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閆廣利等：中藥血清藥物化學研究概況及其理論和方法拓展

具有性中藥是在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導下應(yīng)用的天然藥物，味歸經(jīng)、功能主治、方劑配伍等獨特的藥物理論。隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化和國際化的發(fā)展，解析中藥在中醫(yī)臨床應(yīng)用中發(fā)揮其獨特療效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)已成為亟待解決的中醫(yī)藥學的關(guān)鍵科學問題

［1］

血清指紋圖譜為導向從藥材中靶向分離制備原形入血成分；收集足量給藥大鼠的尿液，從中靶向分離制備代謝產(chǎn)物，通過質(zhì)譜、核磁共振等光譜技術(shù)進行準確結(jié)構(gòu)鑒定

［14］

。

隨著液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，特別是超高效液相色譜串聯(lián)高分辨中藥血中移行成分的檢測能力質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展和引入，和鑒定速度得到迅速提升

［15-16］

。

［2］

中藥是一個復(fù)雜的化學巨系統(tǒng)，傳統(tǒng)的藥效追蹤分離，促進了中藥血清藥物化學的

及活性成分篩選的天然藥物化學方法繁瑣費時，雖然從中藥諸如抗瘧新藥青蒿中成功發(fā)現(xiàn)了一批確有療效的活性成分，素

［3］

［4］

、治療老年癡呆病的石杉堿甲、治療心腦血管病的川

Q/TOF-MS技術(shù)分析了茵普及和深化。作者首先利用UPLC-根據(jù)精陳蒿湯化學成分及灌胃給予大鼠后的血中移行成分，確質(zhì)量匹配和二級質(zhì)譜解析共鑒定了21個血中移行成分

［17］

芎嗪

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等，但此方法是一條以發(fā)現(xiàn)新化合物和活性成分為主，進一步經(jīng)體內(nèi)經(jīng)時變化規(guī)律分析，優(yōu)選出具有良好體

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要目的的研究模式，而不能體現(xiàn)中藥多成分協(xié)同作用發(fā)揮整“活性成分”體生物效應(yīng)的特點，所獲得的對于詮釋中藥的作用模式及特點仍十分有限。

根據(jù)現(xiàn)代藥物學理論，中藥發(fā)揮功效的前提應(yīng)該是其活性成分能夠被吸收進入血液（個別直接作用腸道的藥物除外），進而被輸送到作用靶點，然而這個過程涉及腸道菌群代肝藥酶代謝、跨膜轉(zhuǎn)運吸收等生物過程，而且期間存在藥謝、

物之間的相互作用，因此，中藥真正發(fā)揮功效的活性成分與其所含的固有成分往往不同，只有從血中發(fā)現(xiàn)直接作用的活性物質(zhì)及追朔前體化合物才能真正闡明表達中藥臨床療效20世紀90年代初，，的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。基于此，王喜軍教授經(jīng)“中藥血清藥物化學”過大量實踐，率先提出了理論及研究內(nèi)容，并將其內(nèi)涵定義為：以經(jīng)典的藥物化學研究手段和方法為基礎(chǔ)，運用現(xiàn)代分離技術(shù)及多維聯(lián)用技術(shù)，分析鑒定或表征口服中藥后人/動物血清中移行成分，闡明其活性與中藥確定中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)并研究其體內(nèi)過程傳統(tǒng)藥效相關(guān)性，的應(yīng)用科學

［6-7］

7-內(nèi)行為的藥動學標志成分6，二甲氧基香豆素、京尼平苷和大黃酸湯

［19］

。隨后利用UPLC-Q/TOF-MS技術(shù)對茵陳四逆

［20］［21］［22］［23］

、生脈散、溫心方、開心散、芍藥甘草湯、雙［24］

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、知柏地黃丸、酸棗仁湯等中藥方劑的血中

黃連方

移行成分進行了分析，確定了這些方劑的潛在藥效物質(zhì)基MS技術(shù)進行了大量中藥及復(fù)礎(chǔ)。國內(nèi)很多學者也利用LC-例如黃連解毒湯方的血中移行成分分析，丸

［28］［32］

［27］

、麝香保心

、葛根芩連湯

［29］

、四逆湯

［30］

［31］

、少腹逐瘀湯、四逆［34］、仙靈骨葆膠囊等中

散等中藥方劑以及復(fù)方丹參片

［33］

使從中藥口服后被吸收進入體內(nèi)的成分中篩選藥效物成藥，

質(zhì)基礎(chǔ)的研究思路和方法成為共識。

血中移行成分的檢測是中藥血清藥物化學的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)為血中移行成分的檢測和鑒定提供了有效的分析手段，能夠更全面地獲得中藥體內(nèi)直接作用物質(zhì)的信息。然而，血中內(nèi)源性成分同時也獲得了良好的檢測，嚴重必須引進液質(zhì)聯(lián)用數(shù)據(jù)的處理方干擾了藥物成分的辨識，法

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。該理論及方法體現(xiàn)了機體對藥物的作用。質(zhì)量短缺過濾技術(shù)（massdefectfiltering，MDF）主要

（吸收、代謝）和藥物之間在體內(nèi)過程中的相互作用，研究結(jié)果不僅揭示中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為解析方劑配伍規(guī)律、闡釋中藥藥理學特性及創(chuàng)新藥物設(shè)計等中醫(yī)藥關(guān)鍵科學問題提供了科學有效的方法11.1

研究概況

血中移行成分分析

中藥血清藥物化學的根本任務(wù)是

［8-10］

用于同系物成分的提取，它通過設(shè)定適當?shù)馁|(zhì)量短缺范圍和MS圖譜進行處理，實施多重過濾對高分辨LC-過濾掉大量內(nèi)源性干擾物質(zhì)峰，使具有相近質(zhì)量短缺值的同系物及其代謝物明顯暴漏出來而易于識別堿成分

［37］

［36］

。。作者將其應(yīng)用與茵陳四逆

湯中烏頭生物堿類成分的提取，鑒定表征了64個烏頭生物

。背景扣除（backgroudsubtraction）是以空白生物

樣品為參照，將含藥生物樣品圖譜中與空白生物樣品相同的離子過濾掉的一種技術(shù)，該方法最為簡單，不需要任何設(shè)置即可獲得主要含有藥源性成分的色譜圖

［38］

解析中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。中藥所含成分雖然復(fù)雜，但只有被吸收入血的成分才能發(fā)揮作用，這些成分包括中藥所含成分的原形成分和代謝產(chǎn)物；通過分析中藥口服給藥后血液中的成分，確定中藥的體內(nèi)直接作用物質(zhì)，是快速、準確地研究確定中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的有效途徑。

DAD技術(shù)由于技術(shù)手段的限制，早期主要是應(yīng)用HPLC-分離和鑒和柱色譜制備技術(shù)對中藥血中移行成分進行分析、定

［11］

。一些藥物代謝

物分析軟件，例如WatersMetabolynx和UNIFY，將上述技術(shù)融為一體，并結(jié)合代謝途徑的預(yù)測，實現(xiàn)數(shù)據(jù)自動提取與代謝物輔助鑒定除

［40］

［39］

。一些質(zhì)譜儀，例如ABSCIEXTripleTOF，

能夠?qū)崿F(xiàn)數(shù)據(jù)采集前的多重質(zhì)量短缺過濾和動態(tài)背景扣

，有助于減少離子抑制，增加檢測靈敏度。上述技術(shù)用于對單張色譜圖進行處理，然而血中移行成分確定要求進行多個動物的重現(xiàn)，這時每個樣品都進行處理就比較繁瑣，主DA）成分分析法（PCA）、正交偏最小二乘判別分析法（OPLS-等多變量統(tǒng)計分析方法能夠提取一組樣品中共有的血中移行成分，方便了血中移行成分的確定。為充分利用上述技術(shù)

。六味地黃丸血中移行成分的分析堪稱是早期中藥血

DAD技術(shù)對六味清藥物化學應(yīng)用的典范。首先利用HPLC-地黃丸及口服給予大鼠后的血中移行成分進行分析，建立含DAD指紋圖譜，藥血清HPLC-并通過與體外樣品指紋圖譜、空白血清指紋圖譜進行比對，確定7個原形入血成分和4個代謝產(chǎn)物

［12-13］

。為對血中移行成分進行鑒定，以建立的含藥

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