本文關(guān)鍵詞：環(huán)氧烷胺衍生物修飾siRNA負(fù)載脂質(zhì)體的肺部給藥研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:制備負(fù)載Survivin si RNA、MRP1 si RNA的新型類脂質(zhì)體用于肺部給藥,與抗癌藥物順鉑聯(lián)用逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性,考察該給藥系統(tǒng)對(duì)于si RNA的遞送能力。方法:合成三種具有不同碳鏈長(zhǎng)度和氨基結(jié)構(gòu)的環(huán)氧烷胺衍生物EAADs(Epoxy Alkyl Amine Derivative Lipidoids,EAADs),采用1H-NMR、FT-IR進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。采用乙醇注入法制備EAADs、PEG-EAADs和EGFR m Ab-PEG-EAADs類脂質(zhì)體,通過(guò)流式細(xì)胞儀和共聚焦顯微鏡觀察其在A549/DDP細(xì)胞中的攝取和分布情況,噴霧冷凍干燥法制備成干粉吸入劑。以順鉑為抗癌藥物,采用負(fù)載Survivin si RNA和MRP1si RNA的EAADs類脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞后,MTT法檢測(cè)該細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性,Western Blot法檢測(cè)Survivin蛋白和MRP1蛋白表達(dá)情況,Annexin V-FITC/PI雙染法和碘化丙啶(PI)法分別檢測(cè)A549/DDP細(xì)胞給予Survivin si RNA后的凋亡及周期變化情況。采用IVIS LuminaⅡ小動(dòng)物活體成像儀觀察靜脈注射和肺部吸入給藥時(shí)負(fù)載Cy5-si RNA的EAADs類脂質(zhì)體在裸鼠體內(nèi)的分布情況。在Luci-A549原位肺癌模型上通過(guò)小動(dòng)物活體成像儀監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)情況以考察負(fù)載Survivin si RNA和MRP1si RNA的EGFR m Ab-PEG-EAADs類脂質(zhì)體與順鉑聯(lián)用時(shí)在裸鼠身上的抗腫瘤效果。最后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的血液生化學(xué)分析以及對(duì)肺組織HE染色進(jìn)行病理觀察。結(jié)果:EAADs類脂質(zhì)體外形圓整、粒徑在200 nm左右,載體安全性良好,對(duì)si RNA具有較好的保護(hù)作用,滿足給藥需求。噴霧冷凍干燥法制得的干粉吸入劑物理粒徑為11.90±0.57μm、空氣動(dòng)力學(xué)粒徑為2.45μm、引濕性為6.64±1.12%。該法制得的干粉具有多孔低密度特征,空氣動(dòng)力學(xué)粒徑符合肺部給藥要求。EAADs-3類脂質(zhì)體在A549/DDP細(xì)胞上的攝取明顯高與EAADs-1和EAADs-2類脂質(zhì)體,PEG修飾后攝取率增加,且EGFR m Ab-PEG-EAADs-3類脂質(zhì)體更傾向于定位在A549/DDP細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。EGFR m Ab-PEG-EAADs-3類脂質(zhì)體在A549/DDP-Raw264.7共培養(yǎng)體系中主要能夠選擇性的進(jìn)入A549/DDP細(xì)胞。通過(guò)Western Blot法篩選出高沉默效率的Survivin si RNA序列和MRP1 si RNA序列,以EAADs-3、PEG-EAADs-3和EGFR m AbPEG-EAADs-3類脂質(zhì)體作為轉(zhuǎn)染試劑將Survivin si RNA(或MRP1 si RNA)轉(zhuǎn)染進(jìn)A549/DDP細(xì)胞后,A549/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性提高,相應(yīng)蛋白的表達(dá)量下降,此外轉(zhuǎn)染Survivin si RNA后的細(xì)胞凋亡率上升,G2期延長(zhǎng)。體內(nèi)分布結(jié)果顯示霧化吸入以及干粉吸入EAADs類脂質(zhì)體相對(duì)于靜脈注射給藥能延長(zhǎng)藥物在肺部的滯留時(shí)間。體內(nèi)抗腫瘤結(jié)果顯示聯(lián)合使用Survivin si RNA、MRP1 si RNA和DDP組腫瘤抑制要強(qiáng)于單獨(dú)使用DDP組,肝腎功能沒(méi)有明顯損傷。結(jié)論:EGFR m Ab-PEG-EAADs-3類脂質(zhì)體具有良好的遞送基因藥物的潛力,有望通過(guò)肺部給藥給予相關(guān)si RNA,逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性,增強(qiáng)順鉑的治療效果。
【關(guān)鍵詞】：EAADs 肺部給藥 Survivin siRNA MRP1 siRNA A549/DDP
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-17
• 1 si RNA11-12
• 1.1 Survivin11-12
• 1.2 MRP112
• 2 si RNA給藥系統(tǒng)常用策略12-14
• 2.1 延長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間13
• 2.2 增強(qiáng)靶向性13
• 2.3 促進(jìn)溶酶體逃逸13-14
• 3 給藥途徑的選擇14-15
• 4 本研究的意義和目的15-17
• 第二章EAADs類脂質(zhì)材料的合成及結(jié)構(gòu)表征17-29
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器17-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 2.1 EAADs-1 的合成18-19
• 2.2 EAADs-2 的合成19
• 2.3 EAADs-3 的合成19-20
• 2.4 EGFR mAb的巰基化20
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-28
• 3.1 EAADs-1 的結(jié)構(gòu)表征20-25
• 3.2 EAADs-2 的結(jié)構(gòu)表征25-27
• 3.3 EAADs-3 的結(jié)構(gòu)表征27-28
• 4 本章小結(jié)28-29
• 第三章EAADs類脂質(zhì)體的制備及評(píng)價(jià)29-44
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器29
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料29
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-34
• 2.1 EAADs類脂質(zhì)體的制備29-31
• 2.2 EAADs類脂質(zhì)體的表征31-32
• 2.3 噴霧冷凍干燥法制備干粉吸入劑32-33
• 2.4 干粉吸入劑理化性質(zhì)的評(píng)價(jià)33-34
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-43
• 3.1 EAADs類脂質(zhì)體制備處方的優(yōu)化34-36
• 3.2 EAADs類脂質(zhì)體理化性質(zhì)的評(píng)價(jià)36-39
• 3.3 干粉吸入劑理化性質(zhì)的評(píng)價(jià)39-43
• 4 本章小結(jié)43-44
• 第四章EAADs類脂質(zhì)體細(xì)胞學(xué)評(píng)價(jià)44-65
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器44-45
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料44-45
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器45
• 2 實(shí)驗(yàn)方法45-50
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)45-46
• 2.2 EAADs類脂質(zhì)體安全性的考察46
• 2.3 EAADs類脂質(zhì)體在A549/DDP細(xì)胞中的攝取46
• 2.4 EAADs-3 類脂質(zhì)體在A549/DDP細(xì)胞中的分布46-47
• 2.5 EAADs-3 類脂質(zhì)體在A549/DDP-Raw 264.7 共培養(yǎng)體系中的分布47
• 2.6 高沉默效率Survivin siRNA和MRP1 siRNA序列的篩選47-48
• 2.7 Survivin siRNA（或MRP1 siRNA）對(duì)A549/DDP細(xì)胞順鉑敏感性的影響48-49
• 2.8 Survivin siRNA對(duì)A549/DDP細(xì)胞凋亡的影響49
• 2.9 Survivin siRNA對(duì)A549/DDP細(xì)胞周期的影響49
• 2.10 Survivin siRNA（或MRP1 siRNA）對(duì)A549/DDP中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 . 39 2.11 Survivin siRNA與MRP1 siRNA協(xié)同作用的考察49-50
• 2.11 Survivin si RNA 與 MRP1 si RNA 協(xié)同作用的考察50
• 2.12 數(shù)據(jù)分析50
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果50-64
• 3.1 EAADs類脂質(zhì)體安全性的評(píng)價(jià)50-51
• 3.2 EAADs類脂質(zhì)體在A549/DDP細(xì)胞中的攝取51-54
• 3.3 EAADs-3 類脂質(zhì)體在A549/DDP細(xì)胞中的分布54-55
• 3.4 EAADs-3 類脂質(zhì)體在A549/DDP-Raw 264.7 共培養(yǎng)體系中的分布55-57
• 3.5 高沉默效率Survivin siRNA和MRP1 siRNA序列的篩選57-58
• 3.6 Survivin siRNA（或MRP1 siRNA）對(duì)A549/DDP順鉑敏感性的影響58-59
• 3.7 Survivin siRNA對(duì)A549/DDP細(xì)胞凋亡的影響59-60
• 3.8 Survivin siRNA對(duì)A549/DDP細(xì)胞周期的影響60-61
• 3.9 Survivin siRNA對(duì)A549/DDP細(xì)胞中Survivin蛋白表達(dá)的影響61-62
• 3.10 MRP1 siRNA對(duì)A549/DDP細(xì)胞中MRP1 蛋白表達(dá)的影響62-63
• 3.11 Survivin siRNA與MRP1 siRNA協(xié)同作用的考察63-64
• 4 本章小結(jié)64-65
• 第五章EAADs類脂質(zhì)體體內(nèi)組織分布及藥效學(xué)評(píng)價(jià)65-74
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器65
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料65
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器65
• 2 實(shí)驗(yàn)方法65-67
• 2.1 組織分布65-66
• 2.2 藥效學(xué)評(píng)價(jià)66
• 2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)66-67
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果67-73
• 3.1 組織分布67-69
• 3.2 藥效學(xué)評(píng)價(jià)69-73
• 4 本章小結(jié)73-74
• 全文總結(jié)74-76
• 參考文獻(xiàn)76-83
• 攻讀碩士學(xué)位期間科研成果83-84
• 致謝84-85

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：環(huán)氧烷胺衍生物修飾siRNA負(fù)載脂質(zhì)體的肺部給藥研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：286292