本文關(guān)鍵詞：沉默信號調(diào)節(jié)因子在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達

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【摘要】：慢性鼻竇炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）是耳鼻喉科的常見疾病，為鼻-鼻竇黏膜的慢性炎癥性病變，在病理上主要表現(xiàn)為鼻竇和鼻腔粘膜炎性改變，并有水腫。鼻息肉發(fā)病率高，且容易復(fù)發(fā)，最新的歐洲鼻竇炎和鼻息肉診療意見書報道每年鼻息肉患病率可達10.9%，雖經(jīng)鼻內(nèi)鏡手術(shù)與局部糖皮質(zhì)激素治療，仍有20%左右復(fù)發(fā)，是目前鼻科疾病治療的一大難點。鼻息肉給患者生活、學(xué)習(xí)、工作造成諸多的障礙，給社會造成嚴(yán)重的影響和沉重的負(fù)擔(dān)。鼻息肉治療和預(yù)防成為亟待解決的一項重大的醫(yī)學(xué)和社會問題。 慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)病機制至今未完全闡明，目前認(rèn)為其發(fā)病原因是局部微環(huán)境中的炎癥性反應(yīng)，多種細胞因子在局部病灶內(nèi)長期存在并使組織發(fā)生一系列的病理變化。近年來研究發(fā)現(xiàn)一些內(nèi)源性蛋白或外源性蛋白可通過病原相關(guān)分子模式受體結(jié)合被免疫細胞識別，刺激下游的信號通路，促進炎性因子分泌，從而發(fā)揮了炎癥反應(yīng)。目前，已知的DAMPs家族，如PLUNC和HMGB1。前期，我們研究發(fā)現(xiàn)HMGB1蛋白在鼻息肉組織中較正常鼻黏膜組織中表達增高，體外脂多糖可以誘導(dǎo)鼻黏膜上皮細胞細胞核內(nèi)HMGB1蛋白的主動轉(zhuǎn)移和釋放，這提示HMGB1可以從鼻黏膜上皮細胞內(nèi)被釋放出來，通過激活其他細胞參與免疫應(yīng)答或炎癥反應(yīng)，從而參與鼻息肉的慢性炎癥過程。但HMGB1蛋白從細胞核內(nèi)向細胞質(zhì)的移位和釋放的調(diào)節(jié)機制尚未闡明。Scaffidi等人研究發(fā)現(xiàn)，乙�；富钚栽鰪姇䦟�(dǎo)致細胞核內(nèi)HMGB1高乙�；�，從而引起HMGB1釋放至細胞質(zhì)內(nèi)，然后以分泌性溶酶體為載體，將HMGB1分泌到胞外，進而參與炎癥的發(fā)生。根據(jù)以上的理論，，我們將從具有去乙�；饔玫某聊畔⒄{(diào)節(jié)因子入手，了解其在鼻黏膜組織中的表達和作用，初步探討沉默信息調(diào)節(jié)因子參與調(diào)節(jié)HMGB1蛋白功能。沉默信息調(diào)節(jié)因子（silent information regulator2, Sir2）是依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的第三類組蛋白去乙�；�。新近Nature等文獻報道沉默信號調(diào)節(jié)因子中Sirtuins蛋白家族是參與調(diào)控衰老、氧化應(yīng)激和炎癥機制的上游信號通路，在呼吸道上皮細胞中病原感染和細胞衰老中起至關(guān)重要的作用。鼻息肉的發(fā)病機制中可能也存在經(jīng)Sirtuins信號傳導(dǎo)通路的干預(yù)和調(diào)控。本研究通過檢測鼻息肉組織中沉默信號調(diào)節(jié)因子1和2(Sirt1,2)的陽性率和陽性細胞數(shù)，闡明從組織細胞水平上找到鼻息肉和正常鼻黏膜組織的區(qū)別；通過體外鼻黏膜上皮細胞培養(yǎng)，觀察Sirt6在上皮細胞中的功能，從而深入探討他們在鼻息肉發(fā)病中的作用，為進一步改善其預(yù)防和治療水平提供理論依據(jù)。 第一部分Sirt1和Sirt2在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達 目的：研究Sirt1和Sirt2在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達水平，以探討其在鼻息肉形成過程中發(fā)揮的作用。 方法：收集鼻息肉組織38例和正常鼻黏膜組織8例，分別進行Western blot和組織切片免疫組化檢測總Sirt1和Sirt2蛋白表達及其在細胞質(zhì)、細胞核分布。結(jié)果：1.免疫組化顯示Sirt1主要分布在正常鼻黏膜中腺體細胞內(nèi)，鼻息肉組織中主要分布在浸潤的炎性細胞內(nèi)，腺體細胞中未見或少見其表達；Sirt2主要分布在上皮細胞漿內(nèi)，正常對照組明顯高于鼻息肉組。2. Western blot顯示正常對照組的Sirt1和Sirt2蛋白水平明顯高于鼻息肉組（P值均小于0.01）。結(jié)論：正常鼻黏膜中有一定量Sirt1和Sirt2表達，其表達降低可能參與了慢性鼻竇炎伴鼻息肉的形成和炎性反應(yīng)過程。 第二部分RNA干擾抑制Sirt6基因表達對鼻黏膜上皮細胞纖毛分化和HMGB1表達的影響 目的：觀察siRNA Sirt6對鼻黏膜上皮細胞纖毛分化和HMGB1表達的影響。 方法：脂質(zhì)體介導(dǎo)的siRNA Sirt6轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的鼻息肉上皮細胞后，Westernblot檢測鼻黏膜上皮細胞中HMGB1和Sirt6蛋白的表達；熒光顯微鏡下觀察Sirt6下調(diào)后HMGB1蛋白在細胞中的分布以及纖毛的改變。 結(jié)果：與未轉(zhuǎn)染組比較，siRNA Sirt6轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的鼻息肉上皮細胞1d，2d和3d后，Western blot法檢測鼻黏膜上皮細胞中Sirt6有高的下調(diào)效應(yīng)，細胞免疫熒光法顯示HMGB1蛋白從胞核向胞漿移位，并且上皮細胞形態(tài)改變，纖毛數(shù)量隨時間延長明顯減少。 結(jié)論：質(zhì)體介導(dǎo)的siRNA Sirt6轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的鼻黏膜上皮細胞，能夠下調(diào)細胞中Sirt6表達，誘導(dǎo)HMGB1的移位和釋放，纖毛數(shù)量減少，提示Sirt6蛋白在鼻黏膜上皮細胞的分化和炎性反應(yīng)中可能發(fā)揮了重要作用。
【關(guān)鍵詞】：沉默信號調(diào)節(jié)因子 慢性鼻竇炎 鼻息肉 上皮細胞 高遷移率族蛋白
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R765
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 第一部分 Sirt1 和 Sirt2 在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達14-27
• 一．材料14-15
• 二．實驗方法15-19
• 三．統(tǒng)計分析19-20
• 四．結(jié)果20-23
• 五．討論23-27
• 第二部分 RNA 干擾抑制 Sirt6 基因表達對鼻黏膜上皮細胞纖毛分化和 HMGB1 表達的影響27-39
• 一．材料27-28
• 二．實驗方法28-31
• 三．統(tǒng)計分析31-32
• 四．結(jié)果32-35
• 五．討論35-39
• 綜述39-45
• 參考文獻45-54
• 碩士在讀期間發(fā)表及已完成的論文54-55
• 致謝55-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王成碩,董震,楊占泉;Toll樣受體mRNA在鼻息肉中的表達及意義[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2004年03期

2 侯長春;趙海金;李文軍;蔡紹曦;;過氧化氫誘導(dǎo)支氣管上皮細胞高遷移率族蛋白1主動釋放[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2012年08期

3 張丹丹;趙海金;周麗芹;宋甲富;董航明;鄒飛;蔡紹曦;;高遷移率族蛋白B1協(xié)同白介素-1β可增加人氣道上皮細胞白介素-8的表達[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2012年12期

本文編號：993344