發(fā)布時間：2020-06-07 01:35

【摘要】：帕金森病(Parkinson’disease,PD)是一種由多巴胺能神經(jīng)元選擇性喪失所引起的神經(jīng)退行性疾病。該病多發(fā)于55歲及以上的中老年人,其典型的行為學特征表現(xiàn)為:靜止性震顫、步伐不穩(wěn)、肌強直、行動緩慢或者不自主性運動等。隨著中國老齡化的進展,帕金森病的發(fā)病率逐年升高。目前尚沒有有效的治療方式,臨床上的治療藥物只能暫緩癥狀,但不能預(yù)防或減慢疾病的進展。糖類是生物體內(nèi)除蛋白質(zhì)和核酸外又一類重要的生物分子,在細胞的分裂分化,生長代謝等方面發(fā)揮著重要的作用。海帶多糖及紫菜多糖是從海洋植物海帶及紫菜中提取的兩種酸性雜多糖,已有研究證明這兩種多糖具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、增強免疫力及保護多巴胺能神經(jīng)元免受損傷等多種生物活性,然而多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜,對于研究其機制帶來了困擾。本研究旨在通過對海帶多糖及紫菜多糖進行降解,獲得葡萄糖醛酸甘露糖寡糖及紫菜寡糖,并進一步探究其神經(jīng)保護活性的機理。PD模型是研究其發(fā)病機理及篩選藥物的重要工具,MPTP誘導的小鼠模型在病理改變及行為學方面與PD患者有類似的特征,是目前較為理想的動物模型。6-OHDA是多巴胺能神經(jīng)損毀劑,在腦內(nèi)可由多巴胺代謝生成,通過生成自由基等方式損害神經(jīng)元,其誘導的神經(jīng)細胞損傷能較好的反應(yīng)細胞受到外界刺激后的生理變化。本實驗以MPTP制備PD小鼠模型,應(yīng)用行為學、免疫組化、免疫印跡及電化學HPLC等技術(shù),來探討葡萄糖醛酸甘露寡糖及紫菜寡糖保護PD小鼠的分子生物學機制。同時,本實驗以6-OHDA誘導PC12細胞損傷,以LPS誘導BV2細胞炎癥,檢測細胞活力、細胞凋亡及線粒體膜電位等指標,從細胞水平探討這兩類寡糖的神經(jīng)保護作用。(1)對海帶多糖進行酸降解,通過HPLC、核磁及質(zhì)譜技術(shù),我們獲得了兩個結(jié)構(gòu)明確的寡糖——葡萄糖醛酸甘露二糖及四糖,即為GM1和GM2。體外研究發(fā)現(xiàn):GM1及GM2顯著地提高了PC12細胞的活力,提高細胞的抗氧化系統(tǒng)和線粒體膜電位水平,抑制了ROS對線粒體的損傷,從而抑制PC12細胞凋亡的發(fā)生;在體研究發(fā)現(xiàn):通過腹腔連續(xù)七天注射MPTP,成功獲得PD小鼠模型;經(jīng)過GM1及GM2處理后,顯著地改善了PD小鼠的行為學障礙;提高了多巴胺的含量及酪氨酸羥化酶(TH)在紋狀體黑質(zhì)中的蛋白表達水平,抑制多巴胺能神經(jīng)元的損傷;同時,GM1及GM2可以通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號通路,抑制凋亡的發(fā)生。(2)對紫菜多糖進行酸降解,獲得了聚合度為2-13的紫菜寡糖混合物,其結(jié)構(gòu)以3-連接的β-D-半乳糖和4-連接的α-L-半乳糖-6-硫酸基交替連接,記為OP。體外研究發(fā)現(xiàn),OP顯著地抑制了ROS導致的線粒體損傷,有較好的清除自由基的活力。同時,OP可以顯著地抑制LPS誘導的BV2細胞活化,抑制炎癥因子的產(chǎn)生和NO的釋放,有較好的抗神經(jīng)炎癥的作用。在體研究發(fā)現(xiàn),OP顯著地改善PD小鼠的行為學障礙,抑制了多巴胺能神經(jīng)元的損傷,抑制了DA能神經(jīng)元的凋亡。通過體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),葡萄糖醛酸甘露寡糖(GM1及GM2)及紫菜寡糖OP都具有較好的神經(jīng)保護作用,其中GM1及GM2主要抑制DA能神經(jīng)元細胞的凋亡,OP還能抑制神經(jīng)炎癥的發(fā)生。這兩類海藻寡糖作用明顯,結(jié)構(gòu)簡單,為帕金森病的藥物篩選提供了新的思路。
【圖文】：

圖 1.1 帕金森病的臨床特征Figure 1.1 The motion characteristics of PD.森病的臨床特征過去的幾年間，PD 的發(fā)病率逐漸升高。在大約 95%的 PD 病例中遺傳連鎖反應(yīng)（稱為“sporadic”）(柏秀娟 等，2010)。在未發(fā)現(xiàn)左D 患者的死亡率是正常年齡受試者的 3 倍。雖然左旋多巴顯著提生活質(zhì)量，但基于人群的調(diào)查顯示，與普通人群相比，這些患者的。此外，大多數(shù) PD 患者在術(shù)后都有相當大的運動障礙 (林清 等，，何導致多巴胺缺失或 SNpc 損傷的疾病都可能導致“帕金森病”樣圖 1.1），表現(xiàn)為靜止性震顫、步伐不穩(wěn)、肌強直、行動緩慢或者不 (馬玲玲 等，2017；楊媛媛 等，2013)。靜止性震顫指在休息時

）、流口水（沒法正常吞咽），寫字越來越小，步長變小等，2011)。運動遲緩這一癥狀對給患者帶來極大地負費更長的時間去完成，比如穿衣、走路或吃飯 (Wang患者后期會產(chǎn)生無法控制的身體彎曲，不能完成正常越來越彎曲，最后只能依靠輪椅活動 (阮克鋒 等，20 等，2010)。，即無法自主的開始一種運動，如病人在試圖移動時而無法進一步的活動，這是帕金森病常見臨床癥狀帕金森病人會出現(xiàn)情感孤僻的異常行為，不愿意主動加活動，否則他們寧愿安靜地坐著 (張如意 等，202003)。PD 患者對事物的認知能力也會下降，對問題答問題的時間都顯著延長。抑郁癥和癡呆癥在 PD 中患者中尤其常見，尤其是老年患者 (Fahn，2003)。
【學位授予單位】：中國科學院大學(中國科學院海洋研究所)
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R96

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉海林;徐江濤;宋永斌;楊俊;許永華;余伍忠;李景春;張子彥;;慢性間斷性缺氧對帕金森病模型小鼠認知功能的影響[J];新醫(yī)學;2011年06期

2 張揚;邵蓓;;茶多酚對帕金森病模型小鼠多巴胺神經(jīng)元保護作用的實驗研究[J];中國康復(fù)理論與實踐;2008年03期

3 羅烘權(quán);袁進;徐名襯;鄭春華;王玉玨;吳麗紅;顧為望;;口服百草枯建立帕金森病模型及其評價研究[J];動物醫(yī)學進展;2015年09期

4 李燕

本文編號：2700605