本文關(guān)鍵詞：載多柔比星聚肽自組裝體的構(gòu)建及其體外抗腫瘤研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：癌癥與心血管疾病和糖尿病并稱(chēng)嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的三大殺手。單獨(dú)使用化療藥物或與手術(shù)或放療聯(lián)用,目前依舊是臨床上腫瘤常規(guī)療法。但是,化療藥物應(yīng)用于臨床面臨諸多困難與挑戰(zhàn),例如溶解度低,在肝臟中快速降解或在腎臟中快速排泄,在腫瘤部位達(dá)不到有效治療血藥濃度導(dǎo)致生物利用度低；藥物缺乏選擇性和使用各種賦形劑和溶劑引起嚴(yán)重的毒副反應(yīng),在一定程度上制約了化療藥物的在臨床上應(yīng)用。解決方案之一即將藥物做成納米制劑。納米制劑具備較好的物理化學(xué)性能和體內(nèi)緩控釋特性；避免藥物在體內(nèi)循環(huán)降解失活；通過(guò)實(shí)體瘤的高通透性和滯留效應(yīng)(EPR效應(yīng))達(dá)到被動(dòng)靶向作用等優(yōu)點(diǎn)。自組裝嵌段在眾多藥用材料中作為藥物傳遞系統(tǒng)越來(lái)越引起研究者的興趣。一般而言,兩親性聚肽由親水性聚乙二醇嵌段(PEG)和疏水聚氨基酸(PAA)嵌段構(gòu)成,在水溶液可自發(fā)聚集。聚合作用合成的聚肽與天然蛋白質(zhì)具有相似的化學(xué)性質(zhì),具備良好的生物相容性和生物可降解性。疏水性藥物可以通過(guò)物理包埋在疏水內(nèi)核中或者通過(guò)化學(xué)鍵與嵌段絡(luò)合形成載藥納米制劑。除此之外,研究者發(fā)現(xiàn),帶有電荷的一些化合物(DNA、質(zhì)粒、順鉑)可以荷相反電荷的兩親性聚肽通過(guò)靜電作用絡(luò)合,自組裝形成核-殼式納米結(jié)構(gòu)�；谝陨涎芯�,我們實(shí)驗(yàn)室研究了一種新型的陰離子兩親性聚肽聚乙二醇-聚谷氨酸mPEG-PGA為納米載體,mPEG-PGA是一種人工全合成的、生物可降解、生物相容性良好的兩親性聚肽。此外,聚谷氨酸作為陰離子聚合物其側(cè)鏈含有含有游離的羧基�？梢酝ㄟ^(guò)靜電作用或者螯合作用與荷正電的藥物聚合。因此,為荷正電的抗癌藥物提出了一種理想的載藥策略,載藥過(guò)程簡(jiǎn)單,避免了有機(jī)試劑的引入,確保病人用藥安全。鹽酸多柔比星屬于蒽環(huán)類(lèi)抗生素細(xì)胞毒藥物,可用來(lái)治療多種癌癥。但是,嚴(yán)重的心臟毒性、骨髓抑制、腎毒性和多藥耐藥嚴(yán)重的限制了鹽酸多柔比星在臨床上的應(yīng)用。鹽酸多柔比星為兩親性弱堿(pKa=8.3),既可以以質(zhì)子化形式存在也可以去質(zhì)子化形式存在,調(diào)節(jié)外環(huán)境pH值,鹽酸多柔比星親疏水性變化且?guī)в胁煌姾�。因�?本課題提出一種基于靜電作用的藥物傳遞系統(tǒng),由荷負(fù)電的兩親性聚肽mPEG-PGA和荷正電的鹽酸多柔比星為研究對(duì)象。兩親性聚肽mPEG-PGA通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室自主合成,其中,mPEG可延長(zhǎng)藥物體內(nèi)循環(huán)時(shí)間,PGA側(cè)鏈游離羧基顯負(fù)電,通過(guò)正負(fù)電荷相互吸附,荷正電藥物DOX·HCl與mPEG-PGA生成高分子離子交聯(lián)聚合物mPEG-PGA-DOX,通過(guò)靜電作用和疏水間分子作用力在水溶液自發(fā)聚集形成長(zhǎng)約300nm左右,Zeta電勢(shì)為-15.9 mV的納米棒,載藥納米棒具備較高的載藥量(50.8%)和包封率(90.2%)；體外釋放實(shí)驗(yàn)表明,與鹽酸多柔比星原料藥相比,載藥納米棒釋放緩慢并且具備pH敏感性,載藥納米棒在酸性環(huán)境下釋放較快；人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和人肺癌細(xì)胞A549體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明,載藥納米棒抗腫瘤活性?xún)?yōu)于原料藥；細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)表明載藥納米棒均可以被MCF-7和A549細(xì)胞攝取入胞,尤其在A549細(xì)胞系中,載藥納米棒更易被A549腫瘤細(xì)胞攝取入胞；溶血實(shí)驗(yàn)表明人工合成的兩親性聚肽具備良好的生物相容性,并且離子交聯(lián)后載藥納米棒mPEG-PGA-DOX可以顯著降低原料藥的溶血性；以wistar大鼠為模型,體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)表明載藥納米棒呈現(xiàn)良好的藥物緩釋特征。以上實(shí)驗(yàn)表明離子交聯(lián)后載藥納米棒mPEG-PGA-DOX在抗癌藥物傳遞體系領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用潛力。
【關(guān)鍵詞】：聚乙二醇-聚谷氨酸 鹽酸多柔比星 納米棒 靜電作用 腫瘤治療
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R943
【目錄】：

• 中文摘要14-16
• 英文摘要16-19
• 符號(hào)說(shuō)明19-22
• 緒論22-32
• 癌癥22-23
• 藥物傳遞體系23-30
• 脂質(zhì)體24-25
• 兩親性聚合物25-27
• 兩親性聚肽27-30
• 本課題設(shè)計(jì)思路30-32
• 第一章 mPEG-PGA兩親聚肽的合成、表征及聚集行為研究32-44
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料與儀器32-33
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料32
• 1.2 儀器32-33
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法33-35
• 2.1 兩親性聚肽mPEG-PGA制備33-35
• 2.1.1 端氨基聚乙二醇單甲醚mPEG-NH_2制備33-34
• 2.1.2 聚乙二醇單甲醚-聚谷氨酸mPEG-PGA的制備34-35
• 2.2 分析檢測(cè)35
• 2.2.1 ~1H-NMR測(cè)定35
• 2.2.2 FT-IR測(cè)定35
• 2.3 mPEG-PGA聚集行為的研究35
• 2.3.1 芘分子熒光探針?lè)?/span>35
• 2.3.2 透射電鏡法35
• 2.3.3 動(dòng)態(tài)光散射法35
• 3. 結(jié)果與討論35-43
• 3.1 兩親性聚肽mPEGP-PGA合成36
• 3.1.1 mPEG-NH_2的合成36
• 3.1.2 開(kāi)環(huán)聚合反應(yīng)36
• 3.2 產(chǎn)物結(jié)構(gòu)確認(rèn)36-40
• 3.2.1 ~1H-NMR36-39
• 3.2.2 FT-IR測(cè)定39-40
• 3.3 mPEG-PGA聚集行為的測(cè)定40-43
• 3.3.1 芘分子熒光探針?lè)y(cè)定CAC40-41
• 3.3.2 聚集形貌41-42
• 3.3.3 粒徑和Zeta電勢(shì)42-43
• 4. 本章小結(jié)43-44
• 第二章 載藥聚合物的制備及作為藥物遞送載體的評(píng)價(jià)44-62
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料與儀器44
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料44
• 1.2 儀器44
• 2. 載藥聚合物的制備和表征44-45
• 2.1 載藥聚合物制備44-45
• 2.2 載藥聚合物聚集形態(tài)表征45
• 2.2.1 TEM觀察形態(tài)45
• 2.2.2 粒徑和電勢(shì)45
• 2.2.3 CD譜觀察二級(jí)構(gòu)象45
• 3 載藥量、包封率測(cè)定45-49
• 3.1 鹽酸多柔比星含量測(cè)定方法的建立45-49
• 3.1.1 儲(chǔ)備液配置45-46
• 3.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇46
• 3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制46-47
• 3.1.4 精密度試驗(yàn)47-48
• 3.1.5 回收率試驗(yàn)48-49
• 3.2 載藥量、包封率計(jì)算49
• 4. 鹽酸多柔比星體外釋放行為的測(cè)定49-53
• 4.1 鹽酸多柔比星含量測(cè)定方法的建立49-52
• 4.1.1 色譜條件50
• 4.1.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)50-51
• 4.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制51-52
• 4.1.4 精密度試驗(yàn)52
• 4.1.5 回收率試驗(yàn)52
• 4.2 鹽酸多柔比星體外釋放行為的測(cè)定52-53
• 5. 結(jié)果與討論53-61
• 5.1 載藥聚合物的制備53-54
• 5.2 載藥聚合物水溶液聚集行為的研究54-57
• 5.3 載藥量包封率57-58
• 5.4 鹽酸多柔比星體外釋放行為58-61
• 6. 本章小結(jié)61-62
• 第三章 載鹽酸多柔比星的聚合物納米棒體外抗腫瘤評(píng)價(jià)62-77
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料與儀器62
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料62
• 1.2 儀器62
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法62-66
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)62-64
• 2.1.1 準(zhǔn)備工作62
• 2.1.2 細(xì)胞復(fù)蘇62-63
• 2.1.3 傳代與換液63
• 2.1.4 計(jì)數(shù)與接種63-64
• 2.1.5 細(xì)胞凍存64
• 2.2 細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)64-65
• 2.2.1 mPEG-PGA材料的細(xì)胞毒性64-65
• 2.2.2 載藥納米棒的抗腫瘤活性65
• 2.3 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)65-66
• 2.3.1 熒光顯微鏡法65
• 2.3.2 流式細(xì)胞術(shù)65-66
• 3. 結(jié)果與討論66-75
• 3.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)66-68
• 3.1.1 mPEG-PGA對(duì)MCF-7細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)66-67
• 3.1.2 mPEG-PGA對(duì)A549細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)67-68
• 3.2 抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)68-73
• 3.2.1 載藥納米棒對(duì)MCF-7抗腫瘤活性68-70
• 3.2.2 載藥納米棒對(duì)A549抗腫瘤活性70-73
• 3.3 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)73-75
• 3.3.1 熒光顯微鏡技術(shù)73-74
• 3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)74-75
• 4. 本章小結(jié)75-77
• 第四章 載藥納米棒體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià)77-88
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料和儀器77
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料77
• 1.2 儀器77
• 1.3 動(dòng)物77
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法77-83
• 2.1 溶血試驗(yàn)77-78
• 2.1.1 2%紅細(xì)胞混懸液(v/v)制備77-78
• 2.1.2 溶血率測(cè)定78
• 2.2 血漿鹽酸多柔比星含量測(cè)定方法78-83
• 2.2.1 色譜條件78-79
• 2.2.2 血漿樣品預(yù)處理79
• 2.2.3 專(zhuān)屬性考察79
• 2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制79-81
• 2.2.5 精密度試驗(yàn)81
• 2.2.6 回收率實(shí)驗(yàn)81-83
• 2.3 載鹽酸多柔比星納米棒體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià)83
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)方法83
• 2.3.2 血漿濃度測(cè)定83
• 2.3.3 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算83
• 3. 結(jié)果與討論83-86
• 3.1 溶血實(shí)驗(yàn)83-84
• 3.2 血藥濃度測(cè)定84-85
• 3.3 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)擬合85-86
• 4. 本章小結(jié)86-88
• 全文結(jié)論88-90
• 參考文獻(xiàn)90-98
• 致謝98-99
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄99-100
• 代表性SCI論文100-104
• 附件104

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1 曹云偉，柴向東，，陳思光，姜月順，李鐵津;幾種具有電子給－受體結(jié)構(gòu)的兩親性化合物的合成及鑒定[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào);1995年02期

2 孫瑞琴;淳遠(yuǎn);馬丙麗;李平;董家

本文編號(hào)：263856