發(fā)布時間：2017-03-24 03:12

  本文關鍵詞：AFP單抗修飾的載DCN基因PLGA靶向納米粒的制備及其體外活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:制備甲胎蛋白(AFP)單克隆抗體修飾的載核心蛋白聚糖基因(DCN)質(zhì)粒的聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)靶向納米緩釋顆粒,并研究其理化特性以及對Hep G2細胞抑制作用。方法:第一部分1采用復乳溶劑揮發(fā)法制備靶向AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒子,掃描電鏡觀察其形貌,激光粒度儀測定其粒徑,并對不同批次的PLGA納米粒進行包封率、載藥量及體外釋放率的檢測;2采用羧基熒光素和羅丹明熒光素對Ig G-PLGA-rh DCN納米粒子和AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒子進行雙熒光標記,分別在4h及12h時觀察納米粒進入Hep G2細胞的情況;3 RT-PCR鑒定AFPm Ab-PLGA-rhDCN納米粒在HepG2細胞中的表達情況。第二部分1 MTT法檢測納米粒子對Hep G2細胞的增殖抑制作用;2 Ig G-PLGA-rh DCN納米粒子和不同濃度的AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒子作用Hep G2細胞48h后,流式細胞儀檢測各組細胞的凋亡率和細胞周期;3實時熒光定量PCR檢測納米粒子作用48h后各組細胞中Bcl-2基因和caspase-3基因的表達情況。結果:第一部分1復乳法制備的納米粒子形態(tài)規(guī)則,表面平整,平均粒徑為216.7±8.2nm,Zeta電位為-17.4m V;納米粒子的包封率平均為:78.60±1.03%,載藥量平均為:3.12±0.17%;納米粒子在體外緩慢平穩(wěn)釋放,在240h時釋放率達到79.3%;2 Hep G2細胞攝取實驗結果顯示,AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒子有生物靶向作用,可在細胞中大量富集;3 RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳結果顯示,AFPmAb-PLGA-rhDCN納米粒子中的DCN基因可在Hep G2細胞中表達。第二部分1 MTT實驗中,與對照組相比,不同濃度的AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒子對Hep G2細胞均有顯著的增殖抑制作用(p0.05);2流式細胞術檢測結果中,實驗組細胞的早期凋亡率明顯高于對照組(p0.01),且隨納米粒子濃度的升高而升高;三個實驗組細胞周期的S期、G2期比例明顯降低,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.01),而G1期比例相對升高;3實時熒光定量PCR結果:Bcl-2基因在實驗組中的表達隨納米粒子濃度的增高逐漸降低,而caspase-3基因則逐漸升高,與對照組相比均有統(tǒng)計學差異(p0.01)。結論:1成功制備了具有緩釋作用的AFPm Ab-PLGA-rh DCN納米粒子,可與Hep G2細胞特異性靶向結合,并且納米粒中的DCN基因可在細胞中成功表達。2在體外,AFPm Ab-PLGA rhDCN納米粒子可明顯抑制HepG2細胞的增殖、促進其早期凋亡,且凋亡機制可能與Bcl-2和caspase-3相關。
【關鍵詞】：核心蛋白聚糖 PLGA HepG2細胞 AFP單抗 Bcl-2 caspase-3
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R943
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 常用縮寫詞中英文對照表10-11
• 前言11-13
• 第一部分AFP單抗修飾的載DCN基因PLGA靶向納米粒的制備、物理性質(zhì)及靶向性檢測13-29
• 1 材料與方法13-21
• 1.1 實驗主要材料13-15
• 1.2 實驗方法15-20
• 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理20-21
• 2 結果21-26
• 2.1 質(zhì)粒酶切消化鑒定結果21
• 2.2 重組質(zhì)粒中DCN基因測序結果21-22
• 2.3 納米粒子外觀形態(tài)和粒徑22
• 2.4 納米粒子的包封率及載藥量22-23
• 2.5 納米粒的體外釋放23
• 2.6 納米粒子的體外細胞主動攝取23-25
• 2.7 納米粒在HepG2 細胞中的表達鑒定結果25-26
• 3 討論26-28
• 4 小結28-29
• 第二部分AFP單抗修飾的載DCN基因PLGA靶向納米粒對HepG2 細胞抑制作用的研究29-43
• 1 材料與方法29-33
• 1.1 實驗主要材料29-30
• 1.2 實驗方法30-32
• 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理32-33
• 2 結果33-40
• 2.1 細胞增殖抑制實驗結果33-34
• 2.2 細胞凋亡率結果34-35
• 2.3 細胞周期結果35-38
• 2.4 實時熒光定量PCR基因表達結果38-40
• 3 討論40-42
• 4 小結42-43
• 參考文獻43-47
• 綜述47-57
• 參考文獻54-57
• 致謝57-58
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果58-59
• 個人簡介59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 汪銀雄,段銀鐘,吳紅,孫應明;P物質(zhì)-PLGA納米緩釋微粒的制備及其性質(zhì)測定[J];臨床口腔醫(yī)學雜志;2005年11期

2 陳t

本文編號：265004