【摘要】：目的經(jīng)過前期篩選,采用YN和TV1混合,制備外用透皮吸收制劑YNT涂膜劑,初步探討YNT涂膜劑經(jīng)皮給藥的抗血栓、抗炎作用,考察YNT涂膜劑聯(lián)合用藥的療效;對YN涂膜劑和TV1涂膜劑的透皮吸收特性開展研究,為后續(xù)YNT涂膜劑的透皮吸收實驗及經(jīng)皮給藥制劑研究提供理論依據(jù)和方法參考。方法YNT涂膜劑對大鼠實驗性腦血栓形成的影響研究,采用大鼠實驗性腦血栓模型,分為假手術(shù)組、模型組、YN涂膜劑組(10 mg/kg)、TV1涂膜劑組(3.33mg/kg)、YNT高(TV1:YN 6.67:10 mg/kg)、YNT中(TV1:YN 3.33:10 mg/kg)以及YNT低(TV1:YN 1.67:10 mg/kg)劑量組,以神經(jīng)行為學(xué)評分、血液流變學(xué)、凝血和纖溶系統(tǒng)功能以及腦組織中炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α的含量作為檢測指標(biāo),考察YNT涂膜劑對大鼠腦血栓形成的影響。YNT涂膜劑對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響研究,采用尾靜脈注射膠原蛋白-腎上腺素復(fù)合誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)小鼠偏癱模型,分為正常組、模型組、YN涂膜劑組(20mg/kg)、TV1涂膜劑組(18.88 mg/kg)、YNT高(TV1:YN 37.75:20 mg/kg)、YNT中(TV1:YN 18.88:20 mg/kg)以及YNT低(TV1:YN 9.44:20 mg/kg)劑量組,以小鼠體內(nèi)血栓形成情況、偏癱小鼠肺組織病理變化作為檢測指標(biāo),考察YNT涂膜劑對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響。YNT涂膜劑對小鼠體內(nèi)抗炎作用的影響研究,采用二甲苯致小鼠耳腫脹、角叉菜膠致小鼠足腫脹、小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進模型,分為正常組、模型組、阿司匹林組(200mg/kg)、YN涂膜劑組(20 mg/kg)、TV1涂膜劑組(18.88mg/kg)、YNT高(TV1:YN 37.75:20 mg/kg)、YNT中(TV1:YN 18.88:20 mg/kg)以及YNT低(TV1:YN 9.44:20 mg/kg)劑量組,以小鼠耳足腫脹度、腹腔毛細(xì)血管通透性組間差異顯著性,作為檢測指標(biāo),考察YNT涂膜劑對小鼠抗炎作用的影響。YNT涂膜劑透皮吸收特性初探,采用改良的TPY-2型藥物透皮擴散試驗儀,借助HPLC法進行含量測定,考察YN涂膜劑的體外透皮吸收特性;利用ADP誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集形成血栓模型,通過比濁法測定血小板聚集率,考察YN涂膜劑對大鼠體內(nèi)血小板聚集的影響,并用HPLC法檢測YN體內(nèi)代謝的血藥濃度;采用改良的TPY-2型藥物透皮擴散試驗儀,建立TV1涂膜劑體外透皮吸收實驗方法。YN涂膜劑和TV1涂膜劑的透皮吸收實驗研究,為后續(xù)YNT涂膜劑的透皮吸收實驗提供方法參考和實驗基礎(chǔ)。結(jié)果1 YNT涂膜劑的抗血栓、抗炎作用探究1.1 YNT涂膜劑對大鼠腦血栓形成的影響實驗結(jié)果表明:假手術(shù)組,神經(jīng)行為學(xué)無異常;模型組,出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺失;與模型組比較,YNT(TV1:YN)涂膜劑高、中、低(6.67:10 mg/kg.BW、3.33:10 mg/kg.BW、1.67:10 mg/kg.BW)劑量組,神經(jīng)功能有恢復(fù)趨勢,造模后24 h神經(jīng)功能評分TV1組、高劑量組顯著降低(P0.05);高、中、低劑量組有降低切變率在10/s、60/s、150/s、200/s下的全血粘度、卡松粘度、FIB含量、延長PT的趨勢;高劑量組能顯著降低全血粘度1/s、紅細(xì)胞聚集指數(shù)(P0.05),提示YNT涂膜劑可能是通過改善神經(jīng)功能缺失、血液黏度、血液流動狀態(tài),來抑制腦血栓形成和發(fā)展。與模型組比較,YN涂膜劑高劑量組IL-6含量明顯升高(P0.05),高、低劑量組IL-10含量有升高趨勢;YNT低劑量組TNF-α含量顯著降低(P0.05),高、中劑量組TNF-α含量有降低趨勢(P0.05),提示YNT涂膜劑的腦保護機制可能是通過影響腦內(nèi)炎癥細(xì)胞因子的表達。與TV1涂膜劑組比較,YNT涂膜劑抑制大鼠實驗性腦血栓的形成和發(fā)展作用沒有顯著性差異,YN的加入對YNT涂膜劑的療效沒有增強的作用。1.2 YNT涂膜劑對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響實驗結(jié)果表明:YNT(TV1::YN)涂膜劑高(37.75:20 mg/kg.BW)劑量組能顯著抑制小鼠偏癱形成(P0.05),病理學(xué)組織結(jié)果顯示高劑量組小鼠肺組織有輕度淤血,無明顯出血,提示YNT涂膜劑可能對抑制小鼠體內(nèi)血栓形成和發(fā)展有一定作用;與TV1涂膜劑組比較,YNT涂膜劑抑制小鼠體內(nèi)血栓形成沒有顯著性差異,YN的加入對YNT涂膜劑的療效沒有增強的作用。1.3 YNT涂膜劑對小鼠抗炎作用的影響實驗結(jié)果表明:YNT(TV1:YN)涂膜劑高、中、低(37.75:20 mg/kg.BW、18.88:20 mg/kg.BW、9.44:20 mg/kg.BW)劑量組有抑制腹腔毛細(xì)管通透性亢進趨勢,低劑量組有抑制耳腫脹度趨勢,提示YNT涂膜劑對急性炎癥可能有效,其抗炎機制和有效劑量待進一步研究;與TV1涂膜劑組比較,YNT涂膜劑對小鼠抗炎作用沒有顯著性差異,YN的加入對YNT涂膜劑的療效沒有增強的作用。2 YNT涂膜劑透皮吸收特性初探2.1 YN涂膜劑透皮吸收實驗方法摸索實驗結(jié)果表明:建立的YN含量測定方法,方法學(xué)驗證結(jié)果良好,該檢測分析方法科學(xué)可靠,適用于YN涂膜劑的體外透皮吸收實驗。2.2 YN涂膜劑的抗血小板聚集及體內(nèi)血藥濃度檢測方法摸索實驗結(jié)果表明:YN涂膜劑對ADP誘導(dǎo)下大鼠的體內(nèi)血小板聚集有一定抑制作用,30 min處有最大抑制率和最高血藥濃度。2.3 TV1涂膜劑體外透皮吸收實驗方法摸索經(jīng)實驗初步發(fā)現(xiàn),TV1涂膜劑在體外透皮吸收實驗中,2 h開始TV1的B峰能明顯透過皮膚進入到接收液中,透皮吸收72 h后在接收液中TV1的B峰仍能檢測得出,其余峰暫時還未能在接收液中檢測出。結(jié)論綜上所述,YNT涂膜劑可能是通過改善神經(jīng)功能缺失,改善大鼠血液黏度,從而對抑制大鼠實驗性腦血栓形成產(chǎn)生一定作用,且在一定程度上對抑制小鼠體內(nèi)血栓的形成和發(fā)展可能有效,同時有一定抗急性炎癥作用,在抗血栓和抗炎藥效方面,YN的加入對YNT涂膜劑的療效沒有增強的作用;為YNT聯(lián)合用藥的后續(xù)研究提供了實驗基礎(chǔ)和新的思路;所建立的YN含量測定方法及TV1透皮吸收方法的摸索,為后續(xù)YNT涂膜劑經(jīng)皮給藥體內(nèi)外實驗研究和經(jīng)皮制劑研發(fā)提供了方法參考。
【圖文】：

27圖 1-8 YNT 涂膜劑對偏癱小鼠肺組織病理組織學(xué)變化的影響(HE 染色，40×10)A：模型組；B：低劑量組；C：中劑量組；D：高劑量組；E：TV1 組；F：YN 組Fig.1-8 Effect of YNT coating on the histopathological changes of pulmonary tissue inmice induced by collagen - adrenaline (Hematoxylin-eosin staining, 4 x 10)A: model group; B: low dose group; C: medium dose group; D: high dose group; E:TV1 group; F: YN group.

圖 2-1 YN 原料藥、空白皮膚勻漿液、涂膜劑基質(zhì)、3 h 透皮吸收接收液、YN 原料藥和空白皮膚勻漿液混合的色譜圖Fig. 2-1 Chromatogram of YN, blank skin homogenate, plastics matrix , the mixture ofYN with blank skin homogenate, 3h transdermal absorption solution3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量下限精密稱定 10 mg YN 對照品溶于 50 mL 生理鹽水中，即得 200 μg/mL 的對照品溶液。取 YN 對照品溶液用生理鹽水稀釋成 100、50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL 濃度樣品平行進樣 3 次，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程得 y=7.3834x-0.7259，r=1.0000，如圖 2 所示。檢出限是 0.0061 μg/mL，定量下限是 0.3906 μg/mL，在 0.3906-100.0000 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R965

【參考文獻】

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本文編號：2700816