低氧作為多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病所具有的特征狀態(tài),不僅跟創(chuàng)傷性腦損傷、阿爾茲海默病、腦缺血、中風(fēng)有關(guān),而且跟高原腦水腫、顱內(nèi)感染、長(zhǎng)期癲癇持續(xù)狀態(tài)后窒息這些高原易發(fā)疾病也息息相關(guān)。低氧對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響尤為嚴(yán)重,因?yàn)槟X細(xì)胞代謝旺盛、耗氧量較大,所以腦皮質(zhì)對(duì)低濃度氧的耐受性較低。中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病類藥物遞送至腦組織,主要通過(guò)血-腦屏障和血-腦脊液屏障。血-腦屏障通過(guò)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞排除毒性物質(zhì)和代謝產(chǎn)物,同時(shí)使腦組織攝取所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),因此血-腦屏障是保證腦組織內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要生理結(jié)構(gòu)之一。然而大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明,低氧可能會(huì)影響血腦屏障的結(jié)構(gòu),干擾其功能,進(jìn)而影響藥物進(jìn)出腦組織,使患者產(chǎn)生各種不良反應(yīng)。前期課題組的研究證明,低氧對(duì)大鼠血腦屏障中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)產(chǎn)生影響。但是先前的研究多采用大鼠腦組織,很難反映低氧對(duì)人血腦屏障中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的差異性影響。因此,課題組依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn),采用人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血腦屏障的代表性結(jié)構(gòu),設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn),旨在探討低氧對(duì)血腦屏障中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。首先,研究了低氧對(duì)地西泮在hCMEC/D₃單細(xì)胞層上轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。結(jié)果顯示:地西泮轉(zhuǎn)運(yùn)的時(shí)間依... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

血腦屏障結(jié)構(gòu)示意圖

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文基于hCMEC/D3細(xì)胞單層膜作為血腦屏障模型的地西泮低氧轉(zhuǎn)運(yùn)研究71.3技術(shù)路線本課題研究路線設(shè)計(jì)如圖1-2所示：圖1-2本課題技術(shù)路線1.4課題的創(chuàng)新性一、創(chuàng)新性地將低氧對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)影響及低氧對(duì)血腦屏障的結(jié)構(gòu)與藥物通透性的影響聯(lián)系起來(lái)。二、首次嘗試構(gòu)建人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞單層膜的低氧模型，使藥物地西泮在此構(gòu)建的體外血腦屏障模型進(jìn)行跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。三、本研究所采用的實(shí)驗(yàn)方法與分子生物學(xué)技術(shù)是國(guó)際上研究藥物轉(zhuǎn)運(yùn)與調(diào)控機(jī)制的通用方法，緊跟國(guó)際同類研究的前沿。

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文基于hCMEC/D3細(xì)胞單層膜作為血腦屏障模型的地西泮低氧轉(zhuǎn)運(yùn)研究24們先通過(guò)Real-timePCR研究了P-gp的mRNA水平的變化。正如之前所預(yù)期的，P-gp的mRNA在低氧時(shí)表達(dá)降低。Control組、低氧24h組、低氧48h組和低氧72h組的hCMEC/D3細(xì)胞中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mRNA表達(dá)水平測(cè)定結(jié)果如圖3-1所示。結(jié)果顯示，對(duì)于P-gp：低氧24h組與Control組相比，細(xì)胞中P-gpmRNA相對(duì)表達(dá)量下調(diào)了36.74%；低氧48h組與Control組相比，組織中P-gpmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)80.88%(P<0.01)；低氧72h組與Control組相比，組織中P-gpmRNA相對(duì)表達(dá)量下調(diào)了32.85%。證明低氧會(huì)在48h內(nèi)對(duì)P-gp的mRNA表達(dá)引起顯著性差異（圖3）。圖3-1低氧不同時(shí)間對(duì)P-gp的mRNA表達(dá)水平的影響注：**P＜0.01，與對(duì)照組相比有顯著差異。3.3.2低氧對(duì)hCMEC/D3細(xì)胞膜中P-gp的蛋白表達(dá)水平的影響為了研究低氧(1%O2)暴露對(duì)hCMEC/D3細(xì)胞中P-gp蛋白穩(wěn)定性的影響，我們選擇免疫印跡研究了P-gp蛋白表達(dá)水平隨時(shí)間的變化。通過(guò)WesternBlot實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估hCMEC/D3中ABC族藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp的蛋白表達(dá)水平，P-gp可在170kDa處檢測(cè)到特異性條帶而ATP1A1作為膜蛋白內(nèi)參在110kDa處檢測(cè)到特異性條帶。結(jié)果顯示，低氧條件下P-gp的蛋白質(zhì)表達(dá)與mRNA表達(dá)趨勢(shì)相同（見(jiàn)圖3-2）。對(duì)于P-gp：低氧24h組與Control組相比，細(xì)胞中P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量下調(diào)9.42%；低氧48h組與Control組相比，細(xì)胞中P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)19.33%(P<0.05)；低氧72h組與Control組相比，細(xì)胞中P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量下調(diào)了8.91%。有趣的是，P-gp的表達(dá)并沒(méi)有持續(xù)下降，而是在72h呈上升趨勢(shì)，這可能與細(xì)胞的代償機(jī)制有關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3580240