目的:研究大黃素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷（中草藥羊蹄的主要成分）對(duì)皮膚黑色素瘤轉(zhuǎn)移的作用及其機(jī)制。方法:將人皮膚黑色素瘤A375細(xì)胞用不同濃度的大黃素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷處理后,A375細(xì)胞的細(xì)胞活性通過CCK-8法進(jìn)行檢測(cè);以劃痕法檢測(cè)A375細(xì)胞的遷移能力;以transwell法檢測(cè)A375細(xì)胞的侵襲能力;RT-PCR及western-blot分別檢測(cè)COX-2的m RNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá);ELISA法測(cè)定c-jun的活性;western-blot測(cè)定c-jun的磷酸化;分別以COX-2 si RNA和過表達(dá)質(zhì)粒對(duì)COX-2進(jìn)行沉默和過表達(dá),以c-jun抑制劑SP60012和過表達(dá)質(zhì)粒對(duì)c-jun進(jìn)行抑制和過表達(dá),檢測(cè)COX-2和c-jun在黑色素瘤遷移和侵襲中的作用。結(jié)果:大黃素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷有效降低了A375細(xì)胞的活性,并對(duì)A375細(xì)胞的遷移和侵襲均有抑制作用;大黃素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷能夠通過抑制m RNA轉(zhuǎn)錄水平以及COX-2的蛋白表達(dá),從而抑制A375細(xì)胞的遷移侵襲;COX-2的過表達(dá)能夠明顯促進(jìn)A375細(xì)胞的侵襲和遷移;而沉默COX-2能... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大黃素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷（PG）的化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文14結(jié)果1PG對(duì)A375細(xì)胞活性的影響為了檢測(cè)不同濃度PG對(duì)A375細(xì)胞在不同時(shí)間段活性的影響，將A375細(xì)胞分別給予不同濃度的PG（0、10、20、50μg/mL）進(jìn)行預(yù)處理，再將A375細(xì)胞在培養(yǎng)箱中孵育24h、48h、72h后，加入CCK-8溶液進(jìn)行檢測(cè)，觀察PG在不同時(shí)間段對(duì)A375細(xì)胞的活性的影響，我們發(fā)現(xiàn)：根據(jù)圖1結(jié)果顯示，PG在10μM劑量預(yù)處理細(xì)胞時(shí)，只有細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間達(dá)到72h后，與對(duì)照組相比，細(xì)胞活性才出現(xiàn)明顯下降；而20μM劑量的PG預(yù)處理細(xì)胞，在48h和72h后檢測(cè)，均發(fā)現(xiàn)細(xì)胞活性顯著下降；50μM劑量的PG預(yù)處理后，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)都顯示PG能夠明顯抑制A375細(xì)胞的活性（p<0.05）。結(jié)果顯示：PG對(duì)A375細(xì)胞具有顯著的活性抑制作用，具有抗黑色素瘤的潛在實(shí)驗(yàn)價(jià)值；其次，我們?cè)诤罄m(xù)轉(zhuǎn)移和侵襲的實(shí)驗(yàn)中，可以在細(xì)胞培養(yǎng)48h時(shí)，選擇10μM、20μM劑量用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。圖1PG對(duì)A375細(xì)胞活性的影響（與對(duì)照組比較，*p<0.05）

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文163PG對(duì)A375細(xì)胞侵襲能力的影響以transwell實(shí)驗(yàn)測(cè)定腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。PG以10μM和20μM劑量的預(yù)處理A375細(xì)胞，培養(yǎng)48h。根據(jù)圖3結(jié)果顯示：黑色素瘤細(xì)胞A375在48h培養(yǎng)后，經(jīng)過PG預(yù)處理的組別與正常對(duì)照組比較，A375細(xì)胞侵襲能力被顯著抑制（P<0.05），且隨著PG濃度的增加，PG對(duì)A375細(xì)胞侵襲抑制程度不斷增強(qiáng)（P<0.01）。根據(jù)上述結(jié)果說明：PG能夠顯著抑制A375細(xì)胞侵襲的作用，且隨濃度增加不斷增強(qiáng)，具有濃度依賴性。圖3PG對(duì)黑色素瘤A375細(xì)胞侵襲能力的影響（與對(duì)照組比較，*p<0.05，**p<0.01）4PG對(duì)A375細(xì)胞中COX-2mRNA及蛋白表達(dá)的影響前期，通過PG對(duì)黑色素瘤細(xì)胞A375活性、遷移能力、侵襲能力的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PG能夠有效抑制A375細(xì)胞侵襲、遷移能力。隨后，通過對(duì)PG抑制A375細(xì)胞的分子機(jī)制進(jìn)行了研究。根據(jù)我們先前的研究表明：PG能夠通過下調(diào)COX-2

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蘆薈大黃素調(diào)控Notch-1/Akt/NF-κB信號(hào)通路對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J]. 劉豪杰,陳文禮,陳雪蕾.  中醫(yī)學(xué)報(bào). 2020(04)
[2]新型植物源殺菌劑——大黃素甲醚[J].   農(nóng)村新技術(shù). 2020(03)
[3]中藥羊蹄乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究[J]. 趙躍麗,董洪強(qiáng),張?zhí)m勝.  大理大學(xué)學(xué)報(bào). 2020(02)
[4]大黃素甲醚氨基酸衍生物的合成及其殺菌活性[J]. 孟振國(guó),朱祥,趙熾娜,常悅,吳清來,李俊凱.  林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè). 2020(01)
[5]羊蹄甲果莢總黃酮提取工藝優(yōu)化及抗氧化性研究[J]. 張鵬,張蝶,唐森,謝濟(jì)運(yùn).  當(dāng)代化工. 2019(12)
[6]大黃酚通過調(diào)控星形膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)保護(hù)小鼠腦缺血再灌注損傷[J]. 李江曼,王一頔,吳苗苗,劉彤,高佳璐,李煒.  中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志. 2019(21)
[7]大黃化學(xué)成分及抗氧化、酶抑制特性研究進(jìn)展[J]. 張莉,潘婧,吳歡.  海南醫(yī)學(xué). 2019(20)
[8]大黃素甲醚通過調(diào)控miR-21表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞生存、促進(jìn)其凋亡[J]. 白潔,英子偉,趙林,李偉杰,王聰,謝賢鑫,姜大慶.  實(shí)用藥物與臨床. 2019(02)
[9]基于體外肝代謝考察大黃素甲醚肝毒性作用[J]. 汪祺,王亞丹,楊建波,劉越,文海若,馬雙成.  中國(guó)中藥雜志. 2019(11)
[10]大黃素甲醚對(duì)皮質(zhì)酮損傷PC12細(xì)胞保護(hù)作用研究[J]. 譚謙,曾肆,童妍.  中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志. 2018(10)

博士論文
[1]大黃素甲醚-8-O-β-葡萄糖苷（PG）誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[D]. 賀媛琪.山東大學(xué) 2017

碩士論文
[1]大黃素甲醚調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)性Ⅰ型糖尿病小鼠血糖和胰島素水平及機(jī)制探討[D]. 季娟.青島大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3571012