??３．３．４．１化合物Ｐ１?（２）的結(jié)構(gòu)解析??化合物Ｐ１為淺黃色油狀物，易溶于ＭｅＯＨ，將其溶于ｍｅｔｈａｎｏｌ－山中進(jìn)行??ＮＭＲ測(cè)定。??高分辨質(zhì)譜測(cè)得化合物Ｐ１的準(zhǔn)分子離子峰為ｍ／ｚ?３２２．１６５７?［Ｍ?＋?Ｈ］＋，推測(cè)??其分子量為３２１０＆，分子式為（：１７１１２辦０５，不飽和度為７。１１？＾［１１、１３（：－１＾１??和ＨＳＱＣ信號(hào)（表３．４）顯示化合物Ｐ１含有１７個(gè)碳原子，包括２個(gè)甲基，３個(gè)??亞甲基，７個(gè)次甲基（包括１個(gè)氧取代的次甲基和５個(gè)烯碳），５個(gè)季碳（包括??２個(gè)羰基碳）。根據(jù)１ＨＪＨＣＯＳＹ相關(guān)信號(hào)（表３．３）可以確定Ｃ－７－Ｃ－１３片段。??Ｈ－３?與?Ｃ－１?和?Ｃ－５，?Ｈ－１?與?Ｃ－３、Ｃ－５?和?Ｃ－７?以及?Ｈ－５?與?Ｃ－ｌ、Ｃ－３?和?Ｃ－７?之間存??在的ＨＭＢＣ信號(hào)（表３．４），表明化合物含有一個(gè)三取代的苯環(huán)單元，然后再根??據(jù)Ｈ－１３與Ｃ－１４之間存在ＨＭＢＣ信號(hào)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]海洋真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物化學(xué)成分及生物活性的研究進(jìn)展[J]. 楊加庚,梅益勤,裴月湖.  沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(01)
[2]產(chǎn)紫青霉中的活性成分[J]. 王濤,張祎,齊秀蘭,裴月湖.  沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(05)

碩士論文
[1]三株土壤放線(xiàn)菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究[D]. 尉飛飛.山東大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3610214