本文關(guān)鍵詞：創(chuàng)新藥物對(duì)人肝微粒體CYP450酶體外抑制評(píng)價(jià)體系的建立與應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:藥物對(duì)CYP450酶的抑制作用,是引起藥物相互作用的最主要因素,主要表現(xiàn)為藥物通過對(duì)肝藥酶的直接抑制,減慢合用藥物在肝臟的代謝,使得后者產(chǎn)生療效增強(qiáng)甚至毒性,進(jìn)而引發(fā)不良反應(yīng)。在藥物開發(fā)早期階段進(jìn)行CYP450酶抑制潛能的研究,可提示臨床上發(fā)生藥物-藥物相互作用的潛力,以開發(fā)出更為安全且有效的藥物,指導(dǎo)臨床合理、安全用藥。傳統(tǒng)的體外抑制作用研究方法主要是熒光檢測結(jié)合重組酶法,該法不能應(yīng)用于具有熒光干涉的藥物抑制檢測,且由于重組的單酶活性遠(yuǎn)高于人肝微粒體,獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能直接外推至人體。本文旨在建立LC-MS/MS法測定CYP450酶特異性底物相應(yīng)的代謝產(chǎn)物的生成量,以人肝微粒體模型為研究對(duì)象,針對(duì)酶抑制評(píng)價(jià)體系的若干環(huán)節(jié)開展研究,優(yōu)化、建立一套合理、準(zhǔn)確、可靠的體外評(píng)價(jià)體系,并將該體系應(yīng)用于創(chuàng)新藥物對(duì)人肝微粒體七種CYP450酶的抑制作用評(píng)價(jià),以預(yù)測其在體內(nèi)可能引起的藥物相互作用,為進(jìn)一步臨床研究提供有價(jià)值的信息。方法:建立測定CYP450酶特異性底物對(duì)應(yīng)的代謝產(chǎn)物對(duì)乙酰氨基酚(CYP1A2)、4-羥基美芬妥因(CYP2C19)、1-羥基丁呋洛爾(CYP2D6)、1-羥基咪達(dá)唑侖(CYP3A4)、羥基安非他酮(CYP2B6)、去乙基阿莫地喹(CYP2C8)、4-羥基雙氯芬酸(CYP2C9)的LC-MS/MS定量分析方法,并對(duì)該法進(jìn)行全面的方法學(xué)驗(yàn)證,包括選擇性/特異性、進(jìn)樣殘留情況、內(nèi)標(biāo)與待測物相互干擾、線性范圍與定量下限、準(zhǔn)確度和精密度、基質(zhì)效應(yīng)、提取回收率、穩(wěn)定性、稀釋效應(yīng)等。分別以非那西丁/美芬妥因/丁呋洛爾/咪達(dá)唑侖/安非他酮/阿莫地喹/雙氯芬酸作為CYP450酶(CYP1A2/CYP2C19/CYP2D6/CYP3A4/CYP2B6/CYP2C8/CYP2C9)的特異性底物建立人肝微粒體CYP450酶抑制作用的體外評(píng)價(jià)體系,以其對(duì)應(yīng)的代謝產(chǎn)物的濃度表征相應(yīng)的CYP450酶的活性,通過對(duì)七個(gè)陽性抑制劑(呋拉茶堿/噻氯匹定/奎尼丁/酮康唑/噻氯匹定/二甲苯氧庚酸/磺胺苯吡唑)的CYP450酶抑制潛能的考察,驗(yàn)證該體系的可靠性。將該體系應(yīng)用于三個(gè)創(chuàng)新藥物對(duì)人肝微粒體七種CYP450酶抑制潛能的評(píng)價(jià)研究,預(yù)測其在體內(nèi)可能引起的藥物相互作用。結(jié)果:建立的測定人肝微粒體七種CYP450酶特異性底物的代謝產(chǎn)物的LC-MS/MS分析方法特異性良好,肝微粒體基質(zhì)中各代謝產(chǎn)物在各自的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r0.99),最低定量限分別為50/10/10/50/10/50/20 nM(CYP1A2/CYP2C19/CYP2D6/CYP3A4/CYP2B6/CYP2C8/CYP2C9),各代謝產(chǎn)物在低、中、高三個(gè)濃度水平的準(zhǔn)確度(RE)介于-3.20~8.22%之間,批內(nèi)、批間精密度(RSD)分別為1.84~10.2%和0.900~14.9%。評(píng)價(jià)體系中七種陽性抑制劑對(duì)各自的CYP450酶均有顯著抑制作用,測得IC50與FDA參考值相當(dāng)。應(yīng)用該評(píng)價(jià)體系評(píng)價(jià)三個(gè)創(chuàng)新藥物對(duì)人肝微粒體七種CYP450酶抑制作用,結(jié)果顯示,候選藥B對(duì)CYP2D6的IC50為21.7μM,其余的IC50均大于30μM。結(jié)論:本研究建立的LC-MS/MS定量分析方法靈敏、快速、特異、可靠,可同時(shí)準(zhǔn)確定量分析孵育體系中七種CYP450酶探針底物對(duì)應(yīng)代謝產(chǎn)物的濃度。評(píng)價(jià)體系中七種CYP450酶的陽性抑制劑均對(duì)各自的CYP450酶均有顯著抑制作用,表明該評(píng)價(jià)體系準(zhǔn)確可靠。應(yīng)用該體系評(píng)價(jià)了三個(gè)創(chuàng)新藥物(A、B、C)對(duì)人肝微粒體七種CYP450酶抑制作用,結(jié)果顯示,除候選藥B對(duì)CYP2D6表現(xiàn)出一定的抑制作用(IC50為21.7μM)外,候選藥物A、C對(duì)CYP450酶抑制的IC50均大于30μM,提示三個(gè)候選藥物對(duì)CYP450酶的活性產(chǎn)生抑制作用的可能性較低。本研究建立的肝微粒體評(píng)價(jià)體系可成功應(yīng)用于評(píng)價(jià)創(chuàng)新藥物對(duì)人肝微粒體七種CYP450酶抑制作用研究。
【關(guān)鍵詞】：CYP450 酶 肝微粒體 抑制作用 LC-MS/MS 評(píng)價(jià)體系
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R969
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語11-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、基于LC-MS/MS技術(shù)測定人肝微粒體七種CYP450酶代謝產(chǎn)物的分析方法建立與驗(yàn)證16-41
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 1.1.1 儀器16-17
• 1.1.2 藥品及試劑17
• 1.1.3 溶液配制17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 1.2.1 LC-MS/MS分析條件18-19
• 1.2.2 生物樣品處理方法19-20
• 1.2.3 數(shù)據(jù)計(jì)算20
• 1.2.4 方法驗(yàn)證20
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-37
• 1.3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性20-22
• 1.3.2 選擇性/特異性22-24
• 1.3.3 進(jìn)樣殘留情況24-25
• 1.3.4 內(nèi)標(biāo)與待測物及待測物之間相互干擾25-28
• 1.3.5 線性范圍28-29
• 1.3.6 定量下限29-30
• 1.3.7 準(zhǔn)確度和精密度30-31
• 1.3.8 基質(zhì)效應(yīng)31-33
• 1.3.9 提取回收率33-34
• 1.3.10 穩(wěn)定性34-36
• 1.3.11 稀釋效應(yīng)36-37
• 1.4 討論37-39
• 1.4.1 色譜條件優(yōu)化38-39
• 1.4.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化39
• 1.5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)39-41
• 二、藥物對(duì)人肝微粒體CYP450酶抑制作用研究體系的建立41-55
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料41-43
• 2.1.1 儀器41-42
• 2.1.2 藥品42
• 2.1.3 試劑42-43
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法43-47
• 2.2.1 溶液配制43-45
• 2.2.2 孵育試驗(yàn)45-47
• 2.2.3 數(shù)據(jù)處理47
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-49
• 2.3.1 七種陽性抑制劑存在下人肝微粒體CYP450酶底物的代謝產(chǎn)物的濃度47
• 2.3.2 七種陽性抑制劑對(duì)人肝微粒體CYP450酶的體外抑制47-49
• 2.4 討論49-54
• 2.4.1 CYP1A249-50
• 2.4.2 CYP2C1950-51
• 2.4.3 CYP2D651
• 2.4.4 CYP3A451-52
• 2.4.5 CYP2B652
• 2.4.6 CYP2C852-53
• 2.4.7 CYP2C953-54
• 2.5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)54-55
• 三、藥物對(duì)人肝微粒體七種CYP450酶抑制作用評(píng)價(jià)體系的應(yīng)用55-64
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料55-57
• 3.1.1 儀器55-56
• 3.1.2 藥品56
• 3.1.3 試劑56-57
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法57-61
• 3.2.1 溶液配制57-58
• 3.2.2 孵育試驗(yàn)58-60
• 3.2.3 數(shù)據(jù)處理60-61
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-62
• 3.3.1 三個(gè)候選藥物存在下人肝微粒體CYP450酶底物的代謝產(chǎn)物的濃度61-62
• 3.3.2 候選藥物A、B、C對(duì)人肝微粒體CYP450酶的體外抑制62
• 3.4 討論62-63
• 3.5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)63-64
• 結(jié)論和展望64-65
• 參考文獻(xiàn)65-71
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明71-72
• 綜述 酶抑制體外評(píng)價(jià)體系在新藥開發(fā)初期的應(yīng)用72-81
• 綜述參考文獻(xiàn)79-81
• 致謝81-82
• 個(gè)人簡歷82

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡紅芳;楊麗麗;李曉芳;高志賢;程義勇;吳大成;;梯度離心法制備雞肝微粒體方法的建立[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2009年04期

2 劉昭前,程澤能,王偉,譚志榮,歐陽冬生,周宏灝;反相高效液相色譜法測定體外人肝微粒體中氟西汀及其代謝產(chǎn)物去甲氟西汀<英文>[J];Acta Pharmacologica Sinica;2000年11期

3 程澤能,黃松林,譚志榮,王偉,周宏灝;高效液相色譜-電化學(xué)檢測器法測定人肝微粒體中雌二醇的代謝產(chǎn)物(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;2001年04期

4 趙娜萍;余露山;姚彤煒;曾蘇;;高效液相色譜法測定人肝微粒體中帕洛諾司瓊的濃度[J];中國藥學(xué)雜志;2006年21期

5 鄧婧婷;莊笑梅;李樺;;噻吩諾啡在人、比格犬和大鼠的肝微粒體中體外代謝比較[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2010年01期

6 江泉觀;肝微粒體酶活性在毒理學(xué)上的意義[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);1979年06期

7 張沂,鮑燕燕,王洪武,王大鵬;左旋氧氟沙星對(duì)大鼠肝重、肝微粒體蛋白質(zhì)及細(xì)胞色素P450的影響[J];海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào);2004年01期

8 張順國,唐躍年,李方;利多卡因在人肝微粒體中的體外生物轉(zhuǎn)化[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2005年06期

9 海春旭;Trover F Slater;;十二烷基硫酸鈉對(duì)肝微粒體系統(tǒng)的抗氧化作用[J];中國公共衛(wèi)生學(xué)報(bào);1993年03期

10 曹春雨;辣椒辣素對(duì)倉鼠肝微粒體中雜環(huán)胺代謝及細(xì)胞色素P_(450)1A2活性的影響[J];國外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊);1998年06期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王連生;周宏灝;;人體肝微粒體中安定的代謝研究[A];中國藥理學(xué)會(huì)第八次全國代表大會(huì)暨全國藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

2 王連生;周宏灝;;人體肝微粒體中安定的代謝研究[A];中國藥理學(xué)會(huì)第八次全國代表大會(huì)論文摘要集（第二部分）[C];2002年

3 張圣虎;高士祥;劉濟(jì)寧;石利利;吉貴祥;吳晟e，

本文編號(hào)：291915