本文關(guān)鍵詞：基于P-gp靶點(diǎn)天然小分子化合物DHA和SM抗腫瘤多藥耐藥作用及其機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前,人類生存環(huán)境改變,在一些不利的外部環(huán)境作用下,腫瘤的發(fā)病率正在逐步上升,成為嚴(yán)重威脅人類健康、高死亡率的常見疾病�；瘜W(xué)治療是臨床上治療腫瘤的最常見和有效的策略。然而,腫瘤多藥耐藥(MDR)已成為臨床化療失敗的重要原因,故抗耐藥研究和發(fā)現(xiàn)耐藥逆轉(zhuǎn)劑成為抗腫瘤研究的重要方面。來源于自然界的動(dòng)植物、微生物以及海洋生物的天然藥物是新藥研發(fā)的重要源泉。多酚化合物是存在于自然界的最為普遍的天然化合物,雙聯(lián)芐(Bisbibenzyl)是苔鮮植物中特有的一類天然多酚類化合物,具有昆蟲拒食、抗微生物、抗氧化、抗真菌、細(xì)胞毒、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和抗血小板凝集等顯著而廣泛的生物學(xué)活性。近期研究報(bào)道表明,雙聯(lián)芐化合物可以作用于P-糖蛋白、環(huán)氧合酶等靶點(diǎn)產(chǎn)生生物學(xué)活性。目前,已從苔鮮植物中分離得到了許多具有耐腫瘤多藥耐藥的活性化合物。本論文的研究對(duì)象之一Dihydroptychantol A (DHA)是山東大學(xué)天然藥物研究所從苔蘚植物狹葉花萼苔中得到的新型聯(lián)芐化合物。該化合物已經(jīng)被全合成,同時(shí)也證實(shí)了其抗真菌活性。為了研究該化合物的其他生物活性,我們首先利用多種多藥耐藥細(xì)胞株和其親本的敏感細(xì)胞株,用MTT法篩選了包括雙聯(lián)芐在內(nèi)的多個(gè)多酚化合物的逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)DHA的細(xì)胞毒性較低(對(duì)K562/A02、K562細(xì)胞株的IC50均大于40μM),卻能明顯逆轉(zhuǎn)多藥耐藥腫瘤細(xì)胞株對(duì)阿霉素的耐藥性。隨后,我們進(jìn)一步展開了DHA在體外逆轉(zhuǎn)MDR作用機(jī)制的研究。以多藥耐藥的阿霉素抗性的K562/A02細(xì)胞為試驗(yàn)對(duì)象,研究了DHA及其衍生物(化合物1-3)的抗腫瘤活性。MTT試驗(yàn)結(jié)果表明,DHA在四種化合物中的抗腫瘤活性是最強(qiáng)的；流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明,不同濃度的DHA處理K562/A02細(xì)胞后,阿霉素和羅丹明123在K562/A02細(xì)胞中的累積明顯增加。同時(shí)還減少了羅丹明123的泵出量,說明DHA抑制了P-gp的外排泵功能。用流式細(xì)胞儀和RT-PCR對(duì)P-gp的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DHA處理K562/A02細(xì)胞24小時(shí),P-gp蛋白表達(dá)和MDR1 mRNA的表達(dá)均減少,具有濃度依賴性。但DHA對(duì)其親本細(xì)胞K562細(xì)胞無(wú)明顯影響。以上試驗(yàn)結(jié)果證實(shí),DHA能夠有效地逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥,該作用與其抑制P-gp的功能、蛋白表達(dá)和降低MDR1 mRNA水平有關(guān)。本論文的另一部分內(nèi)容是研究從中藥茄屬類植物龍葵中分離得到的甾體生物堿類化合物龍葵堿Solamargine(SM)單體對(duì)多藥耐藥細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及機(jī)制探討,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該化合物具有高效低毒的特點(diǎn)。這一部分實(shí)驗(yàn)觀察了化合物SM對(duì)三種耐藥細(xì)胞K562/A02, KB/VCR和H460/paclitaxel (Taxol)的細(xì)胞毒性和相關(guān)機(jī)制。MTT結(jié)果顯示,SM能明顯抑制三種耐藥細(xì)胞株的增殖,與對(duì)應(yīng)的敏感細(xì)胞株K562,KB和H460相比具有相同甚至更敏感的生長(zhǎng)抑制作用。DAPI核染色和流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),SM可顯著促進(jìn)耐藥K562/A02細(xì)胞凋亡。RT-PCR結(jié)果顯示SM能夠下調(diào)MDR1的mRNA水平,同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SM能夠抑制P-gp的表達(dá)水平。此外,蛋白印記實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SM處理的耐藥細(xì)胞中bcl-2和actin蛋白表達(dá)降低,bax蛋白表達(dá)升高。以上結(jié)果提示SM能夠明顯誘導(dǎo)MDR腫瘤細(xì)胞的凋亡,這與肌動(dòng)蛋白裂解和MDR1表達(dá)下調(diào)有關(guān)。這種化合物值得作為一種可以繞過MDR機(jī)制的用于治療MDR腫瘤的潛在藥物進(jìn)行深入的研究。天然藥物在癌癥的化療中扮演著非常重要的角色。本論文的兩種天然產(chǎn)物DHA和SM都具有抗腫瘤多藥耐藥作用,但機(jī)制不同,都是具有潛在開發(fā)價(jià)值的抗癌先導(dǎo)物,值得更進(jìn)一步的研究。
【關(guān)鍵詞】：雙聯(lián)芐化合物 龍葵堿 多藥耐藥 p-糖蛋白 凋亡
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要11-13
• ABSTRACT13-16
• 縮略詞說明16-18
• 第一章 前言18-28
• 1 研究背景18-19
• 1.1 腫瘤耐藥是臨床化療失敗的最主要原因18
• 1.2 腫瘤耐藥的主要發(fā)生機(jī)制18-19
• 2 腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥的主要靶點(diǎn)機(jī)制及途徑19-24
• 2.1 P-gp是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥的主要靶點(diǎn)機(jī)制19-21
• 2.2 基于P-gp為靶點(diǎn)的抑制劑是逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的有效途徑之一21-22
• 2.3 多酚類中的雙聯(lián)芐化合物以P-gp為靶點(diǎn)發(fā)揮逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的作用22-24
• 3 天然產(chǎn)物庫(kù)是發(fā)現(xiàn)腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑的寶庫(kù)24-28
• 3.1 雙聯(lián)芐化合物25-27
• 3.2 龍葵堿27-28
• 第二章 雙聯(lián)芐類化合物DHA逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥及其機(jī)制的研究28-43
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28-30
• 1.1 細(xì)胞株28
• 1.2 藥品及試劑28-29
• 1.3 主要儀器設(shè)備29-30
• 2 實(shí)驗(yàn)方法30-32
• 2.1 細(xì)胞毒性和多藥耐藥逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)30-31
• 2.2 細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積實(shí)驗(yàn)31
• 2.3 RT-PCR方法檢測(cè)MDR1的mRNA表達(dá)31
• 2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞P-gp蛋白表達(dá)31
• 2.5 細(xì)胞內(nèi)羅丹明123的蓄積與泵出試驗(yàn)31-32
• 2.6 細(xì)胞松弛素B預(yù)處理后DHA對(duì)細(xì)胞內(nèi)羅丹明123蓄積的影響32
• 2.7 數(shù)據(jù)分析32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-40
• 3.1 DHA及其衍生物對(duì)阿霉素細(xì)胞毒性的影響以及細(xì)胞耐藥逆轉(zhuǎn)效應(yīng)32-35
• 3.2 DHA增加細(xì)胞內(nèi)阿霉素的蓄積濃度35-36
• 3.3 DHA降低P-gp的表達(dá)36-38
• 3.4 DHA對(duì)細(xì)胞內(nèi)羅丹明123蓄積和泵出的影響38-39
• 3.5 細(xì)胞松弛素B預(yù)處理后DHA對(duì)細(xì)胞內(nèi)羅丹明123蓄積的影響39-40
• 4 討論40-43
• 第三章 龍葵堿SM對(duì)多藥耐藥腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及機(jī)制研究43-56
• 1 實(shí)驗(yàn)材料43-44
• 1.1 細(xì)胞株43
• 1.2 化學(xué)試劑43-44
• 1.3 試劑配制44
• 1.4 實(shí)驗(yàn)儀器44
• 2 實(shí)驗(yàn)方法44-49
• 2.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)44-45
• 2.2 DAPI染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡45
• 2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞調(diào)亡45
• 2.4 蛋白印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá)水平45-48
• 2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)P-gp蛋白表達(dá)48
• 2.6 RT-PCR法檢測(cè)MDR1的mRNA表達(dá)水平48-49
• 2.7 免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞骨架蛋白actin表達(dá)水平49
• 2.8 統(tǒng)計(jì)分析49
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-54
• 3.1 SM抑制多藥耐藥腫瘤細(xì)胞增殖49-50
• 3.2 SM誘導(dǎo)耐阿霉素的K562/A02細(xì)胞發(fā)生凋亡50-51
• 3.3 SM抑制K562/A02細(xì)胞P-gp的表達(dá)51-53
• 3.4 SM抑制K562/A02和KB/VCR細(xì)胞中actin的表達(dá)53-54
• 4 討論54-56
• 第四章 全文結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文66-67
• 附件67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 蘆穎;李慶華;龐天翔;;腫瘤細(xì)胞內(nèi)pH值改變與腫瘤多藥耐藥的關(guān)系[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2007年09期

  本文關(guān)鍵詞：基于P-gp靶點(diǎn)天然小分子化合物DHA和SM抗腫瘤多藥耐藥作用及其機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：258913