本文關鍵詞：PON1化學發(fā)光底物的合成、性質及應用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：對氧磷酶(PON)屬于芳香酯酶。芳香酯酶的活性與人的多種發(fā)病相關,在醫(yī)學上,是腫瘤、心血管病、肝臟等疾病的病變指標之一,因而探測芳香酯酶的活性并研究PON1底物,對于疾病的早期診斷、及時預警有非常重要的臨床意義。吖啶酯是一類較為常見的化學發(fā)光試劑,并且可以作為PON1的底物來測定PON1酶的活性,因此本課題合成四種新型吖啶酯,作為底物來考察其發(fā)光性能,評價底物的選擇性,并用吖啶酯作為底物建立化學發(fā)光法,篩選能夠激動PON1酶的中藥有效成分。通過對9-(4-對氯苯氧羰基)-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽(化合物1)的結構修飾研究,合成了9-(對叔丁基苯氧羰基)-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽(化合物2)、9-苯氧羰基-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽(化合物3)、9-(4-甲基苯氧羰基)-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽(化合物4)、9-(2,4-二甲基苯氧羰基)-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽(化合物5)等四種高量子產(chǎn)率的新型吖啶酯。其中化合物5整個化學發(fā)光反應在4s內完成,其他的四種吖啶化合物整個化學發(fā)光反應在0.8s內完成;五種吖啶酯化學發(fā)光效率大小如下:35421,苯環(huán)上沒有取代基的吖啶酯具有更高的化學發(fā)光效率,而苯環(huán)上的對位被取代的吖啶酯的化學發(fā)光效率是有所降低。五種吖啶酯濃度均為4.02×10-11 mol·L-1,緩沖液(Tris-HCl)p H 7.5時22min內表現(xiàn)出了良好的自身穩(wěn)定性;五種吖啶酯以乙腈作為溶劑,配成濃度為1.25×10-5mol·L-1母液液在4°C的冰箱里保存12周后,它們有不同程度的水解,濃度為1.25×10-5 mol·L-1的一級儲備液的穩(wěn)定性順序為52431,其中化合物5自身穩(wěn)定性最好,而化合物1的自身穩(wěn)定性最差。以五種吖啶酯作為化學發(fā)光底物,考察了rh PON1和人體血清PON1對底物的催化水解曲線,它們的速率常數(shù)大小順序均為13425,rh PON1和人體血清PON1催化水解吖啶酯的速率常數(shù)順序一致;其中化合物5表現(xiàn)出了最好的穩(wěn)定性,化合物5酚環(huán)上具有兩個甲基,增加了化合物的空間位阻,從而增強了化合物的穩(wěn)定性。以五種吖啶酯作為化學發(fā)光底物,考察了酯酶D和脂肪酶對對人體血清PON1催化水解吖啶酯底物的干擾作用,其中酯酶D和脂肪酶的濃度rh PON1濃度大于300倍,從結果可知,rh PON1,脂肪酶和酯酶D催化水解五種吖啶酯的能力相似。這表明,酯酶D和脂肪酶跟rh PON1相比對吖啶酯底物具有較差的催化水解活性。Na+和Ca2+PON1是激動劑,它們提高了底物的特異性和靈敏度。EDTA作為PON1抑制劑來抑制血清中PON1的特異活性,其中化合物5的特異性為最佳。運用以9-4-甲基苯氧羰基-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽作為底物的化學發(fā)光法測定生姜丹參、川芎、三七、人參和川芎六種中藥不同溶劑提取物對血清PON1的活性影響。初步結果表明:生姜、人參和三七對血清PON1有激動作用;川芎由于本身具有發(fā)光的性質,對測定有較大的干擾,當濃度調到很低時,它對血清PON1沒有顯示激動作用;虎杖由于自身存在能水解吖啶酯的成分而無法用化學發(fā)光法篩選,丹參對血清PON1幾乎沒有作用。
【關鍵詞】：PON1 吖啶酯 合成 化學發(fā)光 篩選 中藥 激動
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R914.5
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-10
• 1 緒論10-19
• 1.1 對氧磷酶（PON）10-12
• 1.1.1 PON簡介10-11
• 1.1.2 PON1 與疾病的關系11-12
• 1.1.3 PON1 活性影響因素12
• 1.2 PON1 水解底物及底物的檢測方法12-15
• 1.2.1 羧酸酯類底物12-14
• 1.2.2 機磷酸酯類底物14-15
• 1.3 化學發(fā)光15-17
• 1.3.1 化學發(fā)光的原理15
• 1.3.2 化學發(fā)光試劑15-16
• 1.3.3 化學發(fā)光分析法簡介16
• 1.3.4 吖啶酯衍生物的化學發(fā)光體系16-17
• 1.4 吖啶酯衍生物的化學發(fā)光機理及吖啶酯測定酶活性原理17-18
• 1.5 本課題研究意義18-19
• 2 PON1 化學發(fā)光底物的合成19-26
• 2.1 引言19
• 2.2 PON1 吖啶類底物的合成方法和合成路線19-20
• 2.3 實驗儀器與試劑20
• 2.4 實驗內容20-23
• 2.4.1 化合物 9-（對叔丁基苯氧羰基）10甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽的合成20-21
• 2.4.2 化合物 9-苯氧羰基10甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽的合成21-22
• 2.4.3 化合物 9-（4-對甲基苯氧羰基）10甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽的合成22-23
• 2.4.4 化合物 9-（2，，4-二甲基苯氧羰基）10甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽的合成23
• 2.5 結果與討論23-25
• 2.6 本章小結25-26
• 3 PON1 化學發(fā)光底物的性能測試26-47
• 3.1 引言26-27
• 3.2 實驗部分27-29
• 3.2.1 儀器和試劑27
• 3.2.2 儲備液的配制27-28
• 3.2.3 實驗方法28-29
• 3.3 結果和討論29-45
• 3.3.1 五種吖啶酯的化學發(fā)光時間29-30
• 3.3.2 五種吖啶酯化學發(fā)光工作曲線30-31
• 3.3.3 五種吖啶酯自身穩(wěn)定性考察31-33
• 3.3.4 標準重組人體對氧磷酶（rhPON1）催化五種吖啶酯的反應動力學曲線33-34
• 3.3.5 人體血清PON1 催化五種吖啶酯的反應動力學曲線34-35
• 3.3.6 脂肪酶和酯酶D的干擾試驗35-38
• 3.3.7 考察Na+對rhPON1、人體血清PON1 和脂肪酶的作用38-43
• 3.3.8 添加PON1 抑制劑ETDA考察rhPON1 和人體血清PON1 的特異性43-45
• 3.4 本章小結45-47
• 4 化學發(fā)光法從中藥中快速篩選PON1 激動劑47-57
• 4.1 引言47
• 4.2 材料與試劑47-48
• 4.2.1 材料47-48
• 4.2.2 儀器與試劑48
• 4.3 實驗方法48-51
• 4.3.1 化學發(fā)光法48
• 4.3.2 中藥材的提取與分離方法48-50
• 4.3.3 分離純化生姜醇提液50-51
• 4.4 實驗結果與討論51-56
• 4.4.1 六種中藥材提取物對血清PON1 的影響51-52
• 4.4.2 生姜不同溶劑提取物對rhPON1 和血清PON1 的影響52-53
• 4.4.3 不同濃度生姜提取物對血清PON1 活性的影響53-54
• 4.4.4 生姜分離產(chǎn)物 3#對血清 PON1 活性的影響54-56
• 4.5 本章小結56-57
• 5 結論與展望57-59
• 5.1 結論57-58
• 5.2 展望58-59
• 致謝59-60
• 參考文獻60-70
• 附錄70-75
• A 作者碩士研究生期間科研成果70
• B 化合物的1HNMR譜圖70-75

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